NCI-H69 menschliche kleine Zellen Lungenkrebs Zellen STR-Identifizierung

NCI-H69 menschliche kleine Zellen Lungenkrebs Zellen STR-Identifizierung

Zellen präsentieren

Die Zelllinie stammt aus dem Lungengewebe eines 55-jährigen weißen Männers, der nicht-ganzheitliche Zellen bildet, die sich in weichem Agal kolonisieren und die kleine Zellkrebsmormologie und -mikrostruktur sowie die Zellmerkmale von APUD beibehalten. Die Zellen sammeln sich, so dass die Zellzahl ungenau ist. Die Keratin-Färbung der Zellen ist positiv. Das N-myc-Gen wurde vergrößert und hat die Expression von mRNA und Proteinen. Die C-myc-mRNA-Expression ist niedriger als das Protein.

Es gibt Expressionen von c-myb, v-fes, v-fms, c-raf 1, Ha-ras, Ki-ras und N-ras mRNA. Die Zellen bilden bei nackten Ratten leicht Tumoren mit typischen histologischen Merkmalen für kleine Zellkrebs. Kolonien in weichem Agal gebildet.

Zellen Eigenschaften

Quelle: 55 Jahre alt weißer Mann Lunge

2) Morphologie: Mehrzellige Aggregate suspendiert Wachstum

3) Inhalt: > 1x106 Zellzahl

4) Spezifikationen: T25 Flasche oder 1ml Gefrierrohrverpackung

5) Verwendungszweck: ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke.

Transport und Lagerung

Trockeneis Transport und Erholung von gut überlebenden Zellen

(1) 1mL Gefrierrohr Verpackung Trockeneis Transport, nach Erhalt von -80 Grad Kühlschrank aufbewahren über Nacht in flüssigen Stickstoff oder direkt Erholung, wenn Trockeneis gefunden wurde flüchtig und sauber, Gefrierrohr Flaschendeckel abgefallen, gebrochen und Zellen kontaminiert, bitte kontaktieren Sie uns sofort.

(2) T25-Flasche Erholung von überlebenden Zellen bei normaler Temperatur versendet, nach Empfang nach der Behandlung nach Empfang der Zelle.

Behandlung nach Zellenempfang

1) Nach dem Empfang der Zellen, 75% Alkohol desinfizierte Flasche Wand T25 Flasche in 37 ° C Kulturkammer für ca. 2-3 h platziert, wenn die Kulturflasche gebrochen, Flüssigkeit überlaufen und die Zellen kontaminiert sind, bitte kontaktieren Sie uns rechtzeitig, nachdem Sie ein Foto gemacht haben.

2) Bitte bestätigen Sie den Zellstand unter dem 4- oder 5X-Mikroskop und machen Sie gleichzeitig 2-3 Fotos der gerade empfangenen Zellen (10 x, 20 x) und ein Bild des Aussehens der Kulturflasche, um den Zellstand nach dem Verkauf zu erhalten.

3) Klebstoffzellen: Die Zellen werden 2-3 h in einem 37 ° C-Kulturraum platziert, beobachten Sie das Wachstum der Zellen und den Klebstoffzustand unter dem Mikroskop, einige Klebstoffzellen fallen während des Express-Transports aufgrund der Vibration ab und nach dem Abfall der Gruppierung. Wenn die Wachstumsdichte der Zellen unter dem Spiegel betrachtet wird, wenn sie unter 60% liegt, können Sie das Intrusionsmedium in der Flasche entfernen (wenn keine Zellen, die an der Wand geklebt sind, zentrifugiert werden müssen, in die ursprüngliche Flasche wieder suspendiert werden) und das neu zusammengesetzte fertige Medium 6-8 mL hinzufügen, um den Zellkulturf fortzusetzen. Wenn die Zellwachstumsdichte über 70-80% beträgt, kann die Zelle übertragen werden. Während der Übertragung müssen Zellen, die aufgrund von Transportvibrationen abgefallen sind, zentrifugiert zurückgewinnt werden.

4) Hinweis: das Transportmedium (Irrigationsmedium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie es mit dem neuen Komplettmedium, das gemäß den Bedingungen der Anleitung zur Zellkultur entwickelt wurde, um Zellen zu kultivieren. Eine Übertragung nach Empfang der Zellen empfiehlt eine T25-Kultivflasche 1: 2 Übertragung.

NCI-H69 menschliche kleine Zellen Lungenkrebs Zellen STR-Identifizierung

I. Vorbereitung des Kulturmediums und der Gefrierbedingungen

1) RPMI-1640 (empfohlen iCell-0002) Medium vorbereiten; Hochwertiges Rinderserum, 10%; Doppel, 1 Prozent.

2) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

3) Gefrierflüssigkeit: 90% Serum, 10% DMSO, jetzt verfügbar.

2. Zellbehandlung:

1) Erholung der gefrorenen Zellen:

Das Gefrierrohr, das 1 ml Zellsuspension enthält, wird in einem 37 ° C Wasserbad schnell geschüttelt und aufgefroren und in ein Zentrifugerrohr mit 4-6 ml fertigem Quan-Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren Sie 3-5min unter 1000 RPM-Bedingungen, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und vollständig das Medium resuspendieren Sie die Zellen. Dann fügen Sie die Zellsuspension in eine Kulturflasche (oder Schalen) mit 6-8 ml fertigem Quan-Medium über Nacht bei 37 ° C zu kultivieren. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Für suspendierte Zellen kann sich die Übertragung auf folgende Methoden beziehen:

Die Zellen, die im Zustand der Suspension wachsen, können den Wachstumszustand der Zellen aufrechterhalten, indem sie Wan-Vollmedium in die Flasche hinzufügen, und im Allgemeinen kann die Zelldichte bei 1 x 105 ~ 1 x 106 PCs / ml (unterschiedliche Zelldichte sind unterschiedlich) aufrechterhalten werden, um das normale Zellwachstum aufrechtzuerhalten. Wenn Sie die Zellsuspension in 1000 rpm in der Zentrifugeröhre sammeln möchten, 5 min zentrifugieren, den oberen Reinigungsmittel entfernen, 1-2 ml Kultur hinzufügen und die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in die neue T25-Flasche aufteilen, 6-8 ml hinzufügen, das neue WAN-Vollkulturmedium gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um die Wachstumsleistung der Zellen aufrechtzuerhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 ~ 1: 5 nach den tatsächlichen Umständen.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

Beispiel für die Flasche T25:

1. Sammeln Sie verdaute Zellen in die Zentrifuge nach dem Prozess der Zelltransmission, wenn die Zellen eingefroren werden, können Sie die Blutzählplatte verwenden, um die Gefrierdichte der Zellen zu bestimmen. Die empfohlene Gefrierdichte für allgemeine Zellen beträgt 1 x 10^6 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml.

2. 1000 rpm Zentrifuge 3-5min, entfernen Sie die Oberfläche. Zurücksuspendieren Sie die Zellen mit einer vorbereiteten Zellfrierflüssigkeit, verteilen Sie die Zellen in ein Gefrierrohr nach 1 ml Gefrierflüssigkeit, die 1 x 10 ^ 6 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml enthält, und kennzeichnen Sie den Namen, die Algebra, das Datum und andere Informationen.

3. Legen Sie die Zellen, die eingefroren werden sollen, in die Kühlbox des Programms, übernachten Sie in einem -80 ° Kühlschrank und übertragen Sie sie anschließend in einen Flüssigstickstoffbehälter zur Lagerung. Aufzeichnen Sie auch die Position der Gefrierrohre im flüssigen Stickstoffbehälter für die spätere Überprüfung und Verwendung.