Interfen-7 ELISA KIT

Interfen-7 ELISA KIT

Interfen-7 ELISA KITEs ist ein häufig in der wissenschaftlichen Forschung verwendetes Testwerkzeug zur quantitativen Bestimmung des Interfin-7-Gehalts in biologischen Proben. Interleukin-7 ist ein lösliches, durch das IL-7-Gen codiertes, 25kDa-Größe sekretierendes Protein, das zur Familie der hemotrophen Faktoren gehört und eine entscheidende Rolle bei der Differenzierung, Vermehrung und Überleben von Lymphozyten spielt. Das Kit kann die Forschung über die Krankheitsmechanismen und die Entwicklung von Arzneimitteln unterstützen.

1. Zusammensetzung des Kits

• Enzymverbindungsplatte96 oder 48 Löcher, vorverpackt mit Anti-IL-7-Antikörper als Träger der Reaktion.

• StandardprodukteNormalerweise sind es Gefriertrockner, in der Regel 2 Flaschen. Vor der Anwendung muss eine Standardverdünnung verwendet werden, um wiedergelöst zu werden, und verdünnt in verschiedenen Konzentrationsgradienten wie 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL usw., um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung einer zu prüfenden Probe mit einer zu hohen Konzentration, um sicherzustellen, dass ihre Konzentration im effektiven Nachweisbereich der Kit liegt.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, der HRP-markierte Anti-IL-7-Antikörper ist eine Konzentration, die bei der Verwendung mit einer enzymbasierten Antikörper-Verdünnung verdünnt werden muss.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat kann es mit dem HRP in den enzymatisch markierten Antikörpern reagieren, wodurch sich die Farbe ändert.

• WaschflüssigkeitIn der Regel ist es eine Konzentration, die in einem bestimmten Verhältnis mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verdünnt werden muss, um das Enzym zu waschen, um nicht gebundene Substanzen zu entfernen und die Hintergrundstörungen effektiv zu reduzieren.

• EndflüssigkeitMehrfach eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und die nachfolgende Lesung zu erleichtern.

• Dichtfilm: Für die Abdeckung von Enzymplatten während des Temperaturprozesses, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und äußere Verschmutzung zu verhindern.

• Gebrauchsanweisung: Detaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Vorsichtsmaßnahmen, Leistungsindikatoren usw.

2. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes lassen Sie es 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur und zentrifizieren Sie es anschließend für 20 Minuten mit 1000 x g und saugen Sie vorsichtig die Oberflüssigkeit ab. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaEthylamidetetrasessigsäure (EDTA), Hepatin usw. können als Antikoagulants verwendet werden. Die Probe wird innerhalb von 30 Minuten bei 2 - 8 ° C bei 1000 x g 15 Minuten zentrifugiert und aufgenommen.

• ZellkulturZellkultur: Entfernen Sie die Zellklutur mit 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, nach der Entfernung von Zellbrücken und Verunreinigungen, entnehmen Sie die Zellklutur für die Detektion.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit einem vorgekühlten Phosphatpuffer (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) und entfernen Sie das restliche Blut. Nach dem Zerkleinern des Gewebes wird PBS im Verhältnis von etwa 1:9 (w/v) hinzugefügt und vollständig auf Eis geschliffen. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nach der Abnahme getestet wird, kann sie bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Sie lange aufbewahren möchten, müssen Sie sie bei -20 ° C oder -80 ° C einfrieren lassen, und um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden, sind die Blutlösproben in der Regel nicht geeignet für die Detektion.

3. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und lassen Sie es 30 Minuten im Voraus auf Raumtemperatur ausgleichen. Gleichzeitig wird die konzentrierte Waschflüssigkeit im gewünschten Verhältnis mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch wird zur Probe xi-Freisetzung hinzugefügt, das Standard-Loch wird zu unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten hinzugefügt, das Probenloch wird zur behandelten Probe hinzugefügt, die Probenmenge pro Loch beträgt in der Regel 100 μL, leicht vermischt und 90 Minuten bei 37 ° C hergestellt.

• WaschenNach dem Ende der Warmtung entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten ein und waschen Sie 5 Mal wiederholt, um sicherzustellen, dass der Boden nicht gebunden ist.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) gefärbt.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die Probe, wenn sie verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.

4. Leistungsindikatoren

• TestbereichUnterschiedliche Kits mit einem üblichen Testbereich von 15,6 bis 1000 pg/mL erfüllen die Anforderungen an den IL-7-Gehalt in einer Vielzahl von Proben.

• EmpfindlichkeitIn der Regel bis zu 7,8 pg / ml oder sogar niedriger, können Spuren von IL-7 in der Probe nachgewiesen werden.

• SpezifischeEs ist sehr spezifisch für IL-7 und hat kaum Kreuzreaktionen mit anderen Substanzen wie Zytokinen.

• WiederholbarkeitDer Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist in der Regel kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%, was die Stabilität und Zuverlässigkeit der Testergebnisse gewährleistet.