Wie Massenspektrum zur Proteinanalyse verwendet wird - Peptide Biotechnology

Wie Massenspektrum zur Proteinanalyse verwendet wird - Peptide BiotechnologyTesttechnik Service Details

Die Massenspektrometrie ist eine Methode zur Trennung und Prüfung basierend auf dem Masse-Ladungsverhältnis (m / z) von ionisierten Molekülen, die weit verbreitet in der dànbáizhì-Analyse verwendet wird. Durch Ionisierung der Probenmoleküle und Beschleunigung und Ablenkung im elektrischen oder magnetischen Feld, die Trennung basierend auf der Differenz in der Masse und der elektrischen Ladung der Ionen und die Aufzeichnung des Intensitäts- und Massenladungsverhältnisses der Ionen durch einen Detektor wird ein Massenspektrum der Probe erhalten. Diese Technik macht die dànbáizhì-Analyse effizienter und jīngqu, um die Struktur, Funktion und Wechselwirkungen von dànbáizhì zu untersuchen.

I. Schlüsselstufe der Massenspektrometrie für die dànbáizhì-Analyse

1. Probenvorbereitung von dànbáizhì: eine dànbáizhì-Probe kann einfache dànbáizhì sein (z. B. eine gereinigte dànbáizhì-Lösung mit einer Reinheit > 90%) oder eine komplexe Mischung (z. B. Zellrysate, Gewebeextrakte). Im Vorbereitungsprozess werden häufig Methoden wie SDS-PAGE Gelelektrophoresis, Affinitätsschichten und Gelfiltration zur Trennung und Reinigung von dànbáizhì verwendet, um sicherzustellen, dass die anschließende dànbáizhì-Analyse noch intensiver ist.

Protease-Analyse: Die Protease-Analyse ist ein wichtiger Schritt in der dànbáizhì-Analyse. Aufgrund des großen Molekülgewichts des gesamten dànbáizhì und der Schwierigkeiten der direkten Analyse ist es normalerweise erforderlich, das dànbáizhì-Enzym vor der Massenspektralisation in kleinere Peptidensegmente aufzulösen. Zu den häufig verwendeten Enzymen gehört Yídànbáiméi (Trypsin), das an Lysin und Jīngānsuān (Arginin) in dànbáizhì abgeschnitten wird, um polypeptidische Segmente aus 6-40 Aminosäureresten zu erzeugen.

3. Massenspektrometrie: Die enzymatischen Peptidensegmente werden durch ein Massenspektrometer analysiert. Ein Massenspektrometer besteht in der Regel aus drei Teilen: einer Ionenquelle, einem Massenanalysator und einem Detektor. Die Ionenquelle ist für die Ionisierung der Peptidensegmente verantwortlich, wobei häufig verwendete Methoden wie Elektrosprühionisierung (ESI) und Matrix-Assisted Laser Desorption / Ionisation (MALDI) verwendet werden. Der Massenanalysator trennt die Ionen nach dem Massenverhältnis, wie zum Beispiel Ionenfalle (Ion Trap), Flugzeit (TOF), Quadrupole (Quadrupole) und Orbitrap. Der Detektor erfasst die Intensität und das Massenverhältnis der Ionen und erzeugt ein Massenspektrum, das Daten für die anschließende dànbáizhì-Analyse liefert.

4. Datenbank-Abrufe und Qualifizierung von dànbáizhì: Die erhaltenen Massenspektrometriedaten müssen mit der dànbáizhì-Datenbank verglichen werden, in diesem Schritt wird in der Regel spezielle Software verwendet, die die Zuverlässigkeit der Identifikationsergebnisse in Scoring-Form beurteilt, indem ein Algorithmus die tatsächliche Massenspektogramm mit dem theoretischen Massenspektogramm (d.h. das nach der dànbáizhì-Enzymalyse vorhergesagte Peptidensegmentmassenspektogramm) abpasst.

