Menschliche Endometriumkrebszelle EFE184

menschliche EndometriumkrebszellenEFE184

Einführung:Die Zelllinie EFE184 stammt aus dem Bauchwasser einer 69-jährigen Frau mit wiederkehrendem Endometriankrebs. Diese Zellmorm ist monoschichtig epiteliale Zellen, die sehr langsam wachsen. Die Zelllinie EFE184 kann für die 3D-Zellkultur und die Krebsforschung verwendet werden.

Warennummer：WS-S1480

Spezifikation：1 x 106 Zellen/T25 Kulturflasche

Grundlegende Zellinformationen

- Quelle der Zellen: In situ: Gebärmutter; Übertragungsort: Bauchwasser

- Zellmorphologie: Epithelialzell-ähnlich, Adhesive Wachstum

- Zellgehalt: > 1 x 106 Zellen / Flasche

- VerpackungsspezifikationenT25 Kulturflasche / 1ml Gefrierrohr

Produktzweck: ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke,Es darf nicht als Behandlungsmittel für Tier- oder menschliche Erkrankungen verwendet werden.

Medium und Anbaubedingungen

1. Kulturmedium

RPMI1640 Kulturmedium; 10% Rinderserum; 1% doppelter Widerstand

Empfohlenes Serum:WinSera FBS500 - WP-002

2. Erziehungsbedingungen

- Gasphase: 95% Luft + 5% CO2 Temperatur: 37 ° C; Luftfeuchtigkeit: 70% - 80%

3. Einfrieren und Lagern

- Gefrierflüssigkeit: 90% Rinderserum + 10% DMSO (jetzt verfügbar)

Lagerbedingungen: Langfristige Lagerung von flüssigem Stickstoff

Transport und Empfang

1. Lieferung bei Normaltemperatur (T25-Flasche mit lebenden Zellen)

Nach Erhalt der Zellen. T25 Kultivierung des Flaschenkörpers zur Oberflächenzinfektion; Lassen Sie die Kultivflasche 2 - 3 Stunden in der Kultivkammer stehen; Beobachten Sie die Zelldichte und den Wachstumszustand und machen Sie 2 - 3 klare Fotos, um den Verkauf zu Feedback zu geben; Die Zelldichte kann nach Erreichen der Norm übertragen werden, und das Verhältnis der vorzeitigen Übertragung ist 1: 2 empfohlen; Wenn die Zellen wieder voll sind, wird eine ganze Flasche in 1 ml Gefrierrohr gefroren und die andere Flasche wird fortgesetzt. Es wird empfohlen, 2 - 3 Samenzellen wiederholt einzufrieren und anschließend ein Amplifikationsexperiment durchzuführen, um eine plötzliche Zelltrennung zu vermeiden.

Hinweis: Transport-Medium (Irrigation-Medium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie das Medium nach den Bedingungen der Anleitung Zellkultur neu formuliert Zellen zu kultivieren. Empfehlungen für die nachfolgende Zellgeneration erhalten Die T25-Kultivflasche wird 1:2 übertragen.

2. Trockeneislieferung (Gefrierrohrzellen)

Regelmäßige Lieferung 2 Gefrierbehälter, empfohlen, 1 wiederherzustellen und 1 Reservebehälter aufzubewahren; Wenn die Wiederherstellung scheitert, wird die zweite Strecke streng im Einklang mit dem Hersteller-Standard-Wiederherstellungsprozess betrieben; Wenn beide Wiederherstellungen scheitern, speichern Sie sofort ein Foto des gesamten Wiederherstellungsprozesses und informieren Sie den Verkauf rechtzeitig.

4. Schritte der Zellkultur

1. Gefrorene Zellresultation

1 ml Zellsuspension Gefrierrohr in 37 ° C Wasserbad setzen und schnell schütteln, um aufzufrieren;

- Fügen Sie ein Zentrifugerrohr mit 4 - 6 ml Medium und mischen Sie sanft;

- 1000 RPM Zentrifugieren für 3 - 5 Minuten und Entfernen der Oberflüssigkeit;

- Suspendieren Sie die Zellen mit einem Medium und impfen Sie sie in eine Flasche / Schale mit 6 - 8 ml Medium;

Kultiviert über Nacht bei 37 ° C und beobachtet am nächsten Tag den Zustand und die Dichte des Zellwachstums unter dem Mikroskop.

2. Für die Wandzellübertragung können die folgenden Methoden verwendet werden: (Zelldichte 80% - 90% übertragbar)

- Entfernen Sie die Kultur und schmieren Sie die Zellen 1 - 2 mal mit PBS ohne Kalzium und Magnesium.

- 0,25% (w / v) yi Protease - 0,53 mM EDTA in die Flasche (T25 Flasche 1 - 2 mL, T75 Flasche 2 - 3 mL) hinzufügen, in einem 37 ° C-Schacht für 1 - 2 Minuten verdauen (schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit angemessen verlängern), dann beobachten Sie die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen größtenteils runden und fallen, schnell wieder auf den Arbeitstisch zu nehmen, ein paar Klicks auf die Flasche und 3 - 4 ml des Mediums mit 10% FBS hinzufügen, um die Verdauung zu beenden.

- Nach sanftem Schlagen und Absaugen, 3 - 5 min bei 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1 - 2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen, um gut zu blasen. Die Zellsuspension wird in eine neue T25-Flasche im Verhältnis von 1: 2 aufgeteilt, 6 - 8 ml neues Medium hinzugefügt, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um das Wachstum der Zellen zu erhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 - 1: 5, je nach der tatsächlichen Situation.

3. Für suspendierte Zellen kann die Übertragung auf folgende Methoden beruhen:

- Hinweis: Das empfohlene Transmissionsverhältnis für die nächste Generation ist 1:2, das spätere Transmissionsverhältnis kann nach Bedarf des Kunden festgelegt werden.

- Methode 1: Sammeln Sie die Zellen, zentrifugieren Sie sie für 4 Minuten unter 1000 RPM, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, fügen Sie 1 - 2 ml Kulturflüssigkeit hinzu und blasen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium aufteilen.

Methode 2: Sie können die Hälfte des Wechsels wählen, nach dem Entfernen der Hälfte des Mediums, suspendieren Sie die verbleibenden Zellen und teilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 3 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.

4. Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente in der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

V. Vorsichtspunkte zur Biosicherheit

1. Alle tierischen Zellen gelten als potenziell biologisch gefährlich und müssen im biologischen Sicherheitsschrank der Klasse E zum persönlichen Schutz verwendet werden; Alle Abfälle und Gefäße, die mit den Zellen in Berührung kommen, müssen sterilisiert werden, bevor sie entsorgt werden können.

2. Wenn Sie gefrorene Zellen wiederherstellen, sollten Sie Schutzhandschuhe, Schutz Fu und Anti-Hu-Masken tragen; Das Gefrierrohr, das in flüssigem Stickstoff eingetaucht ist, kann lecken und flüssigen Stickstoff einfüllen. Flüssiger Stickstoff kann beim Auffrieren zu einem Explosion des Behälters führen, der Flaschendeckel stürzt und Menschen kratzen.