All-in-One RT SuperMix für qPCR 试剂

Lagerbedingungen

-20℃

Produktzusammensetzung

All-in-One RT SuperMix für qPCR 试剂

Produktbeschreibung

Das All-in-One RT SuperMix für qPCR (mit dsDNase) ist ein effizientes, praktisches und verschmutzungsreduziertes hochwertiges Einkettensynthese-Kit mit allen Komponenten, die für die Einkettensynthese von cDNA erforderlich sind, wie M-MLV GIIIReverse Transcriptase und deren Reaktionspuffer, RNA-Enzym-Inhibitoren, dNTPs, Oligo(dT)20VN und Randomized Primers, die Reaktion beginnen können, indem Sie nur RNA-Schablonen und Wasser hinzufügen. All-in-One RT SuperMix for qPCR (withdsDNase) Als erweitertes Kit zur cDNA-Synthese mit einer Kette kann bis zu 12 kb cDNA innerhalb von 15 Minuten erhalten werden, die für qPCR, normale PCR usw. verwendet werden können. Die RNA, die aus Gewebe oder Zellen extrahiert wird, bleibt häufig mit der genomischen DNA kontaminiert, und wenn keine Entfernungsbehandlung vor der Transkription durchgeführt wird, wird die genomische DNA und die cDNA während der qPCR-Reaktion nachgelagert gleichzeitig vergrößert, insbesondere wenn der Prototyp auf dem gleichen Exon entworfen wird, was die quantitative Genauigkeit beeinflusst. Die dsDNase, die in diesem Kit verwendet wird, ist spezifisch in der Lage, die DNA in Doppelketten oder DNARNA-Hybriden zu verdauen, und ist thermisch empfindlich und kann schnell und irreversibel bei Retroreaktionstemperaturen deaktiviert werden. Im Vergleich zu den herkömmlichen Methoden, bei denen DNase I die DNA-Kontamination des Genoms entfernt, muss dsDNase nicht zusätzlich EDTA zur Deaktivierung hinzufügen, was nicht nur die Experimentszeit spart, sondern auch die Unterdrückung der Retroskriptionsreaktion verringert. Abhängig vom Schweregrad der genomischen DNA-Kontamination kann die Methode der Degenomische DNA-Kontamination getrennt von der Retroskription oder der Degenomische DNA-Kontamination und der Retroskription in einem Schritt ausgewählt werden.

Gebrauchsanweisung

RNA-Proben mit niedrigem DNA-Gehalt im Genom (empfohlenes Schema)

All-in-One RT SuperMix für qPCR 试剂

Auf Eis wird folgendes Reaktionssystem hergestellt:

a. Es wird empfohlen, eine hochwertige RNA als Vorlage zu verwenden, die aus einem Kit extrahiert wurde.

② sanft vermischt, vorübergehend;

37 ° C 2 min, um die DNA-Kontamination des Genoms zu entfernen;

55°C bei 15 min.

5. Nach Beendigung der Reaktion, 85 ° C 2 min, um die Reaktion zu beenden;

Die erhaltene cDNA wird schnell auf Eis gelegt, um nachfolgende Experimente durchzuführen. Sofort bei -20 ° C aufbewahren.

RNA-Proben mit hohem Genom-DNA-Gehalt

Entfernung der DNA-Kontamination des Genoms

Auf Eis wird folgendes Reaktionssystem hergestellt:

a. Es wird empfohlen, die RNA aus dem Kit als Vorlage zu verwenden.

② sanft vermischt, vorübergehend;

37 ° C 2 min, um die DNA-Kontamination des Genoms zu entfernen;

Hinweis: Wenn die DNA-Kontamination des Genoms in der RNA schwerwiegend ist, kann die Temperatur von 37 ° C auf 5 min angemessen verlängert werden.

65 ° C 2 min, um die dsDNase zu deaktivieren und auf Eis zu setzen.

Erstkettige cDNA-Synthese

Auf Eis wird folgendes Reaktionssystem hergestellt:

② sanft vermischt, vorübergehend;

bei 50°C 15 min;

Hinweis: Wenn die ZielRNA keine Poly(A)-Struktur enthält, können Sie 10 min vor 25 ° C temperieren.

Nach dem Ende der Reaktion, 85 ° C 2 min, um die Reaktion zu beenden;

Die erhaltene cDNA-Lösung wird auf Eis für nachfolgende Experimente gelegt.

Hinweis: cDNA-Lösung bei -20 ° C gelagert werden, empfohlen nicht länger als 1 Woche; Bei -80 ° C kann langfristig gelagert werden.

Hinweise

Die Vormischung enthält bereits Oligo(dT)20VN und Zufallsprozidente, die nicht nur für eukaryotische mRNA mit Poly(A)-Struktur, sondern auch für Protokaryotische RNA, eukaryotische rRNA und tRNA ohne Poly(A)-Struktur geeignet sind, aber nicht für kleine RNA-Vorlagen wie miRNA.

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