Toledo-Leute sprechen große B-Zellen-Lymphozyten

Toledo-Leute sprechen große B-Zellen-Lymphozyten

Zellen präsentieren

Toledo ist eine Linie von B-Lymphozyten, die 1990 aus dem peripheren Blut von erwachsenen weißen weiblichen Patienten mit diffusen Großzellenlymfomen (Nicht-Hodgkin-B-Zellen) isoliert wurde. Nach einer hohen Dosierung von liao und Knochenmarkstransplantationen entwickelte der Patient anschließend ein Hirnlymfom. Obwohl die Zellen morphologisch ähnlich sind wie das Burkett-Lymphom, fehlt es den typischen Chromosomendisplacementen für das Burkett-Lymphom. Der Nukleotyp zeigt tatsächlich eine Vielzahl von Chromosomenverzerrungen. Die Zellen drücken keine Oberflächen- oder Zytoplasmaimmunglobuline aus. Diese Zellen sind negativ gegen das Epstein-Barr-Virus.

Zellen Eigenschaften

1) Quelle: Erwachsene weiße Frauen Isolierte B-Lymphozyten aus dem peripheren Blut

2) Morphologie: Lymphozytenartig suspendiertes Wachstum

3) Inhalt: > 1x106 Zellzahl

4) Spezifikationen: T25 Flasche oder 1ml Gefrierrohrverpackung

5) Verwendungszweck: ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke.

Transport und Lagerung

Trockeneis Transport und Erholung von gut überlebenden Zellen

(1) 1mL Gefrierrohr Verpackung Trockeneis Transport, nach Erhalt von -80 Grad Kühlschrank aufbewahren über Nacht in flüssigen Stickstoff oder direkt Erholung, wenn Trockeneis gefunden wurde flüchtig und sauber, Gefrierrohr Flaschendeckel abgefallen, gebrochen und Zellen kontaminiert, bitte kontaktieren Sie uns sofort.

(2) T25-Flasche Erholung von überlebenden Zellen bei normaler Temperatur versendet, nach Empfang nach der Behandlung nach Empfang der Zelle.

Behandlung nach Zellenempfang

1) Nach dem Empfang der Zellen, 75% Alkohol desinfizierte Flasche Wand T25 Flasche in 37 ° C Kulturkammer für ca. 2-3 h platziert, wenn die Kulturflasche gebrochen, Flüssigkeit überlaufen und die Zellen kontaminiert sind, bitte kontaktieren Sie uns rechtzeitig, nachdem Sie ein Foto gemacht haben.

2) Bitte bestätigen Sie den Zellstand unter dem 4- oder 5X-Mikroskop und machen Sie gleichzeitig 2-3 Fotos der gerade empfangenen Zellen (10 x, 20 x) und ein Bild des Aussehens der Kulturflasche, um den Zellstand nach dem Verkauf zu erhalten.

3) Klebstoffzellen: Die Zellen werden 2-3 h in einem 37 ° C-Kulturraum platziert, beobachten Sie das Wachstum der Zellen und den Klebstoffzustand unter dem Mikroskop, einige Klebstoffzellen fallen während des Express-Transports aufgrund der Vibration ab und nach dem Abfall der Gruppierung. Wenn die Wachstumsdichte der Zellen unter dem Spiegel betrachtet wird, wenn sie unter 60% liegt, können Sie das Intrusionsmedium in der Flasche entfernen (wenn keine Zellen, die an der Wand geklebt sind, zentrifugiert werden müssen, in die ursprüngliche Flasche wieder suspendiert werden) und das neu zusammengesetzte fertige Medium 6-8 mL hinzufügen, um den Zellkulturf fortzusetzen. Wenn die Zellwachstumsdichte über 70-80% beträgt, kann die Zelle übertragen werden. Während der Übertragung müssen Zellen, die aufgrund von Transportvibrationen abgefallen sind, zentrifugiert zurückgewinnt werden.

4) Hinweis: das Transportmedium (Irrigationsmedium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie es mit dem neuen Komplettmedium, das gemäß den Bedingungen der Anleitung zur Zellkultur entwickelt wurde, um Zellen zu kultivieren. Eine Übertragung nach Empfang der Zellen empfiehlt eine T25-Kultivflasche 1: 2 Übertragung.

