Menschliche Zahnmagstammzellen

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Quelle: Zahnmarggewebe

Spezifikationen: 5 x 105 Zellen / T25 Zellkultur Flasche

Zellen Einführung:

　　Menschliche ZahnmagstammzellenTrennung vom Schimmelgewebe; Das Zahnmarggewebe befindet sich in der Zahnmarghöhle im Inneren des Zähnes. Die Form des Zahnmargs ist ungefähr ähnlich wie die Form des Zahnkörpers, die Zahnkronenmarghöhle ist größer, die Marrokammer genannt wird, die Wurzelmerghöhle ist kleiner, die Wurzelröhre genannt wird, die Wurzelspitze hat kleine Löcher, die Wurzelspitzen genannt werden. Das Zahnmarggewebe besteht hauptsächlich aus Nerven, Blutgefäßen, Lymph und Bindegewebe sowie zahnbildenden Essenzzellen, die sich außerhalb des Zahnmargs befinden und ihre Rolle als Zahnbildende Essenz spielen. Aufgrund der unterschiedlichen Wirkung von Krankheitsstimulatoren und der Unterschiede in der Resistenz des Körpers treten verschiedene pathologische Veränderungen auf, die sich klinisch als eine Reihe verschiedener Symptome und Anzeichen manifestieren. Nach längerer Dauer verwandelt sich die Zahnmargblütung in eine akute Zahnmargentzündung. Mesenchymale Stammzellen (MSCs) stammen aus dem mittleren embryonalen Gewebe in der embryonalen Periode, haben ein starkes Selbstreplizierungs- und mehrdienstiges Differenzierungspotenzial, haben die Fähigkeit, sich zu einer Vielzahl von terminalen Zellen wie Fettzellen, Knorpelzellen, Knorpelzellen und Muskelzellen zu differenzieren. MSCs zur Reparatur von Knorpelschäden haben gute Anwendungsaussichten. Derzeit können sie aus Knochenmark, Fett, Schleimhaut, Knochen, Muskeln und anderen Geweben sowie aus Lamen, Nabelschnur und Nabelschnurblut isoliert und vorbereitet werden.

Methodenbeschreibung:

Die Isolierung des Unternehmens im Labor wurde durch Kollagen-Verdauungsmethode und niedrige Dichte verdünnte Klone vorbereitet, die Gesamtzellmenge beträgt etwa 5 x 10. Zellen und Flaschen.

Qualitätsprüfung:

Die Isolationen des Unternehmens wurden durch CD90-Immunfluorescenz identifiziert und können über 90% rein sein und enthalten keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze.

Ausbildungsinformationen:

Kulturmedium: Enthält FBS, Wachstumsadditive, Penicillin, Streptomycin usw.

Frequenz des Wechsels: alle 2-3 Tage

Wachstumsmerkmale: Wandkleber

Zellmorma: Fibrozytologisch

Eigenschaften: 3-5 Generationen

Verdauungsflüssigkeit: 0,25%

Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; CO2，5%

Wie können Zellen gefriert werden?

Gefriererhaltungsmethode 1: Gefrierrohr bei 4 ° C für 30 ~ 60 Minuten → (-20 ° C für 30 Minuten *) → -80 ° C für 16 ~ 18 Stunden (oder über Nacht) → Langzeitlagerung in der Dampfphase des Flüssigstickstofftanks.

Gefriererhaltungsmethode 2: Das Gefrierrohr wird in der programmierbaren Kühlmaschine des festgelegten Verfahrens auf 1-3 ° C bis -80 ° C pro Minute gelegt und dann in die Dampfphase des Flüssigstickstofftanks gelagert. -20 ° C darf nicht mehr als eine Stunde, um zu verhindern, dass Eiskristalle zu groß sind und eine große Anzahl von Zelltoden verursachen, können Sie diesen Schritt auch überspringen und direkt in den Kühlschrank -80 ° C setzen, aber die Überlebensrate ist etwas geringer.

Ausbildungsbetrieb:

1) Erholungszellen: Schütteln Sie das Gefrierrohr, das 1 ml Zellsuspension enthält, schnell in einem 37 ° C-Wasserbad aufzufrieren und fügen Sie 4 ml Medium hinzu, um gleichmäßig zu mischen. Zentrifugieren Sie bei 1000 RPM für 4 Minuten, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach 1-2 ml Medium. Dann fügen Sie alle Zellsuspension in eine Kulturflasche, um über Nacht zu kultivieren (oder fügen Sie die Zellsuspension in eine 10cm-Schale mit etwa 8ml Medium, um über Nacht zu kultivieren). Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

1 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in der Kultivflasche hinzufügen, in einem 37 ° C-Gehäuse für 1-2 Minuten zu verdauen, dann beobachten Sie die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen sich zum größten Teil runden und abfallen, schnell wieder auf den Arbeitstisch zurücknehmen, ein paar Klicks auf die Kultivflasche und eine kleine Menge Medium hinzufügen, um die Verdauung zu beenden.

