Blaue Zunge Virase Antikörper ELISA Test Kit

Benutzungsanleitung für das Blauzungenvirensbindende Antikörper-Test-Kit

Prüfprinzip

Diese Kit besteht aus vorverpackten Enzym-Markierungsplatten, Enzym-Markierungsplatten und anderen Begleitreagenzien, während des Experiments in die Enzym-Markierungsplatte ein Kontrollserum und eine zu prüfende Probe hinzugefügt werden, wenn die Probe einen Antikörper gegen das Blauzungenvirus enthält, wird sie an das Antigen auf der Enzym-Markierungsplatte gebunden und nach dem Waschen der anderen nicht gebundenen Komponenten entfernt; Ein enzymatischer Marker wird erneut hinzugefügt, um eine spezifische Bindung an den Antigen-Antikörper-Komplex auf der enzymatischen Markerplatte aufzunehmen; Nach dem Waschen entfernen Sie die nicht gebundenen Enzymmarker, fügen Sie TMB-Substratflüssigkeit in das Loch hinzu und reagieren mit den Enzymmarkerverbindungen zu blauen Produkten, wobei die Farbtiefe mit dem spezifischen Antikörpergehalt in der Probe positiv korreliert; Nachdem die Reaktion beendet wurde, wird das Produkt gelb; Messung der Absorptionswerte in den einzelnen Reaktionslöchern mit einem Enzym-Calibrator bei einer Wellenlänge von 450 nm, um festzustellen, ob die Probe Antikörper gegen das Blauzungenvirus enthält.

Zusammensetzung des Kits

Lagerung und Gültigkeitsdauer

Lagerung bei 2-8 ° C, Gültigkeitsdauer 12 Monate.

Bitte nach dem Öffnen der Platte bei 2 bis 8 ° C vor Licht aufbewahren, um Feuchtigkeit zu vermeiden. Die Nutzungsdauer beträgt 2 Monate.

Anwendungsgeräte

Enzym-Calibrator mit einer Wellenlänge von 450 nm, 37 ° C-Thermostat, einstellbarer Spurenpipette.

Probenvorbereitung

1. Entnehmen Sie das Vollblut eines Tieres nach der üblichen Methode, um das Serum zu vorbereiten, das Serum muss hell sein, kein lösliches Blut und keine Verschmutzung haben. Die Probe kann innerhalb von 1 Woche bei 2 bis 8 ° C gelagert werden und muss langfristig bei -20 ° C gelagert werden.

2. Die konzentrierte Waschflüssigkeit sollte vor der Verwendung auf Raumtemperatur zurückgekehrt werden, um die Niederlage aufzulösen, und dann mit destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser zu 20-mal verdünnen, um eine Arbeitswaschflüssigkeit zu erhalten (z. B. 19 Teile destilliertes Wasser oder deionisiertes Wasser plus 1 Teil konzentrierter Waschflüssigkeit).

Prüfmethoden

1. Setzen Sie die Reagenzkatte 30 Minuten vor der Verwendung auf Raumtemperatur und stellen Sie sie auf Raumtemperatur zurück.

2. Nehmen Sie die gewünschte Menge an Enzym-Markierungsplatten, setzen Sie negative und positive Kontrolle für jedes 1 Loch, nicht verwendete Platten so schnell wie möglich versiegeln und bei 2 bis 8 ° C aufbewahren.

3. Probe Loch zunächst 5ul Probe zu prüfen, dann 95ul Probe Verdünnung hinzufügen, vollständig schwingung zu mischen.

4. Negative und positive Kontrolllöcher fügen negative und positive Kontrolllöcher jeweils 100 µl hinzu.

5. Mischen Sie, decken Sie mit einer Abdeckfolie ab und lassen Sie den 37 ° C-Wärmekammer 30 Minuten inkubieren.

6. Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, fügen Sie 250ul Arbeitswaschflüssigkeit zu jedem Loch hinzu, waschen Sie sie nach 60 Sekunden mit einer schockierenden Mischung ab, wiederholen Sie das Waschen 5 Mal und trocknen Sie die Flüssigkeit einmal.

7. 100 μl pro Loch mit einem enzymatischen Marker und 37 ° C Lichtschutzreaktion für 30 Minuten.

8. Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, fügen Sie 250ul Arbeitswaschflüssigkeit zu jedem Loch hinzu, waschen Sie sie nach 60 Sekunden mit einer schockierenden Mischung ab, wiederholen Sie das Waschen 5 Mal und trocknen Sie die Flüssigkeit einmal.

9. Abhängig von der Probenanzahl wird die Farbdesignation A und die Farbdesignation B im gleichen Volumenverhältnis als Substrat-Arbeitsflüssigkeit gemischt, die jetzt verwendet wird. Jedes Loch mit 100 µl, 37 ° C Lichtschutzreaktion für 10 Minuten, wenn es eine allgemeine Farbgebung Geschwindigkeit zu schnell ist, können Sie 5 Minuten vor dem Ende der Farbgebung, die Farbgebung Zeit * nicht länger als 15 Minuten.

10. 100 μl Endflüssigkeit pro Loch hinzufügen, vermischen und die Absorptionswerte (OD-Wert) der einzelnen Loche bei 450 nm bestimmen.

Referenzwert

Unter normalen Bedingungen ist die positive Kontrolle OD - negative Kontrolle OD > 0,2.

Interpretation der Testergebnisse

S/P = Probe OD - negative Kontroll OD / (positive Kontroll OD - negative Kontroll OD).

Bei S/P≥0,4 wird das Ergebnis als positiv interpretiert.

Bei 0,2 < S/P < 0,4 werden möglicherweise unzureichende Antikörpereffektivität oder eine verdächtige Infektion berücksichtigt.

Bei S/P < 0,2 wird das Ergebnis als negativ interpretiert.

Einschränkungen der Testmethode

1. Diese Kit dient nur als grobe Bewertung von Antikörpern gegen das Blauzungenvirus in qualitativen Testproben.

2. Diese Kit ist ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt und darf nicht für klinische Versuche oder menschliche Versuche verwendet werden.

Hinweise

1. beim experimentellen Betrieb müssen Handschuhe tragen, Arbeitskleidung tragen, streng solide und sterilisierte Isolationssysteme durchführen, alle Arten von Experimentsabfällen sollten nach Infektionsmitteln behandelt werden.

2. Die Endflüssigkeit ist korrosiv und sollte den Kontakt mit Haut und Kleidung vermeiden, bei unbevorsichtigtem Kontakt bitte sofort mit viel Leitungswasser spülen.

3. Enzym-Markierungsplatte aus der Kühlumgebung zu entfernen, sollte auf Raumtemperatur zurückgekehrt werden, um den Beutel zu öffnen, nicht ausgenutzte Enzym-Markierungsplatte muss in einem dichten Beutel mit Trocknungsmittel gelagert werden.

4. Konzentrierte Waschflüssigkeit kann bei niedriger Temperatur leicht kristallisiert werden und muss bei der Verwendung auf Raumtemperatur zurückgekehrt werden, um sich zu lösen.

Die Proben, die zur Prüfung verwendet werden, sollten frisch gehalten werden.

Die Bestimmung der Testergebnisse muss anhand der enzymatischen Messwerte erfolgen.

7. Verschiedene Batchennummern von Reagentien dürfen nicht gemischt werden.