Toledo-Leute sprechen große B-Zellen-Lymphozyten

I. Vorbereitung des Kulturmediums und der Gefrierbedingungen

1) RPMI-1640 (empfohlen iCell-0002) Medium vorbereiten; Hochwertiges Rinderserum, 10%; Doppel, 1 Prozent.

Hinweis: Suspendieren Sie die Zellen mit dem empfohlenen WAN Voll-Medium und verteilen Sie sie in eine T25-Flasche. Es ist wichtig, eine hohe Kultivbasis während der Zellrückgewinnung zu vermeiden. Es wird empfohlen, einen Kulturbehälter mit WAN-Vollwachstumsmedium für mindestens 15 Minuten in die Küche zu legen, bevor der Flascheninhalt hinzugefügt wird, um den normalen pH-Wert des Mediums (7,0 bis 7,6) zu erreichen.

2) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

3) Gefrierflüssigkeit: 90% Serum, 10% DMSO, jetzt verfügbar.

2. Zellbehandlung:

1) Erholung der gefrorenen Zellen:

Das Gefrierrohr, das 1 ml Zellsuspension enthält, wird in einem 37 ° C Wasserbad schnell geschüttelt und aufgefroren und in ein Zentrifugerrohr mit 4-6 ml fertigem Quan-Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren Sie 3-5min unter 1000 RPM-Bedingungen, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und vollständig das Medium resuspendieren Sie die Zellen. Dann fügen Sie die Zellsuspension in eine Kulturflasche (oder Schalen) mit 6-8 ml fertigem Quan-Medium über Nacht bei 37 ° C zu kultivieren. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Für die Wandzellübertragung können die folgenden Methoden verwendet werden

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. Fügen Sie 0,25% (w / v) Pancreatin mei-0,53 mM EDTA in eine Flasche (T25 Flasche 1-2 mL, T75 Flasche 2-3 mL) hinzu, verdauen Sie es in einem 37 ° C-Kammer, bis die Zellschicht sich ausbreitet (in der Regel innerhalb von 5 bis 15 Minuten), um das Medium auf einen normalen pH-Wert (7,0 bis 7,6) zu bringen, und beobachten Sie dann die Zellverau unter dem Mikroskop, um Klumpen zu vermeiden, und schlagen oder schütteln Sie die Flasche nicht, während Sie auf die Zellteilung warten, um die Zellen zu rühren. Schwierig zu trennende Zellen können bei 37 ° C platziert werden, um die Dispersion zu erleichtern. Wenn sich die Zellen zum größten Teil runden und abfallen, nehmen Sie schnell den Tisch zurück und klicken Sie auf die Kulturflasche und fügen Sie 3-4 ml Medium mit 10% FBS hinzu, um die Verdauung zu beenden.

3. nach sanftem Schlagen aussaugen, 3-5 min unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen. Verteilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in eine neue T25-Flasche, fügen Sie 6-8ml eines neuen WAN-Vollkulturmedies hinzu, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um die Wachstumsleistung der Zellen aufrechtzuerhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 je nach den tatsächlichen Umständen.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

Beispiel für die Flasche T25:

1. Sammeln Sie verdaute Zellen in die Zentrifuge nach dem Prozess der Zelltransmission, wenn die Zellen eingefroren werden, können Sie die Blutzählplatte verwenden, um die Gefrierdichte der Zellen zu bestimmen. Die empfohlene Gefrierdichte für allgemeine Zellen beträgt 1 x 10^6 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml.

2. 1000 rpm Zentrifuge 3-5min, entfernen Sie die Oberfläche. Zurücksuspendieren Sie die Zellen mit einer vorbereiteten Zellfrierflüssigkeit, verteilen Sie die Zellen in ein Gefrierrohr nach 1 ml Gefrierflüssigkeit, die 1 x 10 ^ 6 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml enthält, und kennzeichnen Sie den Namen, die Algebra, das Datum und andere Informationen.

3. Legen Sie die Zellen, die eingefroren werden sollen, in die Kühlbox des Programms, übernachten Sie in einem -80 ° Kühlschrank und übertragen Sie sie anschließend in einen Flüssigstickstoffbehälter zur Lagerung. Aufzeichnen Sie auch die Position der Gefrierrohre im flüssigen Stickstoffbehälter für die spätere Überprüfung und Verwendung.