Modell-basiertes Bio-Intraleber-Gallengefässer-Krebs-Organkulturmedium-Set

Humanes Intrahepatisches Cholangiokarzinom Organoid Kit

Mediumsatz für menschlichen intrahepatischen Gallengefächerkrebs

1、 Produktbeschreibung

Modell-basiertes Human Intra-Leber-Gallengefässer-Krebs-Organ-Kulturmedium-Kit (Humanes Intrahepatisches Cholangiokarzinom Organoid KitEs ist ein chemisch definiertes Zellkulturmedium für den Aufbau und die Aufrechterhaltung eines menschlichen intrahepatischen Gallengefäßkrebsorgans. Tumoroide, die von Patienten stammen, fassen das Genom und die pathologischen Merkmale des ursprünglichen Tumors zusammen und bieten daher große Aussichten in der medizinischen Forschung und der Präzisionsmedizin.

2、 Produktinformation

3、 Andere eigene Materialien und Reagenzien

4、 Vorbereitung von Medien für menschliche intrahepatische Gallengefässer-Krebs-Organe

Medium für intrahepatische Gallengefäße-Krebsorgane mit sterilen Bedienungstechniken. Hier ist die Formulierung10mlBeispiele von Medien können bei unterschiedlichen Bedürfnissen entsprechend angepasst werden.

1、 Intralgelenkrebs-Organkulturfaktor auf Eis aufgefrorenB(50x)und intrahepatische Gallengefäße Krebs OrgankulturfaktorenC(250x)。

Hinweis: Nach dem Auffrieren wird empfohlen, die Kultivfaktor für intrahepatische Gallengefäße-Krebs-OrganeB(50x)In der Leber Gallengefäße Krebs OrgankulturfaktorenC(250x). Aufbewahrung nach der einzelnen Aufteilung, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

2、 geben200 mlOrgankulturfaktoren für intrahepatischen GallengefäßkrebsB(50x)，40μLOrgankulturfaktoren für intrahepatischen GallengefäßkrebsC(250x)Hinzufügen9,76 mlIn einem grundlegenden Medium für die Kultivierung von intrahepatischen Gallengefäßen-Krebsorganen, vollständig gemischt und hergestellt10mlMedium für intrahepatischen Gallengefäßkrebs.

Hinweis: nach der Formulierung des Mediums für intrahepatische Gallengefäße-Krebs-Organe können in2-8°CLagerung, empfohlen innerhalb von zwei Wochen zu verwenden. Organkulturfaktoren für intrahepatischen GallengefäßkrebsB(50x)Enthält Bakterien und Pilz Antibiotika.

5、 Ursprüngliche Kultur von intrahepatischen Gallengefässerkrebsorganen von Patienten

Hinweis: Studien mit wichtigen menschlichen Gewebematerialien müssen allen einschlägigen institutionellen und staatlichen Vorschriften entsprechen. Bevor das primäre menschliche Gewebematerial gesammelt wird, muss die informierte Zustimmung aller Probanden eingeholt werden.

a) Erstellung der primären menschlichen intrahepatischen Gallengefäßkrebsorgane

1、 Sammeln Sie mit einer Zentrifuge die Fragmente des primären intrahepatischen Gallengefäßerkrebs in einer eiskalten primären Gewebespeicherlösung. Halten Sie die Gewebeproben auf4℃Bis die Trennung beginnt.

2、 Beurteilen Sie, ob die gewonnenen Gewebefragmente aus dem Epithelium bestehen. Wenn Fett oder Muskelgewebe vorhanden ist, entfernen Sie diese nicht-epithelialen Bestandteile so viel wie möglich mit einem Messer oder einer Pinzette unter einem anatomischen Mikroskop. Wenn es kein Fett oder Muskelgewebe gibt, gehen Sie sofort zum nächsten Schritt.

3、 mit einer epitelialen Organbasis oderDPBSSpülen Sie das Gewebe zweimal.

4、 Verwenden Sie ein Messer oder schneiden Sie Gewebe in1-3 mm³Kleine Stücke werden in eine Zellpetrieschale gelegt.

5、 in37℃Verwenden10mlTumorgewebe Verdauungslösung in15 mlVerdauung Gewebefragmente in der Zentrifuge, Verdauungszeit variiert, von30Minuten.1.5Stunden nicht warten. Überwachen Sie sorgfältig den Verdauungsprozess und können den Verdauungsgrad entsprechend beobachten. Wenn die meisten Organisationsstücke durchlaufen können1 mlBeim Absaugen des Pipettenkopfes ist der Verdauungsprozess abgeschlossen.

6、 gebenFBSZu der Gewebeverdauungsmischung hinzugefügt, wobei die Endkonzentration2%und verwenden100 μmZellfilter filtern.

7、 Sammeln und in4°Cnach unten250gZentrifugal gefilterte Zellen3Minuten. Im Falle einer sichtbaren roten Abfällung die Oberflüssigkeit inhalieren und verwenden2 mlRote Blutkörperchen-Lysate resuspendiert und spaltet rote Blutkörperchen bei Raumtemperatur1Minuten und in4°Cnach unten250gZentrifugieren3Minuten.

8、 Absaugen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Fällung in dem Basismedium, in4°Cnach unten250gZentrifugieren3In einer Minute wiederholen Sie diesen Schritt.

9、 Absaugen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Fällung wieder in dem Matrixkleber. Der Kleber sollte auf dem Eis aufbewahrt werden, um zu verhindern, dass er sich verfestigt. den Prozess so schnell wie möglich durchführen. Die Menge des verwendeten Matrix-Klebstoffs hängt von der Partikelgröße ab. etwa10，000Eine Zelle sollte geimpft werden.25 μLIn der Substration.

