Lachsembryonale Zellen; CHSE-214

Produktname:Lachsembryonale Zellen; CHSE-214

Produktkategorie: Andere Zelllinien

Wachstumsmerkmale: Wandwachstum

Kultursystem: MEM + 10% FBS, 28° oder 21° Kultur

Zellmorma: Epithelialzell

Spezifikationen: 1 x 10^6cells/T25 Kulturflasche

Artikelnummer: CS-C2905

Methoden zur Gefrieraufbewahrung von Zellen:
Gefriererhaltung Methode 1: Gefrierrohr in 4 ° C für 30 ~ 60 Minuten (-20 ° C für 30 Minuten *) -80 ° C für 16 ~ 18 Stunden (oder über Nacht) in einem flüssigen Stickstoff Tank für langfristige Lagerung in der Dampfphase.
Gefriererhaltungsmethode 2: Das Gefrierrohr wird in der programmierbaren Kühlmaschine des festgelegten Verfahrens auf 1-3 ° C bis -80 ° C pro Minute gelegt und dann in die Dampfphase des Flüssigstickstofftanks gelagert. * -20 ° C darf nicht mehr als 1 Stunde, um zu verhindern, dass Eiskristalle zu groß sind und eine große Anzahl von Zellen sterben, können Sie diesen Schritt auch überspringen, um direkt in den Kühlschrank von -80 ° C zu setzen, aber die Überlebensrate ist etwas geringer.

Epidermales Gewebe wird aus der äußeren Embryoskicht in der embryonalen Periode gebildet und hat eine Anti-Reibungs- und Anti-Verletzungswirkung. Die Technologie des Unternehmens liefert hochwertige GesamtRNA, PCR-vorbereitete cDNA-Ketten, Proteine und deren Subkomponenten aus frischem oder gefrorenem fetalen Epidermis von Ratten. Alle Produkte werden vor dem Versand strengen QA / QC-Prozessen unterzogen, um ihre Qualität zu gewährleisten. Diese Produkte können direkt für die Untersuchung von Genklonen, Expressions-Profilanalysen und verschiedenen molekularbiologischen Experimenten verwendet werden.
GesamtRNA-Vorbereitung:Die RNA wurde mit dem Trizol-Reagenz des Qiagen RNeasy Kits isoliert und anschließend mit dem Qiagen RNA Clean Kit gereinigt. Die gesamte RNA-Probe, die das Unternehmen liefert, ist mit der Gesamtkonzentration, dem Gesamtgehalt, Elektrophoresiefotos, OD-Messungen usw. verbunden.

cDNA Vorbereitung:Die reinigte GesamtRNA wird zur Synthese der cDNA-Kette mit einem 50 µl Gesamtreaktionssystem revers transkribiert, das MMLV-Revertranskriptase und Zufallsprodukte sowie 10 mg GesamtRNA enthält. Die RT-Reaktion wird nach 10 min bei 68°C beendet. Mit 1x RT-Puffer für den Transport von cDNA reicht 1 µl cDNA für eine PCR-Reaktion aus. Alle cDNA-Produkte werden vor dem Versand einer strengen QA / QC-Analyse unterzogen, um die Qualität der Produkte zu gewährleisten.

Proteinbereitung:Benutzung verbesserter RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin) Bereiten Sie eine fetale epidermale Gewebelösung für Ratten vor, entfernen Sie die Gewebefragmente zentrifugierend, bestimmen Sie die Proteinkonzentration mit dem Bio-Rad-Protein-Testkit und verdünnen Sie das Gewebeprotein mit einem nicht-reduzierenden Proteinpuffer (50 mM Tris-HCl, pH 6,8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0,002% Bromphenolblau) mit 5% Beta-Tertialethanol und PMSF, -80 Grad aufbewahren.

Mögliche Anwendungen: PCR-Klonen bekannter Gene; <2> selektives mRNA-Schnitten; <3> Genklonung und Zielsequenzierung; <4>Western and Northern Blot； <5> Proteinprüfung und Proteomik; <6> Chip-Studie und Ausdruck-Diagramme.

