Interfen-5 ELISA KIT

Interfen-5 ELISA KIT

Interfen-5 ELISA KITEs ist ein wichtiges Werkzeug für die quantitative Untersuchung des Interfin-5-Gehalts in Bioproben und unterstützt die tiefgreifende Untersuchung von Immunreaktionen, Entzündungsmechanismen usw.

1. Prüfprinzip: Anwendung der Dual-Antikörper-Kerbinzym-Bindungsimmunadsorptionsmethode. Die Enzym-Plaketten des Kits sind mit spezifischen Antikörpern gegen IL-5 vorverpackt. Nach dem Hinzufügen der Probe bindet IL-5 in der Probe an die Festphase-Antikörperspezifizität. Anschließend wird ein enzym-markierter Anti-IL-5-Antikörper hinzugefügt, um den Komplex "Festphase-Antikörper - IL-5 - enzym-markierter Antikörper" zu bilden. Nach dem Waschen entfernen Sie die Unverbindungen und fügen Sie eine Substratlösung (z. B. TMB) hinzu, die unter enzymatischer Katalyse eine farbige Reaktion auftritt, wobei die Farbtündung proportional zum IL-5-Gehalt in der Probe ist. Durch die Messung der Absorption bei einer Wellenlänge von 450 nm mit einem Enzymskalarer, die mit der Standardkurve verglichen wird, wird die Konzentration von IL-5 in der Probe berechnet.

2. Zusammensetzung des Kits

• EnzymverbindungsplatteEs gibt 96 oder 48 Löcher, die vorverpackt sind gegen IL-5 Antikörper, die Träger der Reaktion sind.

• StandardprodukteIn der Regel sind es Gefriertrockner, in der Regel 2 Flaschen. Vor der Anwendung ist eine Standardverdünnung erforderlich, die in verschiedenen Konzentrationsgradienten verdünnt wird, wie 0, 7,8, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500 pg / mL, um die Standardkurve zu zeichnen.

• Probe xi Freisetzung: Verwendet zur Verdünnung von zu hohen Probenkonzentrationen, um sicherzustellen, dass die Probenkonzentration im Bereich der Testbox liegt.

• Enzym-basierte Antikörper: Das heißt, der HRP-markierte Anti-IL-5-Antikörper ist eine konzentrierte Flüssigkeit, die nach Bedarf mit einer enzymatisch markierten Antikörper-Verdünnung verdünnt werden muss.

• Enzym-basierte Antikörper-Verdünnung: Speziell für die Verdünnung von enzymatischen Antikörpern.

• SubstratlösungWie ein TMB-Substrat erzeugt eine HRP-Reaktion mit enzymatisch markierten Antikörpern eine Farbwänderung.

• WaschflüssigkeitMehr als eine Konzentration, die proportional mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser verdünnt werden muss, um Enzym-Platten zu waschen, nicht gebundene Substanzen zu entfernen und Hintergrundstörungen zu verringern.

• EndflüssigkeitIn der Regel ist es eine starke Säurelösung (wie Schwefelsäure), die zur Beendigung der Farbenreaktion des Substrats verwendet wird, um die Farbe der Reaktionsflüssigkeit zu stabilisieren und leicht zu lesen.

• Dichtfilm: Abdecken Sie die Enzymplatten bei der Temperaturzucht, um die Verdampfung von Flüssigkeiten und die äußere Verschmutzung zu verhindern.

• GebrauchsanweisungDetaillierte Beschreibung der Verwendung der Kits, Hinweise, Leistungsindikatoren usw.

3. Musteranforderungen

• SerumNach der Entnahme des Blutes, 2 Stunden oder über Nacht bei 4 ° C bei Raumtemperatur, 1000 x g für 20 Minuten zentrifugieren, nehmen Sie die Reinigung auf. Die Blutentnahme sollte ein Einweggerät ohne Thermogene und Endotoxine verwenden.

• BlutplasmaEs können Antikoagulante wie EDTA, Hepatin und andere verwendet werden. Innerhalb von 30 Minuten nach der Probenaufnahme, 1000 x g bei 2 - 8 ° C 15 Minuten zentrifugieren und aufnehmen.

• Zellkultur: Zellkultur auf 1000 x g Clear zentrifugieren für 20 Minuten, nach Entfernung von Zellstücken und Verunreinigungen, nehmen Sie die Clear für die Detektion.

• Organisation homogenenSpülen Sie das Gewebe mit einem vorgekühlten Phosphatpuffer (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) und entfernen Sie das restliche Blut. Nach dem Zerkleinern des Gewebes wird PBS mit 1:9 (w/v) gedrückt und vollständig auf Eis geschliffen. Nach 5000 x g Zentrifugierung für 5 - 10 Minuten, nehmen Sie die Reinigung für die Detektion.

• Wenn die Probe kurzfristig nachgewiesen wird, kann sie bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Sie lange aufbewahren möchten, müssen Sie sie bei -20 ° C oder -80 ° C einfrieren lassen, und um wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden, ist die Blutlösprobe in der Regel nicht für den Test geeignet.

4. Betriebsprozesse

• VorbereitungEntfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank und stellen Sie es 30 Minuten im Voraus auf Raumtemperatur. Gleichzeitig wird die konzentrierte Waschflüssigkeit im gewünschten Verhältnis mit destilliertem oder deionisiertem Wasser verdünnt.

• Zum BeispielStellen Sie Leerlöcher, Standardlöcher und Probenlöcher ein. Das leere Loch wird zur Probe xi-Freisetzung hinzugefügt, das Standard-Loch wird zu unterschiedlichen Konzentrationen von Standardprodukten hinzugefügt, das Probenloch wird zur behandelten Probe hinzugefügt, die Probenmenge pro Loch beträgt in der Regel 100 μL, leicht vermischt und 90 Minuten bei 37 ° C hergestellt.

• WaschenNach dem Ende der Warmtung entfernen Sie die Flüssigkeit in den Löchern, füllen Sie die Löcher mit Waschflüssigkeit, trocknen Sie nach 1 - 2 Minuten ein und waschen Sie 5 Mal wiederholt, um sicherzustellen, dass der Boden nicht gebunden ist.

• AntikörperZu jedem Loch fügen Sie 100 μL gut verdünnte enzymatische Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu, 37 ° C für 60 Minuten.

• Wieder waschenWiederholen Sie die oben genannten Reinigungsschritte.

• Farbe anzeigenZu jedem Loch werden 90 µl Substratlösung hinzugefügt, vorsichtig vermischt und bei 37 °C 15 bis 30 Minuten lang (je nach tatsächlicher Farbdesignation) gefärbt.

• Beenden der ReaktionZu jedem Loch werden 50 µL Termination zugegeben, wobei die Farbe der Lösung von blau auf gelb wechselt.

• LesungenInnerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz der Endflüssigkeit wird die Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.

• Berechnen Sie das Ergebnis: Standardkonzentration als horizontale Koordinate, OD-Wert als longitudinale Koordinate, Zeichnung der Standardkurve. Basierend auf dem OD-Wert der Probe, um die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve zu ermitteln, muss die Probe, wenn sie verdünnt wurde, mit dem entsprechenden Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden, um die tatsächliche Konzentration zu erhalten.