10、 Nicht zu verdünnen der Matrix-Kleber (die Matrix-Kleber-Verhältnis sollte>70%(Volumen der Substrate)/Gesamtvolumen)), da dies die richtige Bildung von festen Tropfen hemmen kann. Organoide enthaltende Substrate auf24Der Boden der Lochzellenkulturplatte, jeder Tropfen rund um das Lochzentrum ca.30 μL。

Hinweis: Sobald die Organoide wieder in der Matrix-Kleber suspendiert sind, so schnell wie möglich die Platte zu pflanzen, da die Matrix-Kleber in der Probe oder Pipette Saugkopf kondensieren kann. Lassen Sie die Substratpartikel nicht die Rohrwand berühren.

11、 Kulturplatte in37°Cund5 % CO₂In der Ausbildungsbox15-25Minuten, lassen Sie das Gel aushärten.

12、 Vorbereiten Sie die erforderliche Menge an intrahepatischen Gallengefäßen Krebsorganen Kulturmedium.

13、 Sobald die Matrix-Gel-Tropfen koholidiert (15-25Minuten), öffnen Sie die Platte und fügen Sie sie vorsichtig zu jedem Loch500 μLMedium für intrahepatischen Gallengefäßkrebs.

Hinweis: Fügen Sie das Medium nicht direkt an die Oberseite des Matrix-Gluetröpfens hinzu, da dies die gefestigte Struktur zerstören kann.

14、 Die Kultivplatte in37℃und5 % CO₂in einem thermostatischen Aufbaukasten.

15、 Jedes Mal3-4Wechseln Sie das Medium einmal am Tag, saugen Sie es vorsichtig aus dem Loch und ersetzen Sie es durch ein frisches vorerhitztes organoides Medium.

16、 Der Wachstumszustand der Organoide wird genau überwacht, idealerweise sollten die intrahepatischen Gallengefäßerkrebsorgane7-10innerhalb eines Tages gebaut.

b) Übertragungskultur von Gallengefäßenkrebsorganen in der Leber

1、 Blasen Sie mit einem geschmierten Pistolenkopf, um die Organoide zu kratzen, und übertragen Sie die Suspension von Organoiden und Kulturmitteln auf die geschmierte Pistole.1,5mLEPIn der Röhre.

2、 Mit dem geschmierten Pistolenkopf wird die Organoide-Suspension stark wieder suspendiert, so dass die Organoide von dem Matrixkleber getrennt werden.

3、 250gZentrifuge bei Raumtemperatur3 Minuten。

4、 Entfernen, mit organoider Verdauungsflüssigkeit oder mit mechanischer Zerstörung. Für die Zelltrennung mit organoider Verdauungsflüssigkeit, die organoide Suspension in der organoiden Verdauungsflüssigkeit wieder suspendiert, wird der Pipette wiederholt nach oben und nach unten geblasen und in37°CInkubieren, bis die Organoide aufgelöst sind. Verwenden Sie Filterkopf für jeden2Minuten nach oben und nach unten atmen8Zweitens, um die Organoide zu lösen. Die genaue Überwachung des Verdauungsprozesses ermöglicht eine kürzeste Inkubationszeit in einer organoiden Solution. Bei mechanischen Störungen, in1,5 mlDie Organsuspension des Epithelialen Organs im Basismedium wird wieder suspendiert. Vorsichtig mit einer Pipette die organoide Suspension absaugen, wiederholt nach oben und nach unten30Zweitens hilft dies der Verdauung.

Hinweis: Nicht mehr in der organoiden Solution auflösen7Minuten, da dies zu einem schlechteren organoiden Wachstum oder sogar zu einer Zerstörung führen kann. Nach Erfahrung kann, wenn es sich um eine Mischung aus kleinen Zellstücken handelt, von10-50Die Zellen, die sich aus einer Zelle zusammensetzen, sind fertig.

5、 Nach Abschluss der Verdauung1 mlDas epiteliale Basismedium wird einmal gespült und dann bei Raumtemperatur250gZentrifugieren3Minuten.

6、 Entfernen Sie die Klare, mit einer angemessenen Menge an Matrix-Kleber resuspendieren Sie die Organoide und setzen Sie sie auf Eis nach der resuspendierten Zeit nicht länger als30er JahreUm eine vorzeitige Kondensation zu vermeiden.

Hinweis: Das Verhältnis der Verdünnung sollte70%Dies dient zur Gewährleistung der strukturellen Stabilität des Matrix-Klebstoffs während des Kultivierungsprozesses.

7、 Gemischte Suspension aus Matrix-Kleber und Organoiden in48Loch Platte Boden ist positiv, vermeiden Sie Suspension Kontakt Loch Platte Seitenwand, jedes Loch15-20uLLinks und rechts. Hinweis: Um eine Kondensation bei Raumtemperatur zu verhindern, sollte dieser Schritt so schnell wie möglich durchgeführt werden.

8、 Nachdem die Impfung abgeschlossen ist,37℃Kohlendioxid-Thermostat in der Inkubation15 MinutenLinks und rechts wird die Substration gefestigt.

9、 Herstellung von intrahepatischen Gallengefässerkrebsorganen.

10、 Nach der Kogulation des Matrix-Gels wird das bereits vorbereitete Medium für menschliche intrahepatische Gallengefäße-Krebsorgane hinzugefügt,48Löcherplatte für jedes Loch hinzugefügt250uLKulturmedium.

11、 geben48Löcherplatte in37℃Kultiviert in Kohlendioxid-Kammern, bis Organoide weitere Experimente erfordern.

V2.0Ausgabe

Aktualisierung:2025/6/21