Zellbehandlung:

1) Erholungszellen: Einfrierrohr mit 1 ml Zellsuspension schnell in ein 37 ° C-Wasserbad (die Oberfläche ist unterhalb des Gefrierrohrdeckels) schütteln, auftauen und in ein 15 ml Zentrifugerrohr mit 4 ml Medium, das zuvor vorbereitet ist, gleichmäßig mischen. Zentrifugieren Sie bei 1000 RPM für 4 Minuten, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach Zugabe von 1 ml Medium. Alle Zellsuspensionen werden dann über Nacht in eine Kulturflasche mit 5 ml Medium kultiviert. Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.
2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.
Für suspendierte Zellen kann die Übertragung auf die folgenden Methoden verweisen:
Methode 1: Sammeln Sie die Zellen, 1000 RPM, Zentrifugieren Sie 5 Minuten unter normalen Temperaturbedingungen, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, fügen Sie 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzu und blasen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.
Methode 2: Sie können die Hälfte des Austauschs wählen, nach dem Entfernen der Hälfte des Mediums, suspendieren Sie die verbleibenden Zellen und teilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 3 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.
3) Zellfrieren: Wenn der Zellwachstumszustand gut ist, kann die Zellfrierung durchgeführt werden. Wenn die suspendierte Zelle eingefroren wird, sollten die Zellen gesammelt werden, 1000 RPM, Zentrifugierung unter normalen Temperaturbedingungen für 5 Minuten, eine kleine Menge der Oberflüssigkeit aufbewahren (verhindern Sie, dass die Zellen absaugen), fügen Sie ein Teil des frischen Mediums hinzu, blasen Sie gleichmäßig, fügen Sie es in das Gefrierrohr hinzu und schütteln Sie 10% DMSO in das Gefrierrohr, um es einzufrieren. Gefriermedium
Bei der Einfrierung von Zellen muss das empfohlene Gefriermedium verwendet werden. Das Gefriermedium sollte Gefrierschutzmittel wie DMSO oder Glycerin enthalten. Außerdem können speziell entwickelte * Gefriermedien verwendet werden.
1) Zellfriermedium ist ein einsatzbereites * Gefriermedium für Säugetierzellen, dessen Verhältnis von fetalem Rinderserum und Rinderserum optimiert ist, um die Zellvinalität und die Zellresultationswirkung nach dem Auffrieren zu verbessern.
2) Gefriermedium ist ein chemisch bestimmtes, proteinfreies, steriles Gefriermedium mit 10% DMSO, das für die Gefrierung mehrerer Stammzellen und Protozellen (außer Melanozellen) geeignet ist.
Betriebsprozess:
1.1 Hauptreagenzien und Instrumente: Inverted-Phase-Differenzmikroskop (Japan Olympus IMT-413), CO2-Inkubator (Japan Yamato IT-61).
1.2 Hek-293-Zellen in Erholungskultur und Gefrieren:
1.2.1 Erholung der Zellkultur Entfernen Sie das Gefrierrohr aus dem flüssigen Stickstoffbehälter, setzen Sie es sofort in ein 37 ° C-Wasserbad und schütteln Sie es ständig, um es schnell zu schmelzen. Entfernen Sie das gelöste Zellfrierrohr, öffnen Sie es nach der Desinfektion mit Alkohol, saugen Sie die gelöste Zellfrierflüssigkeit aus, fügen Sie die vorgefüllte Kulturflüssigkeit (37 ° C vorerhitzt, 8 bis 10 Mal das Volumen) in das Zentrifugerrohr hinzu, mischen Sie es leicht, dann 1.000 U/min 5 min, entfernen Sie das Oberwasser, fügen Sie eine angemessene Menge an Kulturflüssigkeit hinzu, blasen Sie es zu einer Zellsuspension, impfen Sie es in einer 25cm2-Kulturflasche mit einer Dichte von 1 x 105/ml und kultivieren Sie es bei 37 ° C, 5% CO2 und gesättigter Feuchtigkeit.
1.2.2 Zelltransmission Die ursprüngliche Kultur Hek-293 Zellen 48h Wechsel 1 Mal, die Zellen zu 60% ~ 70% Fusion, mit 0,25% verdauen 1 ~ 2 min, die Kulturflasche dann mit der Handfläche sanft schlagen, um die Zellen zu entwandern, zu suspendieren, zu streuen, um die Zellen weiter zu verteilen, können Sie ein paar Male sanft blasen, um eine Zellsuspension zu erhalten, und fügen Sie dann eine Vielfachmenge des Mediums hinzu, mischen Sie sanft, teilen Sie die Mischung in der Sucht, um die Zellen zu vergrößern.
1.3 Beobachtung der Zellmormologie Beobachten und dokumentieren Sie das Wachstum und die morphologischen Merkmale der Zellen unter einem umgekehrten Mikroskop.
1.4 Zellzahl Verdauen Sie die Zellen regelmäßig, bis die Zellen abgerundet, abgewandt und aufgeschwimmt werden, fügen Sie eine kleine Menge an Mediumszentrifuge hinzu und verwenden Sie PBS, um eine Zellsuspension zu bilden. Fügen Sie eine Spurenmenge Zellsuspension auf der Seite der Zellzählplatte Abdeckschiene hinzu, beobachten Sie die Anzahl der Zellen der Zellzählplatte mit einem 10-fachen Objektiv und berechnen Sie die Anzahl der Zellen nach der Formel. Zellzahl / ml Prim = (Summe der Quadratzellenzahl / 4) × 104.
1,5 Zellen-Adhesion-Rate Zellen in der exponentiellen Wachstumsperiode, 0,25% verdauen in eine einzelne Zellsuspension, nach der Zählung in 12 25cm2-Kulturflaschen impfen, alle zwei Stunden zufällig 3 Zellflaschen entfernen, das Kulturmedium und die nicht-Adhesion-Zellen entfernen, die Verdauung der Pandigestase hinzufügen, die Zellen zählen, die geklebt sind, nehmen Sie ihren Durchschnittswert nach der Formel: Adhesion-Rate (%) = (Anzahl der geklebten Zellen / Anzahl der impften Zellen) × 100%, berechnen Sie die Adhesion-Rate.
1.6 Wachstumskurve Nehmen Sie die Zellen der exponentiellen Wachstumsperiode mit der Verdauung zu einer Einzelzell-Suspension, die in 24-Loch-Platten mit 1 ml Medium pro Loch in 1 x 104 / Loch eingeimpft wird. Nehmen Sie 3 Löcher pro Tag zufällig, zählen Sie die Anzahl der Zellen pro Löcher und berechnen Sie den Durchschnittswert. Kontinuierliche Zählung von 10d und Zeichnung der Zellwachstumskurve.

