DH5 alpir-empfindliche Zellen*

DH5 alpir-empfindliche Zellen*

Produktname: DH5alpir Chemisch Kompetente Zelle
Produktnummer: G6018-10 (10 100ul), G6018-100 (100 100ul)
Spezifikationen / Einführung: G6018-10 (10 100ul), G6018-100 (100 100ul)

Gentyp

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA--arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ-thi -1 gyrA96 relAl phoA

Kurze Beschreibung.

Der CLBio DH5a-Inpir-Stamm stammt von DH5a und führt LAMpir in das DH5a-E. coli-Genom ein, also DH5a-Inpir, der das PIR-Protein ausdrücken kann, so dass Plasmide mit R6Kg ori-Replikatoren normal repliziert werden können. DH5a in den pir-Stamm fehlt Nukleinsäure-Endochetase (endA), verbessert die Produktion und Qualität der Plasmid-DNA; Rekombinase-Defekttyp (recA) reduziert die Wahrscheinlichkeit der homogenen Rekombination des eingesetzten Segments und gewährleistet die Stabilität der eingesetzten DNA; Das Vorhandensein von lacZOM15 ermöglicht DH5a für das Screening von blauen und weißen Flecken; DH5a wächst jedoch langsamer in den pir-Stamm und sollte die Wachstumszeit bei der Tablettenkultur oder flüssigen Shaker verlängern. CLBio DH5a λpir-empfindliche Zellen wurden durch ein spezielles Verfahren hergestellt, das pUC19-Plasmide mit einer Transformationseffizienz > 1X109 cfu / μg DNA nachweist.

Betriebsanweisung:

1. DH5a λpir-empfindliche Zellen werden von -80 ° C entnommen, schnell in das Eis eingefügt, nach 5 Minuten bis die Bakterien schmelzen, die ZielDNA (Plasmid oder Verbindungsprodukt) hinzugefügt und mit der Hand auf den Grund der EP-Röhre gemischt und 25 Minuten im Eis gelassen.

2.42 * C Wasserbad heiß für 45 Sekunden, schnell wieder Eis setzen. Lassen Sie es für 2 Minuten stehen und das Schütteln verringert die Umwandlungseffizienz.

3. 700 μl steriles LB-Medium ohne Antibiotika in das Zentrifugerrohr hinzufügen und nach 37 ° C bei 200 rpm 70 Minuten erholen.

4. 5000 rpm Zentrifugieren Sie die Bakterien für 1 Minute zu sammeln, lassen Sie auf etwa 100 μl sanft blasen, um schwere Mikroben zu schlagen und auf das entsprechende Antibiotika enthaltende LB-Medium zu beschichten.

Lassen Sie die Tablette mindestens 18 Stunden in einem 37 ° C-Koffer umgekehrt.

Hinweise：

1. GefühlszellenVorschlagLangsam im Eis schmelzen. Fügen Sie die ZielDNA innerhalb von 8 Minuten in das Eis hinzu und lassen Sie es nicht zu lange im Eis, lange Lagerung verringert die Transformationseffizienz.

Der DH5aλpir-Stamm wächst langsam und sollte die Wachstumsdauer der Bakterien verlängern (37 ° C, mehr als 18 Stunden), wenn sie auf einer Tablette kultiviert oder flüssig geschüttelt werden.

3. Die Umwandlung von hohen Konzentrationen von Plasmiden oder hocheffizienten Verbindungsprodukten kann die Menge an Bakterien, die am Ende für die Beschichtung verwendet werden, entsprechend reduzieren.

DH5 alpir-empfindliche Zellen*