Modellbasiertes Biomenschliches Eierstockkrebs-Organkulturmedium-Set

Menschlicher Eierstockkrebs Organoid Kit

Menschliche Eierstockkrebs Organkultur Kit

1、 Produktbeschreibung

Modell-basiertes menschliches Eierstockkrebs-Organkulturmedium-Kit (Menschlicher Eierstockkrebs Organoid KitEs ist ein chemisch definiertes Zellkulturmedium für den Aufbau und die Aufrechterhaltung menschlicher Eierstockkrebsorgane. Tumoroide, die von Patienten stammen, fassen das Genom und die pathologischen Merkmale des ursprünglichen Tumors zusammen und bieten daher große Aussichten in der medizinischen Forschung und der Präzisionsmedizin.

2、 Produktinformation

3、 Andere eigene Materialien und Reagenzien

4、 Vorbereitung von menschlichen Eierstockkrebs Organkulturmedien

Da Eierstockkrebs eine Vielzahl von molekularen Untertypen hat, wird die Vorbereitung eines vollständigen Mediums auch die Verwendung verschiedener Komponenten abhängig von seinem pathologischen Untertyp umfassen. Um ein vollständiges Medium für Eierstockkrebsorgane vorzubereiten, ist die Verwendung steriler Techniken wichtig. Hier ist die Vorbereitung10mlEin Beispiel für ein vollständiges Kulturmedium. Wenn Sie verschiedene Volumen vorbereiten müssen, passen Sie die Menge entsprechend an.

Aufgrund der hohen Heterogenität des Eierstockkrebses in der Plasma müssen verschiedene Rezepturen getestet werden und Rezepturen mit Wachstumseffekten für die Folgekultur ausgewählt werden. Entsprechend der folgenden Liste, vorbereiten Sie das gesamte Medium nach ihren Subtypen beteiligt.

Aufgrund der hohen Heterogenität des Eierstockkrebses in der Plasma müssen verschiedene Rezepturen getestet werden und Rezepturen mit Wachstumseffekten für die Folgekultur ausgewählt werden. Entsprechend der folgenden Liste umfasst die vollständige Kultivierung nach ihrer Subtyp-Vorbereitung

a) Rezepte1：

Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenB（50xEierstockkrebs OrgankulturfaktorenC（250xund Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenE（250xAuf Eis auftauen und vollständig mischen. geben200 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenB（50x），40 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenC（250x(und40 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenE（250x(Beitritt)9,72 mlEierstockkrebsorgane im Grundmedium. Vollständig gemischt.

b) Rezepte2：

Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenB（50xEierstockkrebs OrgankulturfaktorenC（250xEierstockkrebs OrgankulturfaktorenD（250xund Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenF（2000xAuf Eis auftauen lassen. Vollständig gemischt. geben200 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenB（50x）、40 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenC（250x）、40 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenD（250x(und5 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenF（2000x(Beitritt)9.715mLEierstockkrebsorgane im Grundmedium. Vollständig gemischt.

Hinweis: Wenn Sie es nicht sofort verwenden2-8°CUnter Lagerung des vollständigen Mediums nicht mehr als2Woche. Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenBEnthält Pilzmittel und Antibiotika (50x）。

c) Rezepte3：

in“Rezepte2”Fügen Sie das komplette Medium20 μLEierstockkrebs OrgankulturfaktorenG（500x）

Hinweis: Zubereitete Eierstockkrebs-Organkulturmedien können in2-8°CLagerung, empfohlen innerhalb von zwei Wochen zu verwenden. Eierstockkrebs OrgankulturfaktorenB (50x)Enthält Bakterien und Pilz Antibiotika.

5、 Ursprüngliche Kultur von Eierstockkrebsorganen von Patienten

Hinweis: Studien mit wichtigen menschlichen Gewebematerialien müssen allen einschlägigen institutionellen und staatlichen Vorschriften entsprechen. Bevor das primäre menschliche Gewebematerial gesammelt wird, muss die informierte Zustimmung aller Probanden eingeholt werden.

a) Erschaffung von primitiven menschlichen Eierstockkrebsorganen

1、 Sammeln Sie die primären Eierstockkrebs-Gewebefragmente in einer eiskalten primären Gewebespeicherlösung mit einer Zentrifuge. Halten Sie die Gewebeproben auf4℃Bis die Trennung beginnt.

