Vollständige Überprüfung der subzellulären Proteomik-Arbeitsabläufe (einschließlich Massenspektrum und

Vollständige Überprüfung der subzellulären Proteomik-Arbeitsabläufe (einschließlich Massenspektrum undSILAC Technologie) Prüftechnik Service Details

Im postgenomischen Zeitalter wird die Subzelluläre Proteomik zu einer entscheidenden Forschungsrichtung für die Entdeckung von Zellfunktionen, Signalwegen und Krankheitsmechanismen. Im Vergleich zur ganzzelligen dànbáizhì-Omik konzentriert sich die Untersuchung auf der subzellulären Ebene auf die Proteinexpression, die Positionierung und die dynamische Veränderung in bestimmten Zellorganismen (z. B. Mitochondrien, Endogennetze, Zellkerne usw.), um eine höhere räumliche Auflösung zu ermöglichen.

1. Warum Subzelluläre dànbáizhì Genomik wählen?

Obwohl die traditionelle dànbáizhì-Omik umfangreiche Ergebnisse bei der Erkrankungsbiomarker-Screening und Signalwegsstudien erzielt hat, ist ihre räumliche Auflösung oft begrenzt. In Tumorzellen zum Beispiel spiegeln Änderungen in der Expression des gesamten Proteomeniveaux die Protein-Translokation auf Organebene nicht direkt wider.

Subzelluläre dànbáizhì Omik durch jīngzhǔn Isolation und quantitative Analyse von Zellorganien kann:

• Entdecken Sie den dynamischen Transport von Proteinen zwischen verschiedenen Zellorganen.

• Erkennung der krankheitsbezogenen lokalen Proteinexpression Anomalien.

• Wiederherstellung der Protein-Netzwerkstruktur in der Raum-Zeit-Dimension.

In dieser Forschungsrichtung ist die gemeinsame Anwendung von hochauflösenden Massenspektrumplattformen und quantitativen Markierungsstrategien besonders wichtig.

Kern-Arbeitsabläufe der Subzellulären dànbáizhì-Omik

Probenvorbereitung und Isolierung von Subzellkomponenten

Die qualitativ hochwertige Subzellisolierung ist die Grundlage des gesamten Prozesses. Zu den aktuellen Mainstream-Methoden gehören:

• Differenzzentrifugation: Geeignet für die grobe Trennung der meisten Organe (z. B. Mitochondrien, Kerne, Blasen usw.).

• Dichte Gradient Zentrifuge (wie Sucrose oder Percoll Gradient): zur weiteren Reinigung der Zielzellen.

• Immunaffinitätsseparation: Anreicherung bestimmter Zellorgane durch Antikörper, geeignet für Zellstrukturen, die schwer zu trennen sind.

• Subcellular Localization Mapping: Verbesserung der räumlichen Auflösung durch die Kombination von Technologien wie SILAC.

2. Proteinextraktion und Enzymschneiden

Die Arten und Fülle von Proteinen in den verschiedenen Organen unterscheiden sich erheblich, weshalb das Puffersystem bei der Proteinextraktion optimiert werden muss, wie z. B.:

• Für die angereicherten Proben von módànbái wird die Verwendung eines hochsalzigen + nicht-ionischen Entreinigungsmittels empfohlen.

• Kernkomponenten, die Nukleensäuren enthalten, müssen Nukleatasen hinzufügen, um die Viskosität der Probe zu reduzieren.

Das Enzymschneiden wird in der Regel mit Yídànbáiméi (Trypsin) durchgeführt und bei Bedarf mit Coenzymen wie Lys-C verbunden, um die Schneideffektivität des komplexen Proteins zu erhöhen.

Quantitative Strategie Detaillierung: SILAC Vorteile in der subzellulären dànbáizhì Omik

1 Was ist SILAC?

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture） Es ist eine Metabolic Marking-Strategie, die die relative Quantifizierung von dànbáizhì-Spiegeln durch die Einführung von Aminosäuren mit schweren Stickstoffisotopen während der Zellkultur erreicht. Zu den Vorteilen gehören:

• Keine chemische Modifikation erforderlich, um nicht physiologische Veränderungen zu vermeiden.

