Interleukin-6-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-6-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-6-Rezeptor (löslich) ELISA KITEs wurde speziell für die quantitative Ermittlung des Gehalts an löslichen Interferon-6-Rezeptoren in biologischen Proben entwickelt und ist von großer Bedeutung für die Immun- und Entzündungsforschung auf dem Gebiet der Forschung.

1. Prüfprinzip: Basierend auf der Dual-Antikörper-Cluster-Enzyme-Bindung-Immunabsorptionsmethode. Enzym-Plaketten vorverpackt wurden spezifische Antikörper gegen lösliche Interferon-6-Rezeptoren. Nachdem die Probe hinzugefügt wurde, bindet der lösliche Interferon-6-Rezeptor an festen Antikörper. Anschließend werden enzymatisch markierte Antikörper gegen lösliche Interferon-6-Rezeptoren hinzugefügt, um den Komplex "Festphasenantikörper - lösliche Interferon-6-Rezeptoren - enzymatisch markierte Antikörper" zu bilden. Nach dem Waschen entfernen Sie die Unverbindungen und fügen Sie eine Substratlösung (z. B. TMB) hinzu, um das Substrat unter enzymatischer Katalyse zu färben, wobei die Farbe proportional zum Rezeptorgehalt in der Probe ist. Durch die Messung der Absorptionsgrad bei einer Wellenlänge von 450 nm mit einem Enzym-Skalierer wurden die Konzentrationen von löslichen Interferon-6-Rezeptoren in der Probe im Vergleich zur Standardkurve ermittelt.

2. Zusammensetzung des Kits

• EnzymverbindungsplatteEs gibt 96 Loch oder 48 Loch Spezifikationen, vorverpackt mit Antikörpern als Reaktionsträger.

• StandardprodukteNormalerweise ist es ein Gefriertrockner, der mit einer Standardverdünnungsflüssigkeit aufgelöst und in eine Reihe von Konzentrationsgradienten verdünnt wird, wie z. B. 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ml, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung von zu hohen Probenkonzentrationen, um die Probenkonzentration an den Testbereich der Kit anzupassen.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, HRP-gekennzeichnete anti-lösliche Interferon-6-Rezeptor-Antikörper, als Konzentration, die mit einer enzymbasierten Antikörper-Verdünnung nach Bedarf verdünnt werden muss.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat erzeugt eine HRP-Reaktion mit enzymatisch markierten Antikörpern eine Farbwänderung.

• WaschflüssigkeitIn der Regel ist es eine konzentrierte Flüssigkeit, die proportional mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt wird, um Enzymplatten zu waschen, unbebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitMehrfach eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Substrat-Farbreaktion verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren, um sie zu lesen.

• Dichtfilm: Abdecken Sie die Enzymplatten bei der Temperaturzucht, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und die äußere Verschmutzung zu verhindern.

• GebrauchsanweisungDetaillierte Beschreibung der Verwendung, Hinweise, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• Serum: Nach der Entnahme des Blutes, 2 Stunden oder 4 ° C über Nacht bei Raumtemperatur, 1000 x g Zentrifuge 20 Minuten, die Entnahme des Blutes benötigt keine Thermogene, keine Endotoxine Einweggeräte.

• BlutplasmaMit EDTA, Hepatin und anderen Antikoagulanten können Sie die Probe innerhalb von 30 Minuten bei 2 - 8 ° C bei 1000 x g Zentrifuge für 15 Minuten entnehmen.

• Zellkultur1.000 x g Zentrifugieren für 20 Minuten und entfernen Sie die Zellstücke und Verunreinigungen nach der Entfernung des Clear-Tests.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit vorgekühltem PBS (0,01 M, pH = 7,4), entfernen Sie das restliche Blut, schneiden Sie das Gewebe nach 1:9 (w / v) PBS hinzufügen, schleifen Sie es vollständig auf Eis und zentrifugieren Sie 5000 x g für 5 - 10 Minuten.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C aufbewahrt werden. Langfristige Aufbewahrung erfordert -20 ° C oder -80 ° C Gefrieren und vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen, die Blutlysationsproben sind in der Regel nicht geeignet für den Test.

4. Betriebsprozesse

• Vorbereitung: Entnehmen Sie das Kit aus dem Kühlschrank, auf Raumtemperatur ausbalancieren (ca. 30 Minuten) und verdünnen Sie die konzentrierte Waschflüssigkeit.

• Zum Beispiel: Setzen Sie leere Löcher, Standardlöcher und Probenlöcher. Leeres Loch und Probe xi-Freisetzung, Standard-Loch und unterschiedliche Konzentration Standard-Probe, Probe-Loch und behandelte Probe, jede Probe-Menge ist in der Regel 100 μL, leicht vermischt, 37 ° C Temperatur für 90 Minuten.

• Waschen: Entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschmaschine, einweichen Sie nach 1 - 2 Minuten und trocknen Sie, wiederholen Sie das Waschen 5 Mal, um sicherzustellen, dass Sie die nicht gebundenen Stoffe reinigen.

• Antikörper100 µL gut verdünnte Enzym-Antikörper-Arbeitsflüssigkeit pro Loch, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch 90 µl Substratlösung hinzufügen, vorsichtig vermischen und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach der tatsächlichen Farbdesignation) mit Lichtschutz versehen.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination hinzugefügt und die Farbe der Lösung wird von blau auf gelb.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach Zugabe der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Die Standardkonzentration als horizontale Koordinate und der OD-Wert als longitudinale Koordinate zeichnen Standardkurven. Die entsprechende Konzentration wird anhand des OD-Wertes der Probe aus der Standardkurve ermittelt. Wenn die Probe verdünnt wurde, muss die tatsächliche Konzentration mit dem entsprechenden Verdünnungsmultigen multipliziert werden.

5. Leistungsindikatoren

• TestbereichHäufig im Bereich von 15,6 bis 1000 pg/mL, um eine Vielzahl von Probentests zu erfüllen.

• EmpfindlichkeitEs kann bis zu 7,8 pg/mL oder sogar niedriger sein, um Spuren von löslichen Interferon-6-Rezeptoren nachzuweisen.

• SpezifischeEs ist sehr spezifisch für diesen Rezeptor und hat kaum Kreuzreaktionen mit anderen Zytokin-Rezeptoren.

• WiederholbarkeitDer Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist in der Regel kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%, um die Stabilität und Zuverlässigkeit der Testergebnisse zu gewährleisten.