II. Anwendung des Massenspektrums in der dànbáizhì-Analyse

1. Sequenzbestimmung von dànbáizhì: Durch die Massenspektrometrie kann die Aminosäuresequenz von dànbáizhì bestimmt werden. Im Allgemeinen wird nach der Analyse des dànbáizhì-Enzyms das Molekulargewicht der einzelnen Peptidensegmente durch Massenspektrometrie untersucht und die Sequenz des dànbáizhì in Kombination mit der Datenbanksuche abgeleitet.

2. Translationsmodifikationsanalyse von dànbáizhì: Die Massenspektrometrie kann die Translationsmodifikationen von dànbáizhì wie Phosphorylation, Acetylierung, Panvegetarisierung usw. erkennen. Durch die Analyse eines Massenspektogramms der Peptidensegmente in der Nähe der Modifikationsstellen können die Modifikationstypen und -stellen bestimmt werden und die Auswirkungen der Modifikation auf die dànbáizhì-Funktion aufgedeckt werden.

Quantitative Analyse von dànbáizhì: Die Massenspektrometrie kann auch für die quantitative Analyse von dànbáizhì verwendet werden. Die relative oder juéduí Fülle von dànbáizhì bestimmt sich durch die Messung der Massenspektrumsignalstärke eines dànbáizhì oder eines bestimmten Peptidensegments mittels Isotopmarkierungsmethoden (wie iTRAQ, TMT) oder ohne biāojìdìng (wie Label-Free Quantitation, LFQ). Dies ermöglicht es der dànbáizhì-Analyse, die Veränderungen in der Expression von dànbáizhì unter verschiedenen Bedingungen zu untersuchen.

4. dànbáizhì Wechselwirkungsforschung: Massenspektrometrie in Kombination mit dànbáizhì Wechselwirkungsexperimenten (z. B. Immun-Co-sedimentation IP) ermöglicht die Identifizierung und Analyse von Wechselwirkungsnetzen zwischen dànbáizhì. Dies hilft, die Funktionen und Regulationsmechanismen von dànbáizhì in den zellulären Signalwegen aufzudecken.

Die Massenspektrometrie wird ihren Anwendungsbereich in den Bereichen der Lebenswissenschaften und der Biomedizin weiter erweitern, insbesondere in der dànbáizhì-Analyse, indem sie schnellere und effizientere analytische Mittel bietet, um die Geheimnisse von dànbáizhì aufzudecken und wichtige wissenschaftliche Probleme zu lösen.

Besondere Biotechnologieprojekte von Betypake

1. Protein Sequenzierung

Mit dem neu eingeführten Obitrap Fusion Lumos Massenspektrometer von Thermo und dem Edman Degradation Sequencing System von Shimazu bietet PT Biotech eine Protein-Sequenzierungsanalyse auf Basis von Massenspektrum, einschließlich der Analyse der Aminosäure-Zusammensetzung von dànbáizhì, der Nduāncèxù-, Cduāncèxù- und Vollsequenzanalyse sowie der dànbáizhì-N-End-Sequenzanalyse auf Basis von Edman Degradation. Für die dànbáizhì unbekannter theoretischer Sequenzen wird ein dànbáizhì-Sequenzierungsdienst auf der Grundlage der Zero-Sequenzierung zur Analyse der Proteinsequenzen angeboten.

*Vorteile:

1. Mit dem weltweit fortschrittlichen Massenspektrometer Obitrap Fusion Lumos;

100% Abdeckung der ermittelten Zielproteinsequenz;

Bestimmbar Protein N-End bis zu 70 Aminosäuresequenzen;

Proben in verschiedenen Formen bestimmbar: Proteinlösung, PVDF-Proteinband;

5. Niedrige Probenverbrauchung: Proteinproben benötigen nur 5-10ug, um den Test abzuschließen;

Sequenzierung ist nicht von N-End-Modifikationen wie N-End-Schließung, PEC und Glykoxylierung beeinflusst.

