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Telefon
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Adresse
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Mesa Labs
Genaue Bestimmung freier Antigene in 100% Serum mit Gyrolab
Datum:2025-11-05Lesen Sie:0
Gregor Jordan et al. von Roche haben auf der Gyrolab-Plattform eine Methode zur Immunanalyse entwickelt, um freie Antigene in Vollserum zu erkennen, die darauf ausgerichtet ist, die Herausforderungen der folgenden Plasmaanalyse zu lösen:
Die Verdünnung der Probe führt zur Isolation des Antigen-Antikörper-Komplexes,Überschätzung der freien Antigenkonzentration
Kurze Halbwertszeit (<100 Sekunden) des Antikörper-Antigen-Komplexes und keine präzise Erfassung durch herkömmliche LBA-Methoden
Bei Anwesenheit therapeutischer Antikörper ist es schwierig, freie und gebundene Antigene zu unterscheiden
Diese Methode verwendet das Prinzip der Brücken-Immunanalyse mit den folgenden Schritten:
1
Markiert nach der Erfassung Antikörper Paket auf der Affinitätssäule von Kettenschimmel
2
Beitrittunverdünnte SerumprobeDas freie Antigen bindet sich an den gefangenen Antikörper.
3
BeitrittMarkierte Detektion von AntikörpernBindung an ein anderes Epitope des Antigens
4
Erkennung von Signalen, quantitatives freies Antigen
Methodische Schlüsselanforderungen
Antikörper erfassen und Antigen-Epitope erkennenNicht überlappen
Erfassung von Antikörpern und therapeutischen AntikörpernKonkurrenz mit dem gleichen Epitope des Antigens
Extrem kurze Inkubationszeit (vorzugsweise < 2 Sekunden)
Keine Probenverdünnung erforderlich, um Komplexe zu vermeiden
Forschungsziele
Bewertung der "Clearance-Effizienz" von Antikörpern gegen CCL2, d.h. ob Antikörper effektiv binden und freie CCL2 entfernen.
研究Methode
Plattformen und Methoden
Experimentales Design
Kalibrierkurven und Qualitätskontrolle
Kalibrierungsbereich: 2430 pg/mL → 10 pg/mL
QC-Probe:
Hoher QC: 1820 pg/mL
Mittel QC: 230 pg/mL
Niedriger QC: 30 pg/ml
Akzeptierte Kriterien:
±20% Abweichung, CV < 15%
Medikamenteinterventionsgruppe
CNTO0888: Einzelspezifischer Anti-CCL2-Antikörper (Kontrolle)
CKLO2-SG1095: Doppelspezifischer Anti-CCL2-Antikörper (experimentelle Gruppe)
Konzentrationseinstellungen：
Niedrige Dosis: 7,5 ng/mL oder 15 ng/mL
Hohe Dosis: 10 μg/ml
Ergebnisse und Diskussionen
CNTO0888 Freies CCL2 bei hohen Konzentrationen fast vollständig entfernt
CKLO2-SG1095 hat eine geringere Effizienz, ist jedoch deutlich besser alsLeere Gruppe
Duamab weist bei niedrigen Dosen noch eine mittlere Clearance auf, was auf eine Dosisabhängigkeit hinweist
Forschungsziele
Die Konzentration des freien Komplements C5 in unverdünnten Serumproben wird schnell und genau bestimmt, um die in vivo Wirksamkeit von Antikörpern gegen C5 (z. B. Eculizumab, Crovalimab) zu bewerten.
研究Methode
Plattformen und Methoden
ExperimenteErgebnisse
Linearer Bereich: 0,55 – 3000 ng/ml
LOQ：0.5 ng/mL， Ausreichend zur Erkennung von < 0,1 % freiem C5(Gesamtmenschlicher C5 ≈ 400 nM)
Zusammenfassung
Technische Vorteile der Methode
Inkubationsfreies Flow-Through-Modell der Gyrolab-Plattform,Nicht-spezifische Bindungen in der Matrix erheblich reduzieren und die Interferenzen der Matrix effektiv reduzierenUnterstützt werden kann in der AnalyseVollserumprüfungundReduzierung der Entfernung von Antikörper-Antigen-Komplexen durch InkubationSo wird die Analyse von freien Objekten genauer und effizienter.
Referenzen:
[1] Verfahren zur Bestimmung des freien Antigens eines Antikörpers in einer Probe, Gregor Jordan, Martin Schaefer, Maria Viert; Pub Nr. US2023/0393125 A1.
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