Populäres Tubulare Organkulturmedium Kit Plus

Menschliche Atemwege Organoid Kit Plus

Populäre Tubulare Organkulturmedium-KitMehr

1、 Produktbeschreibung

Modell-basierte biopopuläre Tubular-Organkultur-Kit (Menschliche Atemwege Organoid Kit PlusEs ist ein chemisch definiertes Zellkulturmedium für den Aufbau und die Aufrechterhaltung von Foliothroid-Stammzellen. Die Selbsterneuerung des Atemwegs-Epitheliums wird durch die Vermehrung der basalen Stammzellen angetrieben. Der Papilloid enthält Basalzellen, Fibrozyten, Sekretionszellen und eine kleine Anzahl von neuroendokrinen Zellen, so dass das Organ alle Eigenschaften des Atemwegs-Epitheliums in Bezug auf Architektur, Zelltypzusammensetzung und Selbsterneuerungsdynamik zeigt und somit ein großes Potenzial für die Entwicklung der Atemwege und die Krankheitsforschung hat.

2、 Produktinformation

3、 Andere eigene Materialien und Reagenzien

4、 Anleitung zur Verwendung von tubularen Medien

1、 Nach Erhalt des Organoiden wird das Medium in4℃Kühlschrank zum Auffrieren;

2、 Nachdem das Medium aufgefroren ist, wird es vollständig umgekehrt und nach dem täglichen Bedarf in einem Biosicherheitsschrank oder einem sauberen Arbeitstisch aufgeteilt. Es wird empfohlen, es in10 ml/Rohre;

3、 Das aufgeteilte Medium ist bitte verschlossen und gelagert in-20℃Bei der Verwendung kann das aufgeteilte Medium nach der Platzierung der Raumtemperatur ausgeglichen verwendet werden.

5、 Der Aufbau und die Übertragung von Popularorganen

Hinweis: Studien, die ursprüngliches menschliches Gewebematerial umfassen, müssen alle einschlägigen Behörden und Regierungsvorschriften einhalten. Bevor das primäre menschliche Gewebematerial gesammelt wird, muss die informierte Zustimmung aller Probanden eingeholt werden.

a) Erstellung der ursprünglichen Papilloiden

1、 Die ursprüngliche Gewebeprobe sollte getrennt werden.5 MinutenGefüllt mit vorgekühlter lebender Gewebekonservation (2-8℃In einem Probenrohr muss die Probe mit einem Live-Gewebe-Konservat bedeckt werden (ersetzen Sie die gesamte Lösung mit einem vorgekühlten Live-Gewebe-Konservat, wenn die Probe bereits in einem anderen Puffer oder Medium gelegt wurde). niedrige Temperatur)2~8℃Transport zum Labor.

2、 Vor dem Experiment das Material auflegen4℃Auf dem Eis auftauen, während das Medium entfernt wird, um Raumtemperatur-Gleichgewicht zu platzieren. Zentrifugerrohre, Prüfrohre oder Kunststoff-Saugköpfe, die mit Zellen in Kontakt stehen, müssen nach dem Waschen mit einer organoiden Kultur-Anti-Adhesion-Schmiermittel verwendet werden.

3、 Am sauberen Arbeitstisch wird die Probe in eine Petrischale übertragen, um zu beurteilen, ob das gewonnene Gewebe aus der Epithelie besteht. Wenn Fett oder Muskelgewebe vorhanden ist, entfernen Sie diese nicht-epithelialen Bestandteile so viel wie möglich mit einem Messer oder einer Pinzette unter einem anatomischen Mikroskop. Wenn es kein Fett oder Muskelgewebe gibt, gehen Sie sofort zum nächsten Schritt.

4、 Mit einem epitelialen Organ-Basis-Medium oder mit Dual AntibodyDPBSSpülen Sie das Gewebe zweimal.

5、 Verwenden Sie Pinzen, um die Organisation zu übertragen1,5 mlIn der Zentrifuge wird sterile auf Eis gebrochen in0.5~2mm²Größe.

6、 Zerkleinertes Gewebe verwenden50Vielfach das Gewebevolumen resuspendiert und übertragen zu15 mlInnerhalb des Zentrifugerrohres, blasen Sie wieder suspendierte Gewebeblöcke. auf37℃，100 Umdrehungen pro MinuteUnter den Bedingungen der thermostatischen Schüttelbett, horizontale Oszillation Verdauung15-30Minuten, jedes Mal10Minute Beobachtung der Gewebeverdauung, bis der Gewebeblock deutlich verstreut ist, wenn die Suspension trüber ist, nehmen Sie die angemessene Menge an Gewebeverdauungssuspension, bis die Suspension mehr lebende Zellklumpen hat, kann die Verdauung beendet werden, wenn der Gewebefragment größer ist oder die Verdauung nicht angemessen verlängert werden kann. Während der Verdauung können verschiedene Spezifikationen verwendet werden (Reihenfolge von groß bis klein wie10ml、5 ml、1 mlDie Pipette blast Gewebe Verdauungssuspension, um die vollständige Verdauung zu helfen. Wenn die meisten Organisationsstücke durchlaufen können1 mlBeim Absaugen des Pipettenkopfes ist der Verdauungsprozess abgeschlossen.

