Interleukin-7-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-7-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-7-Rezeptor (löslich) ELISA KITEs ist ein Werkzeug zur quantitativen Ermittlung des Gehalts an löslichen Interleukin-7-Rezeptoren in biologischen Proben, das in Bereichen wie der Immunologie weit verbreitet wird.

1. PrüfprinzipAnwendung der Dual Antibody Clamping ELISA Methode. Die Mikroporenplatte in der Kit wurde vorverpackt, um spezifische Antikörper gegen lösliche Intermedian-7-Rezeptoren. Nach der Zugabe der Probe bindet der lösliche Intermedian-7-Rezeptor in der Probe an feste Antikörper. Anschließend werden enzymatisch markierte Antikörper gegen lösliche Interferon-7-Rezeptoren hinzugefügt, die einen "Festphase-Antikörper-lösliche Interferon-7-Rezeptoren-enzymatisch markierte Antikörper"-Komplex mit dem Rezeptor bilden, der an die Festphase gebunden ist. Nach dem Waschschritt entfernen Sie die nicht gebundenen Substanzen und fügen Sie die Substratlösung (z. B. TMB) hinzu. Unter der katalytischen Wirkung des Enzyms reagiert das Substrat auf eine farbige Darstellung, wobei die Farbe proportional zum Gehalt an löslichen Intermedian-7-Rezeptoren in der Probe ist. Durch die Messung der Absorption unter einer bestimmten Wellenlänge (in der Regel 450 nm) und den Vergleich mit der Standardkurve kann die Konzentration des Rezeptors in der Probe berechnet werden.

2. Zusammensetzung des Kits

• Enzymverbindungsplatte96-Loch oder 48-Loch, vorverpackt mit Anti-löslichen Intermedian-7-Rezeptor-Antikörper, sind die Träger der Reaktion.

• StandardprodukteNormalerweise ist es ein Gefriertrockner mit 2 Flaschen. Vor der Anwendung ist eine Standardverdünnung erforderlich, die in verschiedenen Konzentrationsgradienten gelöst und verdünnt wird, wie z. B. 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung einer zu prüfenden Probe mit einer zu hohen Konzentration, um sicherzustellen, dass ihre Konzentration im Testbereich der Kit liegt.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, der HRP-gekennzeichnete Anti-lösliche Interferon-7-Rezeptor-Antikörper ist eine Konzentration, die bei der Verwendung mit einer enzymbasierten Antikörper-Verdünnung nach Bedarf verdünnt werden muss.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat kann es mit dem HRP im enzymatisch markierten Antikörper reagieren, um eine farbige Veränderung zu verursachen.

• WaschflüssigkeitIn der Regel ist es eine konzentrierte Flüssigkeit, die proportional mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verdünnt werden muss, um Enzym-Platten zu waschen, nicht gebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitMehr als eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und leicht zu lesen.

• Dichtfilm: Für die Abdeckung von Enzymplatten während des Temperaturprozesses, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und äußere Verschmutzung zu verhindern.

• Gebrauchsanweisung: Detaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Vorsichtsmaßnahmen, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes, 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur, 1000 x g für 20 Minuten zentrifugieren, nehmen Sie die Reinigung auf. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaAntikoagulante wie EDTA und Hepatin sind verfügbar. Innerhalb von 30 Minuten nach der Probenaufnahme, 1000 x g bei 2 - 8 ° C 15 Minuten zentrifugieren und aufnehmen.

• Zellkultur: Zellkultur auf 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten und entfernen Sie die Zellstücke und Verunreinigungen nach der Entfernung.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit vorgekühltem PBS, entfernen Sie das restliche Blut, schneiden Sie das Gewebe mit 1:9 (w/v) und fügen Sie PBS hinzu und schleifen Sie es vollständig auf Eis. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C aufbewahrt werden. Wenn es lange gelagert wird, muss es bei -20 ° C oder -80 ° C gefriert werden und wiederholtes Gefrierschmelzen vermieden werden, ist die Blutlösungsprobe in der Regel nicht für den Test geeignet.

4. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und balancieren Sie es auf Raumtemperatur (ca. 30 Minuten). Verdünnen Sie die konzentrierte Waschflüssigkeit.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch und die Probe xi-Freisetzung, Standard-Loch mit unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten, Probe-Loch mit einer verarbeiteten Probe, die Menge pro Loch ist in der Regel 100 μL, leicht vermischt, 37 ° C Temperatur für 90 Minuten.

• WaschenEntfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten einweichen und waschen Sie 5 Mal wiederholen, um sicherzustellen, dass Sie die nicht gebundenen Substanzen reinigen.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenMit den oben genannten Waschkarten.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 - 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) mit Lichtschutz versehen.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die tatsächliche Konzentration, wenn die Probe verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden.

5. Leistungsindikatoren

• TestbereichTypischerweise in verschiedenen Bereichen wie 31,2 - 2000 pg / ml, um die Nachweisanforderungen für den Gehalt an löslichen Interleukin-7-Rezeptoren in einer Vielzahl von Proben zu erfüllen.

• EmpfindlichkeitBis zu 15,6 pg/mL oder sogar niedriger können Spuren dieses Rezeptors in der Probe nachgewiesen werden.

• SpezifischeHochspezifisch für die löslichen Interleukin-7-Rezeptoren und keine deutlichen Kreuzreaktionen mit anderen Substanzen wie Zytokin-Rezeptoren.

• WiederholbarkeitDer Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist in der Regel kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%, was die Stabilität und Zuverlässigkeit der Testergebnisse gewährleistet.

6. Hinweise

• Streng im Einklang mit der Anleitung können Reagentien aus verschiedenen Chargen nicht gemischt werden.

• Verwenden Sie während des Betriebs einen Einweg-Saugkopf, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden und die Probenahme genau zu machen.

• Das Waschen ist der Schlüssel zur Gewährleistung einer genauen Ergebnisse, und die Platte kann nicht leicht zu falschen Positiven führen.

• Die Substratlösung ist empfindlich für Licht, muss vor Licht gehalten und verwendet werden, und die Farbreaktion muss unter Lichtschutzbedingungen durchgeführt werden.

• Die Endflüssigkeit ist korrosiv, achten Sie beim Betrieb auf Schutz und vermeiden Sie den Kontakt mit Haut und Augen.

• Es wird empfohlen, dass sowohl die Standards als auch die Proben eine Komplex-Bohrung durchführen, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu verbessern. Das Kit dient ausschließlich der wissenschaftlichen Forschung und kann nicht zur klinischen Diagnose verwendet werden.