II. dànbáizhì Gruppenlehre

Die Orbitrap Fusion Lumos-Plattform von Thermo Fisher wird mit Nano-LC kombiniert, um eine Vielzahl von analytischen Diensten für Quantitative dànbáizhì-Omik, Targeted dànbáizhì-Omik, Polypeptide-Omik und post-translationale modifizierte Proteomik bereitzustellen. Darüber hinaus hat PT Biotech einen neuen 4D dànbáizhì-Omik-Dienst auf der Grundlage von timsTOF Pro eingeführt, der Forschungsarbeiten in den Bereichen Spurprobenproteomik, Medizin mit großen Probenpopulationen und Hochdurchflussmodifikationsomik unterstützt.

*Vorteile:

1 . Quantitative Proteinanalyse mit hohem Durchsatz: Massenversuchungsanalyse in mehreren Kontrollgruppen zur Entdeckung neuer Biomarker;

2. in vivo und in vitro verschiedene dànbáizhì-Markierungsmethoden, die für die Analyse von Gewebe, Zellen, Blut und anderen Proben geeignet sind;

3. hohe Empfindlichkeit der Massenspektrumanalyse und hohe Wiederholbarkeit der Experimentergebnisse;

4. kann niedrigere Fülle von Proteinen erkennen, breiter linearer Bereich;

5. zhuānyè bioinformatische Analyse, die Analyse ist systematisch genauer.

Technische Analyse des Einzelzell-Massenspektroms

Prototype Biotechnology verwendet das Fluidigm-Massenspektromsystem für die einzellige Massenspektromtechnikanalyse, die die Zelloberfläche und das Innere der Moleküle mit Metallelementmarkern (in der Regel spezifischen Antikörpern, die mit Metallelementen gekennzeichnet sind) kennzeichnet, anschließend einzelne Zellen mit dem Stream-Zellprinzip trennt und anschließend das Atommassenspektrum einzelner Zellen mit der induktiv gekoppelten Plasma-Massenspektrometrie (ICP-MS) analysiert, zuì konvertiert die Atommassenspektromdaten in den signalisierenden molekularen Ausdruck auf der Zelloberfläche und im Inneren.

*Vorteile:

Technologiefortschritt, um technische Lücken zu füllen

Durch die Verwendung von Metall-markierten Antikörper-Technologien wird das Problem vermieden, dass herkömmliche Fluoreszenzkanale wenig und leicht miteinander beeinflusst werden. Mit der gleichzeitigen Charakterisierung mehrerer Indikatoren auf Einzelzellebene können 51 Zielproteine gleichzeitig nachgewiesen werden.

2. Große Anzahl von Analysen, niedrigere Kosten

Einzellige RNAseq ist durch Kosten und andere Faktoren eingeschränkt, die Anzahl der Analysen aller Probenzellen ist in der Regel etwa 2x10 ^ 4, während die Stream-Massenspektrometrie auf einmal (eine einzige Probe) mindestens 10 ^ 5 Zellen analysieren kann, um eine quantitative Verbesserung zu erzielen, und die Kosten sind nicht höher als die Einzellige RNAseq.

3. Große Anwendungsaussichten

① Die Ergebnisse des Stream-Massenspektrums können Veränderungen in der Zelltubpopulation geben und haben große Forschungsaussichten in Bezug auf die klinische Diagnose und die Erkrankungsmechanismusforschung;

Die Kombination von Metalletikettentechnologie mit anderen Technologien wird eine neue Anwendungsrichtung geben. Neben herkömmlichen Proteinen kann die Massenspektromzelltechnik auch für die Proteinmodifikation nach der Translation verwendet werden;

Sie können die Überlebensrate der Zellen, die Zellgröße, die mRNA-Transkriptor-Expression, die Geschwindigkeit der DNA-Synthese und die Protease-Aktivität erkennen.