3. Drücken Sie 6-8 ml / Flasche, um das Medium zu ergänzen, nachdem Sie es sanft schlagen und aussaugen, 4 Minuten unter 1000 RPM zentrifizieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit ergänzen und ausblasen.

Verteilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis 1: 2 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.

3) Zellfrieren: Wenn der Zellwachstumszustand gut ist, kann die Zellfrierung durchgeführt werden. Die unten aufgeführten T25-Flaschen sind klassifiziert;

1. Zellen einfrieren, nach dem Entfernen des Mediums, PBS reinigen nach 1 ml hinzugefügt, nach der Zellen abgerundet werden, 1 ml Serum enthaltendes Mediums hinzugefügt, um die Verdauung zu beenden, kann die Blutzählplatte verwendet werden.

2. 4min 1000rpm Zentrifuge entfernen Sie die Oberfläche. 1 ml Serum resuspendierte Zellen hinzufügen, je nach Zellzahl Serum und DMSO hinzufügen, vorsichtig vermischen, DMSO Endkonzentration von 10%, Zelldichte nicht weniger als 1x106 / ml, jedes Gefrierrohr 1 ml Zellsuspension einfrieren, beachten Sie, dass das Gefrierrohr gut gekennzeichnet ist.

3. Legen Sie das Gefrierrohr in die Kühlbox des Programms, legen Sie es in einen -80-Grad-Kühlschrank und übertragen Sie es nach 2 Stunden in die Lagerung mit flüssigem Stickstoff. Aufzeichnen Sie die Position des Gefrierrohres für das nächste Mal.

Versuchsbericht:

Produkte für wissenschaftliche Zwecke:

Trennung und Kultivierung:

1, unter sterilen Bedingungen, entfernen Sie das 1-3d Alter SD Ratten atriale Gewebe, dann waschen Sie diesen Gewebeblock mit PBS zweimal, dann wird es etwa 1mm3 Größe;

4 ml enzymatische Verdauungslösung (0,1% und 0,1% Typ I Collagenase) in den Gewebeblock hinzufügen, 10 Sekunden vermischen, 10 Minuten unter 37 ° C verdauen lassen, anschließend mit einem Tropfenschlag zu einer Einzelzellsuspension geblasen, natürlich ausfällen und das Oberwasser sammeln, nach 4 ° C mit einem 10 ° S enthaltenden Medium die Verdauung beenden;

3, das restliche Gewebe 3 bis 4 ml enzymatische Verdauungslösung hinzufügen, 10s mischen, 37 ° C nach der Verdauung 10 min, nach der oben genannten Methode sammeln und 4 ° C nach der Verdauung beenden, wiederholen Sie diesen Schritt 2-3 Mal, bis das Gewebe verdaut wird;

4, mit 200 Mesh Edelstahl Sieb Filter Zell Verdauungsflüssigkeit, 1200r / min Zentrifuge 10min, entfernen Sie die obere Reinigung, die Fällung Zellen mit einem 10S DMEM / F12-Medium gemischt, in einer 25cm2-Kulturflasche geimpft, in 37 ° C, 5% CO2-Kultivraum gelegt;

5, nach 1 h Differenz-Klebung, saugen Sie das Medium aus, nach dem experimentellen Bedarf in einer 6-Loch-Platte zu impfen, um die Kultur fortzusetzen.

Immunfluorescenzprüfung:

1, warten Sie auf das Wachstum der atrialen Muskelzellen auf 80% Fusion, entfernen Sie das Medium, spülen Sie die Zellen zweimal mit PBS, je 10 Minuten, und fixieren Sie die Zellen mit 4% Polyformaldehyde bei Raumtemperatur für 15 Minuten;

2. Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 Minuten, und dann unter 4 ° C-Bedingungen mit 0,1% Triton X-100-Membran für 15 Minuten;

Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 Minuten, und schließen Sie die Zellen mit 4% BSA für 30 Minuten bei Raumtemperatur;

Verdünnen Sie alpha-Actin im Verhältnis von 1: 100 und legen Sie es dann über Nacht in einem 4 ° C Kühlschrank, um die Zellen zu inkubieren;

5, PBS spülen Sie die Zellen dreimal, jeweils 10 min, verdünnen Sie die Anti-α-Aktin-Resistenz im Verhältnis von 1: 150, 1 h unter 37 ° C;

Spülen Sie 3 Mal mit PBS, jeweils 10 Minuten, dann beobachten Sie das Bild unter dem umgekehrten Fluoreszenzmikroskop und fotografieren Sie es.

Angiotensin II Antikörper

Angiotensin II Rezeptor 1 Antikörper

Angiogenin-1 Antikörper

Angiogenin-ähnliches Protein 2 Antikörper

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