• Geeignet für dynamische Transportforschung.

• Natürlich kompatibel mit dem Massenspektrum und mit hoher quantitativer Genauigkeit.

In der subzellulären dànbáizhì-Omik eignet sich SILAC besonders für:

• Protein-Positionierungskartenkonstruktion: Verschiedene SILAC-Markierungsgruppen simulieren verschiedene Organe, um Positionierungsinferenzen durch Markierungsintensität und Verteilungsmuster durchzuführen.

• Dynamische Transportstudie: Änderungen der SILAC-Labeling-Intensität vor und nach der Behandlung, die Trends der Proteinmigration aufdecken.

• Omnischer Vergleich unter hohen Durchfluss-Filterbedingungen.

SILAC vs. andere quantitative Technologien (TMT, Label-free)

Massenspektrumanalyse und Dateninterpretation

Instrumentauswahl: hohe Auflösung vs. hoher Durchsatz

Die subzelluläre dànbáizhì-Omik empfiehlt in der Regel die Verwendung von hochauflösenden Massenspektrometern (z. B. Orbitrap Exploris, timsTOF-Serie) zur Verbesserung der Erkennung von Proteinen mit niedriger Fülle und Isotopetiketten.

2. Datenverarbeitungsprozesse

Typische Analyseprozesse umfassen:

• Vorverarbeitung von Rohdaten (Raw to mzML).

• Identifizierung und Quantifizierung von Isotopen (MaxQuant, Proteome Discoverer usw.).

• Unterstützung durch Software zur Vorhersage der subzellulären Positionierung (z. B. MetaMass, SubCons usw.).

• Erweiterte Analysen und Funktionskommentare (GO, KEGG, Reactome).

Besonders wichtig ist die Qualitätskontrolle der Daten bei realen Projekten. Zum Beispiel:

• Die Proteinabdeckung ist ausgewogen.

• Ist die Isotopauflösung ausreichend?

• Ob Batch-Effekt-Störungen vorhanden sind.

Subzelluläre dànbáizhì Omik ist eine wichtige Brücke zwischen der Konnektionsproteinexpression und der Zellfunktion. Mit der Erhöhung der Empfindlichkeit des Massenspektrums und der Diversifizierung der quantitativen Techniken ist die jīngquē-Omik auf subzellulärer Ebene ein Mittel zum Verständnis komplexer Phänomene des Lebens geworden. In Zukunft werden neue Richtungen wie die räumliche Polyomik, die KI-unterstützte Ortungsprognose und die Einzelzell-Subzytomik die Forschungsgrenzen weiter erweitern. Biotech wird kontinuierlich den One-Stop-Service-Prozess von der Probenverarbeitung über die Massenspektrometrie bis zur Interpretation von lebenden Informationen optimieren, um Forschern zu helfen, die Geheimnisse des Lebens in höherer Auflösung zu erforschen.

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Besondere Biotechnologieprojekte von Betypake

1. Protein Sequenzierung

Mit dem neu eingeführten Obitrap Fusion Lumos Massenspektrometer von Thermo und dem Edman Degradation Sequencing System von Shimazu bietet PT Biotech eine Protein-Sequenzierungsanalyse auf Basis von Massenspektrum, einschließlich der Analyse der Aminosäure-Zusammensetzung von dànbáizhì, der Nduāncèxù-, Cduāncèxù- und Vollsequenzanalyse sowie der dànbáizhì-N-End-Sequenzanalyse auf Basis von Edman Degradation. Für die dànbáizhì unbekannter theoretischer Sequenzen wird ein dànbáizhì-Sequenzierungsdienst auf der Grundlage der Zero-Sequenzierung zur Analyse der Proteinsequenzen angeboten.

*Vorteile:

1. Mit dem weltweit fortschrittlichen Massenspektrometer Obitrap Fusion Lumos;

100% Abdeckung der ermittelten Zielproteinsequenz;

Bestimmbar Protein N-End bis zu 70 Aminosäuresequenzen;

Proben in verschiedenen Formen bestimmbar: Proteinlösung, PVDF-Proteinband;

5. Niedrige Probenverbrauchung: Proteinproben benötigen nur 5-10ug, um den Test abzuschließen;

Sequenzierung ist nicht von N-End-Modifikationen wie N-End-Schließung, PEC und Glykoxylierung beeinflusst.