Immunopeptidomische Analyse basierend auf hochpräzisem Massenspektrum und Entdeckung neuer Antigene

Die One-Stop-Lösung für die Immunopolypeptidomik-Analyse und die Entdeckung neuer Antigene auf der Grundlage eines hochpräzisen Massenspektrums von PT Biotech umfasst unsere patentierte, hochempfindliche Lösung zur Anreicherung und Identifizierung von Immunpeptiden. Wir unterstützen Sie bei der Identifizierung und Identifizierung von mehr als 10.000 Polypeptiden Typ I und 10.000 Polypeptiden Typ II. Immunpeptidomische Analysen mit unserer optimierten Hochdurchfluss-Immunpeptidomischen Analyseplattform ermöglichen wiederholbare Identifizierung und Quantifizierung aus zuì-kleinem Probenmaterial. Der Dienst kann auf großflächige Forschungen angewendet werden und soll Forschern helfen, Lösungen für Krebs, Immunerkrankheiten und Infektionskrankheiten zu finden und unbekannte Ziele zu erforschen.

V. Biologische Charakterisierung

Batepack basiert auf der hochauflösenden Massenspektrometrie-Technologie, MALDI TOF， Hocheffiziente chromatografische Trennungstechnologie, die eine Reihe von wánshàns Biopharmazeutische Analyse-Lösungen bietet, von der Aminosäure-Zusammensetzung und Strukturanalyse von Bioprodukten wie dànbáizhì, Polypeptiden, Antikörpern und Impfstoffen bis hin zur Analyse der Produktvariabilität und Reinheit. Ziel ist es, qualitativ hochwertige biopharmazeutische Analysedienste zur Verfügung zu stellen, um den Herstellern von Biopharmazeutika zu helfen, die Qualität von Biopharmazeutika zu verbessern.

Die sieben Testplattformen von Biotech

Biotech - Bioproduktcharakterisierung, Biomassenspektrometrie

Beijing Baitai Pak Biotechnology Co., Ltd. widmet sich der Bereitstellung von Zhuānyè-Dienstleistungen wie Qualitätskontrolle-Prüfung und Projektvalidierung für die Bio- / Pharma- und Medizingeräteindustrie. Das Labor des Unternehmens folgt den Vorschriften und Leitlinien der NMPA, ICH, FDA und EMA und hat durch die Zertifizierung des doppelten Qualitätssystems CNAS / ISO9001 ein vollständiges Qualitätssystem eingerichtet, Daten kalt-heiß / außerhalb des Ortes sichern, Geräte regelmäßig messen / während der Überprüfung, Software-Audit-Tracking, um Kunden integrierte Lösungen und technische Dienstleistungen zur Unterstützung der Forschung und Entwicklung neuer Arzneimittel, der Registrierung von Arzneimitteldeklarationen und der Freigabe der Produktion.

1. Das Unternehmen nimmt das Qualitätskontrollsystem ISO9001 an, zhuānyè bietet CRO-Testanalysedienste auf der Basis von Massenspektrum an;

2. durch das nationale CNAS-Labor anerkannt, um Kunden medizinische Qualitätsforschungsdienstleistungen zu bieten, die den globalen pharmazeutischen Vorschriften entsprechen;

3. Die Geschäftsbereiche umfassen dànbáizhì-Omik, Polypeptidomik, Metabolomik, Biopharmazeutische Charakterisierung, Einzelzellanalyse, Einzelzellmassenspektrometrie, Bio-Cloud-Analyse und Multi-Student-Massenspektrometrie-Integrationsanalyse;

4. sieben Qualitätskontrolle-Prüfplattformen, um Ihre One-Stop-Service-Anforderungen zu erfüllen;

5. Service 3000 + Unternehmen, 10000 + Kunden Auswahl;

6. Engagiert, Ihnen qualitativ hochwertige Biomasse-Spektrum-Analyse-Services zu bieten!

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