2、 Beurteilen Sie, ob die gewonnenen Gewebefragmente aus dem Epithelium bestehen. Wenn Fett oder Muskelgewebe vorhanden ist, entfernen Sie diese nicht-epithelialen Bestandteile so viel wie möglich mit einem Messer oder einer Pinzette unter einem anatomischen Mikroskop. Wenn es kein Fett oder Muskelgewebe gibt, gehen Sie sofort zum nächsten Schritt.

3、 mit einer epitelialen Organbasis oderDPBSSpülen Sie das Gewebe zweimal.

4、 Verwenden Sie ein Messer oder schneiden Sie Gewebe in1-3mm³Kleine Stücke werden in eine Zellpetrieschale gelegt.

5、 in37℃Verwenden10mlTumorgewebe Verdauungslösung in15 mlVerdauung Gewebefragmente in der Zentrifuge, Verdauungszeit variiert, von30Minuten.1.5Stunden nicht warten. Überwachen Sie sorgfältig den Verdauungsprozess und können den Verdauungsgrad entsprechend beobachten. Wenn die meisten Organisationsstücke durchlaufen können1 mlBeim Absaugen des Pipettenkopfes ist der Verdauungsprozess abgeschlossen.

6、 gebenFBSZu der Gewebeverdauungsmischung hinzugefügt, wobei die Endkonzentration2%und verwenden100 μmZellfilter filtern.

7、 Sammeln und in4°Cnach unten250gZentrifugal gefilterte Zellen3Minuten. Im Falle einer sichtbaren roten Abfällung die Oberflüssigkeit inhalieren und verwenden2 mlRote Blutkörperchen-Lysate resuspendiert und spaltet rote Blutkörperchen bei Raumtemperatur1Minuten und in4°Cnach unten250gZentrifugieren3Minuten.

8、 Absaugen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Fällung in dem Basismedium, in4°Cnach unten250gZentrifugieren3In einer Minute wiederholen Sie diesen Schritt.

9、 Absaugen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Fällung wieder in dem Matrixkleber. Der Kleber sollte auf dem Eis aufbewahrt werden, um zu verhindern, dass er sich verfestigt. den Prozess so schnell wie möglich durchführen. Die Menge des verwendeten Matrix-Klebstoffs hängt von der Partikelgröße ab. etwa10，000Eine Zelle sollte geimpft werden.25 μLIn der Substration.

10、 Nicht zu verdünnen der Matrix-Kleber (die Matrix-Kleber-Verhältnis sollte>70%(Volumen der Substrate)/Gesamtvolumen)), da dies die richtige Bildung von festen Tropfen hemmen kann. Organoide enthaltende Substrate auf24Der Boden der Lochzellenkulturplatte, jeder Tropfen rund um das Lochzentrum ca.30 μL。

Hinweis: Sobald die Organoide wieder in der Matrix-Kleber suspendiert sind, so schnell wie möglich die Platte zu pflanzen, da die Matrix-Kleber in der Probe oder Pipette Saugkopf kondensieren kann. Lassen Sie die Substratpartikel nicht die Rohrwand berühren.

11、 Kulturplatte in37°Cund5 % CO₂In der Ausbildungsbox15-25Minuten, lassen Sie das Gel aushärten.

12、 Vorbereiten Sie die erforderliche Menge an Eierstockkrebs-Organkulturmedium.

13、 Sobald die Matrix-Gel-Tropfen koholidiert (15-25Minuten), öffnen Sie die Platte und fügen Sie sie vorsichtig zu jedem Loch500 μLmenschlichen Eierstockkrebs Organkulturmedium.

Hinweis: Fügen Sie das Medium nicht direkt an die Oberseite des Matrix-Gluetröpfens hinzu, da dies die gefestigte Struktur zerstören kann.

14、 Die Kultivplatte in37℃und5 % CO₂in einem thermostatischen Aufbaukasten.

