Interleukin-6 Rezeptor ELISA Kit

Interleukin-6 Rezeptor ELISA Kit

Interleukin-6 Rezeptor ELISA KitEs ist ein wissenschaftliches Werkzeug zur quantitativen Ermittlung des Interfen-6-Rezeptorgehalts in biologischen Proben. IL-6R spielt eine entscheidende Rolle bei der Immunregulation und den Prozessen der Entzündungsreaktion, und der Nachweis seines Gehaltes ist von großer Bedeutung für die relevanten Studien.

1. Prüfprinzip: Die Kit verwendet mehrheitlich eine duale Antikörper-Kerbinzym-Bindung-Immunabsorptionsmethode. Spezifische Antikörper gegen IL-6R sind auf Enzym-Bindeplatten vorverpackt. Nach Zugabe der Probe bindet IL-6R in der Probe an die Festphasenantikörperspezifizität. Anschließend wird ein enzym-markierter Anti-IL-6R-Antikörper hinzugefügt, der mit dem IL-6R, der an den Festphasen-Antikörper gebunden ist, einen Komplex bildet, der "Festphasen-Antikörper - IL-6R - enzym-markierter Antikörper" ist. Nach ausreichendem Waschen entfernen Sie die nicht gebundenen Substanzen und fügen Sie eine Substratlösung (z. B. TMB) hinzu, die unter Enzymkatalyse eine farbige Reaktion auftritt, wobei die Farbtöne proportional zum Gehalt an IL-6R in der Probe ist. Durch die Messung der Absorption unter einer bestimmten Wellenlänge (in der Regel 450 nm) durch ein Enzymskalarer wird die Konzentration von IL-6R in der Probe im Vergleich zur Standardkurve berechnet.

2. Zusammensetzung des Kits

• Enzymverbindungsplatte96 oder 48 Löcher, vorverpackt mit Anti-IL-6R-Antikörper, sind die Träger der Reaktion.

• StandardprodukteIn der Regel ist es Gefriertrockner, es gibt 2 Flaschen. Vor der Anwendung ist eine Standardverdünnung erforderlich, die in verschiedenen Konzentrationsgradienten verdünnt wird, wie 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung von zu hohen Probenkonzentrationen, um sicherzustellen, dass die Probenkonzentration im Bereich der Testbox liegt.

• Enzym-basierte AntikörperAnti-IL-6R-Antikörper, der mit HRP gekennzeichnet ist, ist eine konzentrierte Flüssigkeit, die nach Bedarf mit einer enzymbasierten Antikörper-Verdünnung verdünnt werden muss.

• Enzym-markierte Antikörper xi-Freisetzung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat kann es mit dem HRP im enzymatisch markierten Antikörper reagieren und eine farbige Veränderung verursachen.

• WaschflüssigkeitNormalerweise ist es eine Konzentration, die proportional mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verdünnt wird, um Enzyme-Platten zu waschen, nicht gebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitMehr als eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und leicht zu lesen.

• Dichtfilm: Für die Abdeckung von Enzymplatten während des Temperaturprozesses, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und äußere Verschmutzung zu verhindern.

• Gebrauchsanweisung: Detaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Vorsichtsmaßnahmen, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes lassen Sie es 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur und zentrifizieren Sie es anschließend für 20 Minuten mit 1000 x g und nehmen Sie die Reinigung ab. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaEthylamidetetrasessigsäure (EDTA), Hepatin usw. können als Antikoagulants verwendet werden. Die Probe wird innerhalb von 30 Minuten bei 2 - 8 ° C bei 1000 x g 15 Minuten zentrifugiert und aufgenommen.

• ZellkulturZellkultur: Entfernen Sie die Zellklutur mit 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, nach der Entfernung von Zellbrücken und Verunreinigungen, entnehmen Sie die Zellklutur für die Detektion.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit einem vorgekühlten Phosphatpuffer (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) und entfernen Sie das restliche Blut. Nach dem Zerkleinern des Gewebes wird PBS im Verhältnis von etwa 1:9 (w/v) hinzugefügt und vollständig auf Eis geschliffen. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Sie lange aufbewahren möchten, müssen Sie sie bei -20 ° C oder -80 ° C einfrieren lassen, und um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden, sind die Blutlösproben in der Regel nicht geeignet für die Detektion.

4. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und lassen Sie es 30 Minuten im Voraus auf Raumtemperatur ausgleichen. Gleichzeitig wird die konzentrierte Waschflüssigkeit im gewünschten Verhältnis mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch wird zur Probe xi-Freisetzung hinzugefügt, das Standard-Loch wird zu unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten hinzugefügt, das Probenloch wird zur behandelten Probe hinzugefügt, die Probenmenge pro Loch beträgt in der Regel 100 μL, leicht vermischt und 90 Minuten bei 37 ° C hergestellt.

• WaschenNach dem Ende der Warmtung entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten ein und waschen Sie 5 Mal wiederholt, um sicherzustellen, dass der Boden nicht gebunden ist.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) gefärbt.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die Probe, wenn sie verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.

5. Leistungsindikatoren

• TestbereichUnterschiedliche Kits sind üblich in einem Bereich von 31,2 bis 2000 pg/mL, um die Anforderungen an den IL-6R-Gehalt in einer Vielzahl von Proben zu erfüllen.

• EmpfindlichkeitIn der Regel bis zu 15,6 pg / ml oder sogar niedriger, können Spuren von IL-6R in der Probe nachgewiesen werden.

• SpezifischeEs ist sehr spezifisch für IL-6R und hat kaum Kreuzreaktionen mit anderen Substanzen wie Zytokin-Rezeptoren.

• WiederholbarkeitDer Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist in der Regel kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%, was die Stabilität und Zuverlässigkeit der Testergebnisse gewährleistet.

6. Hinweise

• In strikter Übereinstimmung mit den Bedienungsanleitungen dürfen Reagentien aus verschiedenen Chargen-Kits nicht gemischt werden.

• Verwenden Sie beim Betrieb einen Einweg-Saugkopf, um Kreuzverschmutzung zu verhindern, und die Probenahme muss genau sein.

• Eine ausreichende Wäsche ist der Schlüssel zur Gewährleistung einer genauen Ergebnisse, und die Platte kann nicht leicht zu falschen positiven Ergebnissen führen.

• Die Substratlösung ist empfindlich für Licht, muss vor Licht gehalten und verwendet werden, und die Farbreaktion muss unter Lichtschutzbedingungen durchgeführt werden.

• Die Endflüssigkeit ist korrosiv, achten Sie beim Betrieb auf einen guten Schutz und vermeiden Sie den Kontakt mit Haut und Augen.

• Es wird empfohlen, sowohl Standards als auch Proben zu testen, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu verbessern. Das Kit ist ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke bestimmt und kann nicht zur klinischen Diagnose verwendet werden.