Humaner Darmkrebszell HCT15/DDP

Name der Zelle:Humaner Darmkrebs-ZellenHCT15 / DDP　

Warennummer:WS155(HCT15)STR 鉴定）　　

Spezifikationen:1×106cells/T25 Kulturflasche

Verwendungszweck: Nur für wissenschaftliche Zwecke

1. Einführung der Zellen

Grund für diese ZelleHCT15 Zellen bauen DDP-resistente Medikamente Zellstamm.

II. Zelleigenschaften

1) Quelle: Darmkrebs

2) Morphologie: Epithelzellenartig, klebriges Wachstum

3) Inhalt: > 1x106 Zellzahl

4) Spezifikationen: T25 Flasche oder 1ml Gefrierrohrverpackung

5) Verwendungszweck: ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke.

III. Vorbereitung von Kulturmedien und Kultureinfrierungsbedingungen

1）Weitere Informationen finden Sie in der Anleitung.

Serum empfehlen wir FBS500-WP-002

2) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

3) Gefrierflüssigkeit: 90% Serum, 10% DMSO, jetzt verfügbar.

Vier,Zellbehandlung

1) Erholung der gefrorenen Zellen

wird enthaltenDas Gefrierrohr von 1 ml Zellsuspension wurde schnell in einem 37 ° C Wasserbad geschüttelt und aufgefroren und in ein Zentrifugerrohr mit 4-6 ml Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren 3-5min unter Bedingungen von 1000RPM, Entfernen der Oberflüssigkeit, das MediumZellen wieder aufhängen. Die Zellsuspension wird dann über Nacht in eine Kulturflasche (oder Schalen) mit 6-8 ml Medium bei 37 ° C kultiviert. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Für die Wandzellübertragung können die folgenden Methoden verwendet werden

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. Fügen Sie 0,25% (w / v) Bauchspeicheldrüsenbelaase-0,53 mM EDTA in die Flasche (T25 Flasche 1-2 mL, T75 Flasche 2-3 mL), in einem 37 ° C-Schacht für 1-2 Minuten verdauen (schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit angemessen verlängern), dann beobachten Sie die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen sich größtenteils runden und ausfallen, nehmen Sie schnell wieder auf dem Arbeitstisch, schlagen Sie auf die Flasche und fügen Sie 3-4 ml des Mediums hinzu, das 10% FBS enthält, um die Verdauung zu beenden.

3. Nach sanftem Schlagen und Absaugen, 3-5 Minuten unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen. Die Zellsuspension wird im Verhältnis von 1: 2 in eine neue T25-Flasche aufgeteilt, 6-8 ml eines neuen Mediums hinzugefügt, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um das Wachstum der Zellen zu erhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 je nach den tatsächlichen Umständen.

Hinweis: ZellenübertragungNach 1 bis 2 Mal kann die Vermehrung aufrechterhalten werden, um die Arzneimittelkonzentration auf 0,5 ug / ml zu erhöhen; Wenn die Zellen während des Prozesses aufhören zu vermehren und im schlechten Zustand sind, müssen die Medikamentkonzentrationen reduziert werden (halbiert) oder medikamentfreie Kulturen auf eine Zelldichte von etwa 8 x 105 Einheiten / ml verwendet werden, und wenn der Wachstumszustand besser ist, ersetzt sie durch die gewünschte Medikamentkonzentration.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

Hier unten.T25 Flasche zum Beispiel;

1. Sammeln Sie verdaute Zellen in die Zentrifuge nach dem Prozess der Zelltransmission, wenn die Zellen eingefroren werden, können Sie die Blutzählplatte verwenden, um die Gefrierdichte der Zellen zu bestimmen. Die empfohlene Gefrierdichte für allgemeine Zellen beträgt 1 x 106 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml.

1000 rpm Zentrifuge 3-5min, entfernen Sie die Oberfläche. Zurücksuspendieren Sie die Zellen mit einer vorbereiteten Zellfrierflüssigkeit, verteilen Sie die Zellen in ein Gefrierrohr nach 1 ml Gefrierflüssigkeit, die 1 x 106 bis 1 x 107 lebende Zellen / ml enthält, und kennzeichnen Sie den Namen, die Algebra, das Datum und andere Informationen.

Hinweis: Medikamente dürfen während der Gefrierung der Zellen nicht hinzugefügt werden.

2. Legen Sie die Zellen, die eingefroren werden sollen, in die Kühlbox des Programms, übernachten Sie in einem -80 ° Kühlschrank und übertragen Sie sie in einen flüssigen Stickstoffbehälter. Aufzeichnen Sie auch die Position der Gefrierrohre im flüssigen Stickstoffbehälter für die spätere Überprüfung und Verwendung.

Humaner Darmkrebszell HCT15/DDP