Interleukin-5-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-5-Rezeptor (löslich) ELISA KIT

Interleukin-5-Rezeptor (löslich) ELISA KITEs ist ein Werkzeug zur quantitativen Ermittlung des Gehalts an löslichen Interleukin-5-Rezeptoren in biologischen Proben, das eine wichtige Rolle in der Forschung spielt und ein tieferes Verständnis von physiopathologischen Prozessen wie Immunregulation und Entzündungsreaktionen bietet. Im Folgenden werden Sie in vielerlei Hinsicht vorgestellt:

1. PrüfprinzipAnwendung der Dual Antibody Intercentrifugal Immunoadsorption Assay (ELISA) Technik. Die Enzymplatten des Kits wurden mit spezifischen Antikörpern gegen lösliche Interleukin-5-Rezeptoren vorverpackt. Beim Hinzufügen der Probe bindet der lösliche Interceptor-5-Rezeptor in der Probe an die Festphase-Antikörperspezifizität. Anschließend werden enzymatisch markierte Antikörper gegen lösliche Interferon-5-Rezeptoren hinzugefügt, die mit den Rezeptoren, die an den Festphase-Antikörpern gebunden sind, einen "Festphase-Antikörper-lösliche Interferon-5-Rezeptoren-enzymatisch markierte Antikörper"-Komplex bilden. Nach ausreichendem Waschen entfernen Sie die nicht gebundenen Substanzen und fügen Sie die Substratlösung hinzu (z. B. 3,3', 5,5'-Tetramethylbiphenamin, TMB). Unter der Enzymkatalysis in enzymatischen Antikörpern reagiert das Substrat auf eine farbige Darstellung, wobei die Farbe im Verhältnis zum Gehalt an löslichen Interfin-5-Rezeptoren in der Probe ist. Durch die Messung der Absorption mit einem Enzymskalarer bei einer bestimmten Wellenlänge (in der Regel 450 nm), die mit der Standardkurve verglichen wird, kann die Konzentration dieses Rezeptors in der Probe berechnet werden.

2. Zusammensetzung des Kits

• EnzymverbindungsplatteEs gibt 96-Loch oder 48-Loch-Spezifikationen, die mit Antikörpern gegen lösliche Interferon-5-Rezeptoren vorverpackt sind, die Träger der Reaktion sind.

• StandardprodukteNormalerweise ist es Gefriertrockner, in der Regel mit 2 Flaschen ausgestattet. Vor der Anwendung ist eine Standardverdünnung erforderlich, um wiedergelöst und in verschiedenen Konzentrationsgradienten verdünnt zu werden, wie z. B. 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung von zu hohen Probenkonzentrationen, um sicherzustellen, dass die Probenkonzentration im effektiven Detektionsbereich der Kit liegt.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, HRP (Moringa Peroxidase) gekennzeichnete anti-lösliche Interferon-5-Rezeptor-Antikörper, die als Konzentration verwendet werden, müssen mit einer enzymatisch orientierten Antikörper-Verdünnung verdünnt werden.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat kann es mit dem HRP in den enzymatisch markierten Antikörpern reagieren, wodurch sich die Farbe ändert.

• WaschflüssigkeitIn der Regel ist es eine konzentrierte Flüssigkeit, die in einem bestimmten Verhältnis mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verdünnt werden muss, um die Enzymplatten zu waschen, nicht gebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitMehr als eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und leicht zu lesen.

• Dichtfilm: Decken Sie die Enzymplatten während der Temperaturbildung, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und äußere Verschmutzung zu verhindern.

• Gebrauchsanweisung: Detaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Vorsichtsmaßnahmen, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes lassen Sie es 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur und zentrifizieren Sie es anschließend für 20 Minuten mit 1000 x g und nehmen Sie die Reinigung ab. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaEthylamidetetrasessigsäure (EDTA), Hepatin usw. können als Antikoagulants verwendet werden. Die Probe wird innerhalb von 30 Minuten bei 2 - 8 ° C bei 1000 x g 15 Minuten zentrifugiert und aufgenommen.

• ZellkulturZellkultur: Entfernen Sie die Zellklutur mit 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, nach der Entfernung von Zellbrücken und Verunreinigungen, entnehmen Sie die Zellklutur für die Detektion.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit einem vorgekühlten Phosphatpuffer (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) und entfernen Sie das restliche Blut. Nach dem Zerkleinern des Gewebes wird PBS im Verhältnis von etwa 1:9 (w/v) hinzugefügt und vollständig auf Eis geschliffen. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Sie lange aufbewahren möchten, müssen Sie sie bei -20 ° C oder -80 ° C einfrieren lassen, und um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden, ist die Blutlösprobe in der Regel nicht für den Test geeignet.

4. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und lassen Sie es 30 Minuten im Voraus auf Raumtemperatur ausgleichen. Gleichzeitig wird die konzentrierte Waschflüssigkeit im gewünschten Verhältnis mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch wird zur Probe xi-Freisetzung hinzugefügt, das Standard-Loch wird zu unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten hinzugefügt, das Probenloch wird zur behandelten Probe hinzugefügt, die Probenmenge pro Loch beträgt in der Regel 100 μL, leicht vermischt und 90 Minuten bei 37 ° C hergestellt.

• WaschenNach dem Ende der Warmtung entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten ein und waschen Sie 5 Mal wiederholt, um sicherzustellen, dass der Boden nicht gebunden ist.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) gefärbt.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die Probe, wenn sie verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.