II. dànbáizhì Gruppenlehre

Die Orbitrap Fusion Lumos-Plattform von Thermo Fisher wird mit Nano-LC kombiniert, um eine Vielzahl von analytischen Diensten für Quantitative dànbáizhì-Omik, Targeted dànbáizhì-Omik, Polypeptide-Omik und post-translationale modifizierte Proteomik bereitzustellen. Darüber hinaus hat PT Biotech einen neuen 4D dànbáizhì-Omik-Dienst auf der Grundlage von timsTOF Pro eingeführt, der Forschungsarbeiten in den Bereichen Spurprobenproteomik, Medizin mit großen Probenpopulationen und Hochdurchflussmodifikationsomik unterstützt.

*Vorteile:

1 . Quantitative Proteinanalyse mit hohem Durchsatz: Massenversuchungsanalyse in mehreren Kontrollgruppen zur Entdeckung neuer Biomarker;

2. in vivo und in vitro verschiedene dànbáizhì-Markierungsmethoden, die für die Analyse von Gewebe, Zellen, Blut und anderen Proben geeignet sind;

3. hohe Empfindlichkeit der Massenspektrumanalyse und hohe Wiederholbarkeit der Experimentergebnisse;

4. kann niedrigere Fülle von Proteinen erkennen, breiter linearer Bereich;

5. zhuānyè bioinformatische Analyse, die Analyse ist systematisch genauer.

Technische Analyse des Einzelzell-Massenspektroms

Prototype Biotechnology verwendet das Fluidigm-Massenspektromsystem für die einzellige Massenspektromtechnikanalyse, die die Zelloberfläche und das Innere der Moleküle mit Metallelementmarkern (normalerweise spezifischen Antikörpern, die mit Metallelementen gekennzeichnet sind) kennzeichnet, anschließend einzelne Zellen mit dem Stream-Zellprinzip trennt und anschließend das Atommassenspektrum einzelner Zellen mit der induktiv gekoppelten Plasma-Massenspektrometrie (ICP-MS) analysiert, zuì konvertiert die Atommassenspektrumdaten in den signalisierenden molekularen Ausdruck auf der Zelloberfläche und im Inneren.

*Vorteile:

Technologiefortschritt, um technische Lücken zu füllen

Durch die Verwendung von Metall-markierten Antikörper-Technologien wird das Problem vermieden, dass herkömmliche Fluoreszenzkanale wenig und leicht miteinander beeinflusst werden. Mit der gleichzeitigen Charakterisierung mehrerer Indikatoren auf Einzelzellebene können 51 Zielproteine gleichzeitig nachgewiesen werden.

2. Große Anzahl von Analysen, niedrigere Kosten

Einzellige RNAseq ist durch Kosten und andere Faktoren eingeschränkt, die Anzahl der Analysen aller Probenzellen ist in der Regel etwa 2x10 ^ 4, während die Stream-Massenspektrometrie auf einmal (eine einzige Probe) mindestens 10 ^ 5 Zellen analysieren kann, um eine quantitative Verbesserung zu erzielen, und die Kosten sind nicht höher als die Einzellige RNAseq.

3. Große Anwendungsaussichten

① Die Ergebnisse des Stream-Massenspektrums können Veränderungen in der Zelltubpopulation geben und haben große Forschungsaussichten in Bezug auf die klinische Diagnose und die Erkrankungsmechanismusforschung;

Die Kombination von Metalletikettentechnologie mit anderen Technologien wird eine neue Anwendungsrichtung geben. Neben herkömmlichen Proteinen kann die Massenspektromzelltechnik auch für die Proteinmodifikation nach der Translation verwendet werden;

Sie können die Überlebensrate der Zellen, die Zellgröße, die mRNA-Transkriptor-Expression, die Geschwindigkeit der DNA-Synthese und die Protease-Aktivität erkennen.

