Krebszellen im Mund

Produktinformation

Name der Zelle：Krebszellen im Mund

Marke: Shanghai Bio
Anzahl der Zellen: 1x10^6 Zellen
Lebensfähigkeit: 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Zellvertragung: 1:4 bis 1:6; Wechseln Sie Flüssigkeit 2-3 Mal pro Woche
Wachstumsbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 %; Temperatur: 37°C
Zelltest: Zellen enthalten keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze
Kultivierungsbedingungen: DMEM (hoher Zucker) + 10% FBS + 1% P / S; 37℃，5% CO2
Übertragungsmethode: Empfehlung 1: 2-1: 3 Zweitägiger Wechsel
Gefrierbedingungen: keine Serumzellenfrierflüssigkeit
Gefrierbedingungen: 90% FBS + 10% DMSO
Zellfrieren: Flüssiger Stickstoff Gefrieren

Zellkultur Operationen

Trockeneis Transport：Sofort nach dem Empfang der Zellen in flüssigen Stickstoff übertragen werden müssen, um sie zu speichern, oder-80°CKühlschrank kurzfristig eingefroren oder direkt erholt

Temperaturtransport：Nehmen Sie die Zellkulturflasche sofort aus der Verpackung ab, nachdem Sie die Zellen erhalten haben, und befolgen Sie die folgenden Schritte zur Kulturübertragung.

Zellenübertragung：Die Zelldichte beträgt 80%-90%, so dass es möglich ist, eine Zellkultur durchzuführen.

Zellbetrieb Schritte in der Kultivflasche

Für klebende Zellen füllen wir vor dem Versand das Medium mit der gesamten Kulturflasche, um den Abfall der klebenden Zellen während des Produkttransports zu reduzieren.

1. Nachdem Sie die Zellen erhalten haben, beachten Sie, ob es eine Verschmutzung gibt. Legen Sie die Kulturflasche unter dem Umkehrmikroskop und prüfen Sie sorgfältig, ob sie trüb oder bakteriell kontaminiert ist. Weil es beim Transport Stoße gibt und einige Zellen auch sehr empfindlich für Temperaturänderungen sind, kann es einige Zellen geben, die schweben, diese Zellen sind immer noch lebende Zellen, bitte nicht wegwerfen, können nach der Generation von Zentrifugarreicherung verwendet werden.

2. Für klebende Zellen, in einer biosicheren Schrankumgebung, entfernen Sie das überschüssige Medium aus der Kulturflasche mit einer Vakuumpumpe bis zu den verbleibenden 5-8 mL und wählen Sie anschließend den geeigneten CO2-Gehalt entsprechend dem Medium aus.℃In einem thermostatischen Koffer kultivieren und den Flaschendeckel lösen. Wenn die Zellen die Kulturflasche voller sind, übertragen Sie sie sofort.

3. Für die suspendierten Zellen, die Zellen aus der Flasche in eine Zentrifugerrohr in einer biosicheren Schrankumgebung zu übertragen, 150 g für 5 Minuten zu zentrifugieren, nach der Entfernung auf Reinigung, die Zellen mit 5 ml Medium zu streuen, in eine neue Flasche zu übertragen und anschließend in den entsprechenden CO2-Gehalt 37℃In einer thermostatischen Kühlkammer kultiviert.

Operationsschritte zur Einfrierung von Rohrzellen

Hinweis: Um eine hohe Zelllenlebensrate zu gewährleisten, entfroren Sie die Kultur sofort nach Erhalt des Produkts.

1. Gefrierrohr auf 37 setzen℃Das Wasser im Bad rückläuft und taucht schnell auf. Um Verschmutzung zu vermeiden, stellen Sie sicher, dass die Gefrierröhre über der Wasseroberfläche platziert werden. Das Auffrieren dauert schnell, etwa eine Minute.

2. Sobald die Flüssigkeit im Gefrierrohr geschmolzen ist, wird sie sofort entfernt und die Oberfläche des Gefrierrohrs mit Alkohol gesprüht. Ab diesem Schritt muss der Nachlauf im Biosicherheitsschrank durchgeführt werden.

3. Die Flüssigkeit aus dem Gefrierrohr wird in ein Zentrifugerrohr mit 5 ml vollem Medium übertragen, 150 g für 5 Minuten zentrifugiert und das Oberwasser mit einer Vakuumpumpe entfernt.

4. Mit dem Medium suspendieren Sie die Zellen wieder und übertragen Sie sie in eine neue Flasche. Um die Überlebensrate der Zellresultation zu gewährleisten, setzen Sie das Medium in 37℃Nach der Vorwärmung des Bades.

5. Stellen Sie die Zellen in 37 mit geeignetem CO2℃In einer thermostatischen Kühlkammer kultiviert.

Klemmende Zelltransmissionskultur

1. Absaugen und Entfernen des Mediums aus der Flasche, fügen Sie PBSEinmal waschen.

2. Beitritt 10,25 ml (w/v) Trypsin-EDTALösung und setzen in 37Inkubieren Sie in einem Koffer, bis die Zellen von der Wand fallen getrennt. Dieser Prozess braucht etwa 3-5Minuten.

3. Beitritt 2mLVollständige Medium neutralisieren Panprotease und sanft blasen, um die Zellen von der Oberfläche der Kulturflasche zu blasen und die Zellen zu streuen.

4. Sammeln der Zellsuspension15 mlim Zentrifugerrohr,150 g Zentrifuge 5 MinutenEntfernen Sie mit einer Vakuumpumpe. Nehmen Sie die richtige Menge an Medium, um die Zellen wieder zu suspendieren und in eine neue Kulturflasche zu kultivieren.

Suspendierte Zelltransmission kann auf folgende Methoden verweisen:

1. Direkte Übertragung

1. Bis die suspendierten Zellen auf 80% ~ 90% ausgewachsen sind (die Zellsuspension wird gelb), können sie übertragen werden;

2. VerwendenStrohhalmAbsorbieren der Zellsuspension 1 / 2 ~ 1 / 3;

3. Fügen Sie eine angemessene Menge an frischem Medium hinzu und kultivieren Sie weiter.

   2. Zentrifugaltransmissionsmethode (bei Entdeckung von Zellstücken)

4. Zellsuspension zu übertragenZentrifugerrohreinnen;

5. 150 g 5 min zentrifugieren und die Oberschicht entfernen;

6. Zurücksuspendieren der Zellen mit frischem Medium;

7. Die Schleife saugt eine angemessene Menge an Zellsuspension und lädt neuePflanzenflaschenFügen Sie eine angemessene Menge an frischem Medium hinzu und pflegen Sie weiter.

Zellfriervorgänge

1. 1.000 rpm Entfernen Sie die Oberfläche für 5 Minuten. 1 ml Serum resuspendierte Zellen hinzufügen, Serum und DMSO je nach Zellzahl hinzufügen und vorsichtig vermischen，Die endgültige DMSO-Konzentration beträgt 10% und die Zelldichte ist nicht geringer als 1 x 10.⁶/mL， Jedes Gefrierrohr 1 ml Zellsuspension einfrieren, achten Sie darauf, dass das Gefrierrohr gut gekennzeichnet ist；

2. Das Gefrierrohr wird in eine Programmkühlbox gelegt, in einen Kühlschrank bei -80 ° C gelegt und nach mindestens 2 Stunden in eine Flüssigstickstoffaufbewahrung übertragen.