7、 gebenFBSZu der Gewebeverdauungsmischung hinzugefügt, wobei die Endkonzentration2%und verwenden100 μmZellfilter filtern.

8、 Filter sammeln und4℃nach unten250gZentrifugieren3Minuten. Im Falle einer sichtbaren roten Abfällung die Oberflüssigkeit absaugen und hinzufügen2 mlRote Blutkörperchen-Lysate resuspendiert und spaltet rote Blutkörperchen bei Raumtemperatur1Minuten und in4℃nach unten250gZentrifugieren3Minuten.

9、 Absorbieren Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Fällung in einem epitelialen Organ-Basis-Medium,4℃nach unten250gZentrifugieren3Minuten, wiederholen Sie diesen Schritt erneut, um die Verdauungsflüssigkeit zu entfernen undFBSVor der Zentrifugierung ist eine entsprechende Menge an Suspension wünschenswert, um die Zellaktivität zu prüfen.

10、 Absorbieren Sie die Oberflüssigkeit und nehmen Sie die angemessene Menge an Zellfällung nach den Kulturbedürfnissen und fügen Sie den Matrix-Glue hinzu (>70%und auf Eis mischen (Hinweis: die Bewegung des Mischens ist sanft zu bläsen, es ist nicht möglich, eine große Menge an Blasen zu erzeugen, die Mischung bei normaler Temperatur muss unter Kontrolle gestellt werden)15Innerhalb einer Sekunde) vermischt und auf Eis gelegt. Hinweis: Der Matrix-Kleber sollte auf Eis aufbewahrt werden, um zu verhindern, dass er sich verfestigt. den Prozess so schnell wie möglich durchführen. etwa10,000Eine Zelle sollte geimpft werden.25 μLIn der Substration. Nicht zu verdünnen der Matrix-Kleber (die Matrix-Kleber-Verhältnis sollte>70%(Volumen der Substrate)/Gesamtvolumen)), da dies die richtige Bildung von festen Tropfen hemmen kann.

11、 Stellen Sie die Mischung von Matrix-Glum und Zellen in die positive Unterseite der Kultivplatte und verwenden Sie den Pistolenkopf, um die Suspension leicht auszugleichen, um zu vermeiden, dass die Suspension die Seitenwände der Platte berührt. (Empfohlen:96Bohrplatte Impfung3 bis 10μL/Löcher,48Bohrplatte Impfung10 bis 20 μL/Löcher,24Bohrplatte Impfung20 bis 30 μL/Löcher).

Hinweis: Sobald die Organoide wieder in der Matrix-Kleber suspendiert sind, so schnell wie möglich die Platte zu pflanzen, da die Matrix-Kleber in der Probe oder Pipette Saugkopf kondensieren kann.

12、 Kulturplatte in37℃und5 % CO₂In der Ausbildungsbox15-25Minute, lassen Sie die Substrat-Gele koagulieren.

13、 Nach der Kondensation des Matrix-Gels fügen Sie langsam ein organoides Medium entlang der Wand hinzu, das bei Raumtemperatur ausgewogen ist, um zu vermeiden, dass die Kondensationsstruktur beschädigt wird. (Empfohlen:96Bohrplatte hinzugefügt100 μL/Löcher,48Bohrplatte hinzugefügt250 μL/Löcher,24Bohrplatte hinzugefügt500 μL/Löcher). Hinweis: Fügen Sie das Medium nicht direkt an die Spitze des Matrix-Gluetröpfens hinzu, da dies die gefestigte Struktur zerstören kann.

14、 Die Kultivplatte in37℃und5 % CO₂in einem thermostatischen Aufbaukasten.

15、 Jedes Mal2~3Wechseln Sie das Medium einmal am Tag, saugen Sie das Medium vorsichtig aus dem Loch und fügen Sie ein frisches, bei Raumtemperatur ausgewogenes organoides Medium hinzu.