15、 Jedes Mal3-4Wechseln Sie das Medium einmal am Tag, saugen Sie es vorsichtig aus dem Loch und ersetzen Sie es durch ein frisches vorerhitztes organoides Medium.

16、 Der Wachstumsstatus der Organoide wird genau überwacht, idealerweise sollten die menschlichen Eierstockkrebsorgane7-10innerhalb eines Tages gebaut.

b) Übertragungskultur menschlicher Eierstockkrebsorgane

1、 Blasen Sie mit einem geschmierten Pistolenkopf, um die Organoide zu kratzen, und übertragen Sie die Suspension von Organoiden und Kulturmitteln auf die geschmierte Pistole.1,5 ml EPIn der Röhre.

2、 Mit dem geschmierten Pistolenkopf wird die Organoide-Suspension stark wieder suspendiert, so dass die Organoide von dem Matrixkleber getrennt werden.

3、 250gZentrifuge bei Raumtemperatur3 Minuten。

4、 Entfernen, mit organoider Verdauungsflüssigkeit oder mit mechanischer Zerstörung. Für die Zelltrennung mit organoider Verdauungsflüssigkeit, die organoide Suspension in der organoiden Verdauungsflüssigkeit wieder suspendiert, wird der Pipette wiederholt nach oben und nach unten geblasen und in37°CInkubieren, bis die Organoide aufgelöst sind. Verwenden Sie Filterkopf für jeden2Minuten nach oben und nach unten atmen8Zweitens, um die Organoide zu lösen. Die genaue Überwachung des Verdauungsprozesses ermöglicht eine kürzeste Inkubationszeit in einer organoiden Solution. Bei mechanischen Störungen, in1,5 mlDie Organsuspension des Epithelialen Organs im Basismedium wird wieder suspendiert. Vorsichtig mit einer Pipette die organoide Suspension absaugen, wiederholt nach oben und nach unten30Zweitens hilft dies der Verdauung.

Hinweis: Nicht mehr in der organoiden Solution auflösen7Minuten, da dies zu einem schlechteren organoiden Wachstum oder sogar zu einer Zerstörung führen kann. Nach Erfahrung kann, wenn es sich um eine Mischung aus kleinen Zellstücken handelt, von10-50Die Zellen, die sich aus einer Zelle zusammensetzen, sind fertig.

5、 Nach Abschluss der Verdauung1 mlDas epiteliale Basismedium wird einmal gespült und dann bei Raumtemperatur250gZentrifugieren3Minuten.

6、 Entfernen Sie die Klare, mit einer angemessenen Menge an Matrix-Kleber resuspendieren Sie die Organoide und setzen Sie sie auf Eis nach der resuspendierten Zeit nicht länger als30er JahreUm eine vorzeitige Kondensation zu vermeiden.

Hinweis: Das Verhältnis der Verdünnung sollte70%Dies dient zur Gewährleistung der strukturellen Stabilität des Matrix-Klebstoffs während des Kultivierungsprozesses.

7、 Gemischte Suspension aus Matrix-Kleber und Organoiden in24Loch Platte Boden ist positiv, vermeiden Sie Suspension Kontakt Loch Platte Seitenwand, jedes Loch30uLLinks und rechts. Hinweis: Um eine Kondensation bei Raumtemperatur zu verhindern, sollte dieser Schritt so schnell wie möglich durchgeführt werden.

8、 Nachdem die Impfung abgeschlossen ist,37℃Kohlendioxid-Thermostat in der Inkubation15 MinutenLinks und rechts wird die Substration gefestigt.

9、 Herstellung von Eierstockkrebs-Organkulturmedien.

10、 Nach der Kogulation des Matrix-Gels, das bereits vorbereitete menschliche Eierstockkrebs-Organkulturmedium hinzufügen,24Löcherplatte für jedes Loch hinzugefügt250uLKulturmedium.

11、 geben2Löcherplatte in37℃Kultiviert in Kohlendioxid-Kammern, bis Organoide weitere Experimente erfordern

V2.0Ausgabe

Aktualisierung:2025/6/21