Interfen-6 ELISA KIT

Interfen-6 ELISA KIT

Interfen-6 ELISA KITEs ist ein Werkzeug zur quantitativen Ermittlung des Interfin-6-Gehalts in Bioproben, das in wissenschaftlichen Bereichen wie der Immunologie und der Entzündungsforschung weit verbreitet ist. Hier ist eine Einführung:

1. PrüfprinzipAnwendung der Dual Antibody Clamped ELISA-Technologie. Die Enzymplatten in den Kits wurden mit Anti-IL-6-spezifischen Antikörpern vorverpackt. Nach dem Hinzufügen der Probe bindet IL-6 in der Probe an die Festphase-Antikörperspezifizität und bildet einen Antigen-Antikörper-Komplex. Anschließend wird ein enzym-markierter Anti-IL-6-Antikörper hinzugefügt, der sich weiter an IL-6 bindet, der an den Festphase-Antikörper gebunden ist, um eine Klemmstruktur zu bilden, die "Festphase-Antikörper - IL-6 - enzym-markierter Antikörper" ist. Nach dem Waschschritt werden die nicht gebundenen Stoffe entfernt und die Substratlösung (z. B. TMB) hinzugefügt. Unter der Enzymkatalyse erfolgt eine farbige Reaktion auf dem Substrat, wobei die Farbe in einem direkten Verhältnis zum Gehalt an IL-6 in der Probe ist. Durch die Messung der Absorption unter einer bestimmten Wellenlänge (in der Regel 450 nm) mit einem Enzymskalarer können die Konzentrationen von IL-6 in der Probe im Vergleich zur Standardkurve berechnet werden.

2. Zusammensetzung des Kits

• EnzymverbindungsplatteEs gibt 96 Loch oder 48 Loch Spezifikationen, vorverpackt gegen IL-6 Antikörper, die Träger der Reaktion sind.

• StandardprodukteIn der Regel sind es Gefriertrockner, in der Regel 2 Flaschen. Vor der Anwendung ist eine Standardverdünnung erforderlich, die in verschiedenen Konzentrationsgradienten verdünnt wird, wie z. B. 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung von zu hohen Probenkonzentrationen, um sicherzustellen, dass die Probenkonzentration im Bereich des Testkits liegt.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, der mit HRP gekennzeichnete Anti-IL-6-Antikörper ist eine konzentrierte Flüssigkeit, die mit einer enzymbasierten Antikörper-Verdünnung nach Bedarf verdünnt werden muss.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat reagiert mit HRP in enzymatisch markierten Antikörpern, wodurch sich die Farbe ändert.

• WaschflüssigkeitMehr als eine Konzentration, die mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verhältnismäßig verdünnt werden muss, um Enzym-Platten zu waschen, nicht gebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitIn der Regel ist es eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbenreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und leicht zu lesen.

• Dichtfilm: Decken Sie die Enzymplatten während der Temperaturbildung, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und äußere Verschmutzung zu verhindern.

• Gebrauchsanweisung: Detaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Vorsichtsmaßnahmen, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes, 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur, 1000 x g für 20 Minuten zentrifugieren, nehmen Sie die Reinigung auf. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaEs können Antikoagulante wie EDTA, Hepatin und andere verwendet werden. Innerhalb von 30 Minuten nach der Probenaufnahme, 1000 x g bei 2 - 8 ° C 15 Minuten zentrifugieren und aufnehmen.

• Zellkultur: Zellkultur auf 1000 x g Clear zentrifugieren für 20 Minuten, nach Entfernung von Zellstücken und Verunreinigungen, nehmen Sie die Clear für die Detektion.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit einem vorgekühlten Phosphatpuffer (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) und entfernen Sie das restliche Blut. Nach dem Zerkleinern des Gewebes wird PBS mit 1:9 (w/v) gedrückt und vollständig auf Eis geschliffen. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Sie lange aufbewahren möchten, müssen Sie sie bei -20 ° C oder -80 ° C einfrieren lassen, und um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden, ist die Blutlösprobe in der Regel nicht für den Test geeignet.

4. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und stellen Sie es 30 Minuten im Voraus auf Raumtemperatur. Gleichzeitig wird die konzentrierte Waschflüssigkeit im gewünschten Verhältnis mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch wird zur Probe xi-Freisetzung hinzugefügt, das Standard-Loch wird zu unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten hinzugefügt, das Probenloch wird zur behandelten Probe hinzugefügt, die Probenmenge pro Loch beträgt in der Regel 100 μL, leicht vermischt und 90 Minuten bei 37 ° C hergestellt.

• WaschenNach dem Ende der Warmtung entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten ein und waschen Sie 5 Mal wiederholt, um sicherzustellen, dass der Boden nicht gebunden ist.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) gefärbt.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die Probe, wenn sie verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.

5. Leistungsindikatoren

• TestbereichUnterschiedliche Kits sind üblich in einem Bereich von 15,6 bis 1000 pg/mL, um die Anforderungen an den IL-6-Gehalt in einer Vielzahl von Proben zu erfüllen.

• EmpfindlichkeitIn der Regel bis zu 7,8 pg / ml oder sogar niedriger, können Spuren von IL-6 in der Probe nachgewiesen werden.

• SpezifischeEs ist sehr spezifisch für IL-6 und hat kaum Kreuzreaktionen mit anderen Substanzen wie Zytokinen.

• WiederholbarkeitDer Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist in der Regel kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%, was die Stabilität und Zuverlässigkeit der Testergebnisse gewährleistet.