16、 Der Wachstumszustand der Organoide sollte genau überwacht werden, idealerweise sollten die7-14innerhalb eines Tages gebaut.

b) Die Erzeugungskultur von populären Tubularen

1、 Organkultur bis zum Durchmesser von100 bis 500 μmWenn die Größe (oder wenn die Schwarzung nicht mehr erhöht wird) kann die Übertragung von Organoiden durchgeführt werden (pro Generation ca.1~2Woche). Folgende Verbrauchsmaterialien, die in Kontakt mit den Zellen stehen, müssen mit Schmiermitteln gespült werden:

2、 Absorbieren Sie das alte Medium, fügen Sie ein anderes Volumen-Epitelial-Basis-Medium hinzu, kraben Sie (oder blasen) Matrix-Kleber und Organoide mit einem Zellkraber oder Pipette-Saugkopf und übertragen Sie1,5 mlZentrifugerrohr (maximale Sammlung pro Rohr)2~3Lochorgane, um zu vermeiden, dass das Volumen zu groß ist, die Verdauungseffizienz ist niedrig), Blasen5~10Zweitens trennen Sie die Organoide und die Matrix,300gZentrifugieren3Minuten.

3、 Entfernen Sie die Flüssigkeit hinzugefügt5Verdauungsflüssigkeit, verdoppelt als das Volumen des Matrix-Klebstoffs und der organoiden Mischung, nach dem Blasen und Mischen in37℃Verdauung im Ausbaukasten5~10Minuten. Entfernen und mischen, nehmen10μLGemischte Flüssigkeitskopie prüfen, ob die Verdauung in kleinen Zellklumpen, Verdauung nicht ausreichend kann die Verdauungszeit angemessen verlängern. Wenn eine Zellzahl erforderlich ist, muss sie in einzelne Zellen verdaut werden, so kann die Verdauungszeit verlängert werden.10~20Minuten nach Beendigung der Verdauung hinter dem Panorama blaue Färbung für die Zellzählung. Die genaue Überwachung des Verdauungsprozesses ermöglicht eine kürzeste Inkubationszeit in einer organoiden Solution.

4、 Nach Abschluss der Verdauung fügen Sie5Vielfach Volumen Epitelial-Basis-Medium geblasen und gemischt, um die Verdauungsreaktion zu beenden und dann250gZentrifugieren3Minuten.

5、 Absorbieren Sie die Oberflüssigkeit und waschen Sie sie mit einem epithelialen Grundmedium2Zum Entfernen der restlichen Verdauungsflüssigkeit. Eine zweite Reinigung ermöglicht die Sammlung von Organoiden in derselben Zentrifugerrohr

6、 Nach dem Abschluss der Reinigung werden die Zellen in der Zentrifugalfällung durch eine Transplantationskultur kultiviert und der Zellalfällung ein Matrix-Kleber hinzugefügt (>70%und auf Eis mischen (beachten Sie, dass die Bewegung des Mischens sanft ist, die Menge an Blasen zu erzeugen ist, die Mischung bei normaler Temperatur muss in15Innerhalb einer Sekunde) vermischt und auf Eis gelegt. Hinweis: Das Verhältnis der Verdünnung sollte70%Dies dient zur Gewährleistung der strukturellen Stabilität des Matrix-Klebstoffs während des Kultivierungsprozesses.

7、 Stellen Sie die Mischung von Matrix-Glum und Zellen in die positive Unterseite der Kultivplatte und verwenden Sie den Pistolenkopf, um die Suspension leicht auszugleichen, um zu vermeiden, dass die Suspension die Seitenwände der Platte berührt. (Empfohlen:96Bohrplatte Impfung3 bis 10μL/Löcher,48Bohrplatte Impfung10 bis 20 μL/Löcher,24Bohrplatte Impfung20 bis 30 μL/Löcher). Hinweis: Um eine Kondensation bei Raumtemperatur zu verhindern, sollte dieser Schritt so schnell wie möglich durchgeführt werden.

8、 Kulturplatte in37℃und5 % CO₂In der Ausbildungsbox15-25Minute, lassen Sie die Substrat-Gele koagulieren.

9、 Nach der Kondensation des Matrix-Gels fügen Sie langsam ein organoides Medium entlang der Wand hinzu, das bei Raumtemperatur ausgewogen ist, um zu vermeiden, dass die Kondensationsstruktur beschädigt wird. (Empfohlen:96Bohrplatte hinzugefügt100 μL/Löcher,48Bohrplatte hinzugefügt250 μL/Löcher,24Bohrplatte hinzugefügt500 μL/Löcher). Hinweis: Fügen Sie das Medium nicht direkt an die Spitze des Matrix-Gluetröpfens hinzu, da dies die gefestigte Struktur zerstören kann.

10、 Die Kultivplatte in37℃und5 % CO₂in einem thermostatischen Aufbaukasten.

11、 Jedes Mal2~3Wechseln Sie das Medium einmal am Tag, saugen Sie das Medium vorsichtig aus dem Loch und fügen Sie ein frisches, bei Raumtemperatur ausgewogenes organoides Medium hinzu.

12、 Der Wachstumsstatus der Organoide wird genau überwacht, bis die Organoide den nächsten Experiment durchführen müssen

V2.1Ausgabe

Aktualisierung:2025/5/27