Immunopeptidomische Analyse basierend auf hochpräzisem Massenspektrum und Entdeckung neuer Antigene

Die One-Stop-Lösung für die Immunopolypeptidomik-Analyse und die Entdeckung neuer Antigene auf der Grundlage eines hochpräzisen Massenspektrums von PT Biotech umfasst unsere patentierte, hochempfindliche Lösung zur Anreicherung und Identifizierung von Immunpeptiden. Wir unterstützen Sie bei der Identifizierung und Identifizierung von mehr als 10.000 Polypeptiden Typ I und 10.000 Polypeptiden Typ II. Immunpeptidomische Analysen mit unserer optimierten Hochdurchfluss-Immunpeptidomischen Analyseplattform ermöglichen wiederholbare Identifizierung und Quantifizierung aus zuì-kleinem Probenmaterial. Der Dienst kann auf großflächige Forschungen angewendet werden und soll Forschern helfen, Lösungen für Krebs, Immunerkrankheiten und Infektionskrankheiten zu finden und unbekannte Ziele zu erforschen.

V. Biologische Charakterisierung

Batepack basiert auf der hochauflösenden Massenspektrometrie-Technologie, MALDI TOF， Hocheffiziente chromatografische Trennungstechnologie, die eine Reihe von wánshàns Biopharmazeutische Analyse-Lösungen bietet, von der Aminosäure-Zusammensetzung und Strukturanalyse von Bioprodukten wie dànbáizhì, Polypeptiden, Antikörpern und Impfstoffen bis hin zur Analyse der Produktvariabilität und Reinheit. Ziel ist es, qualitativ hochwertige biopharmazeutische Analysedienste zur Verfügung zu stellen, um den Herstellern von Biopharmazeutika zu helfen, die Qualität von Biopharmazeutika zu verbessern.

Die sieben Testplattformen von Biotech

Biotech - Bioproduktcharakterisierung, Biomassenspektrometrie

Beijing Baitai Pak Biotechnology Co., Ltd. widmet sich der Bereitstellung von Zhuānyè-Dienstleistungen wie Qualitätskontrolle-Prüfung und Projektvalidierung für die Bio- / Pharma- und Medizingeräteindustrie. Das Labor des Unternehmens folgt den Vorschriften und Leitlinien der NMPA, ICH, FDA und EMA und hat durch die Zertifizierung des doppelten Qualitätssystems CNAS / ISO9001 ein vollständiges Qualitätssystem eingerichtet, Daten kalt-heiß / außerhalb des Ortes sichern, Geräte regelmäßig messen / während der Überprüfung, Software-Audit-Tracking, um Kunden integrierte Lösungen und technische Dienstleistungen zur Unterstützung der Forschung und Entwicklung neuer Arzneimittel, der Registrierung von Arzneimitteldeklarationen und der Freigabe der Produktion.

1. Das Unternehmen nimmt das Qualitätskontrollsystem ISO9001 an, zhuānyè bietet CRO-Testanalysedienste auf der Basis von Massenspektrum an;

2. durch das nationale CNAS-Labor anerkannt, um Kunden medizinische Qualitätsforschungsdienstleistungen zu bieten, die den globalen pharmazeutischen Vorschriften entsprechen;

3. Die Geschäftsbereiche umfassen dànbáizhì-Omik, Polypeptidomik, Metabolomik, Biopharmazeutische Charakterisierung, Einzelzellanalyse, Einzelzellmassenspektrometrie, Bio-Cloud-Analyse und Multi-Student-Massenspektrometrie-Integrationsanalyse;

4. sieben Qualitätskontrolle-Prüfplattformen, um Ihre One-Stop-Service-Anforderungen zu erfüllen;

5. Service 3000 + Unternehmen, 10000 + Kunden Auswahl;

6. Engagiert, Ihnen qualitativ hochwertige Biomasse-Spektrum-Analyse-Services zu bieten!

Vollständige Überprüfung der subzellulären Proteomik-Arbeitsabläufe (einschließlich Massenspektrum undSILAC Technologie) Prüftechnik Service Details