Hier sind die entsprechenden Produkte:

EstradiolBenzoate Benzoestradiol Muhlkopf Antikörper Testbox

Acifluorfene Trifluorcarboxylether Muhlkopf Antikörper Testbox

D-Ribose D-Ribose-1,2,3-Tri[(S,S)-9,12-Octadienyl]Glycerin

Oleanolic acid 17β-Hydroxy-4-androgen-3--17-ester
Fetale Epidermalgewebe-Extrakt von RattenHuman Lipase A2 Elisa Testbox ≥4190% wie bestimmt durch SDS-PAGE 2,5-二对苯二

Human Glucose Mutation Elisa Test Kit ≥4191% wie durch SDS-PAGE bestimmt 4-Chlor-6-yl-5-fluoropyrimin

≥4192% wie bestimmt durch SDS-PAGE L-(+)-Tonsillester

Humanisierte Adenosin-Aktivierungsproteinkinase Elisa-Test-Kit ≥4194% wie bestimmt durch SDS-PAGE N,N'-(4,4'-Sub-diphenyl)bimalayimid

Humanisierte extrazelluläre signalregulierende Kinase Elisa Testbox ≥4195% wie bestimmt durch SDS-PAGE Nachbarn Trifluorbenzen

Humanisierter Nuklearfaktor κB-Inhibitor Protein α Elisa Testbox ≥4196% wie bestimmt durch SDS-PAGE

Humanisierte Proteinkinase C elisa Testkasten ≥ 4197% wie durch SDS-PAGE 2,4,5-Trimethylthiazol bestimmt

Human Fructose Kinase Elisa Testbox ≥4198% wie bestimmt durch SDS-PAGE 6-Hydroxy-2-Naphthalsulfonat

Humane Glycerinmutase 2 ELISA Testkasten ≥ 4199% wie bestimmt durch SDS-PAGE 4-Fluor-3-benzaldehyd

Human Lymphocyte Kin Elisa Testbox ≥4200% wie bestimmt durch SDS-PAGE 2,3-Dipyridin

Human Lymphocyte Chemotherapy Factor Elisa Testbox ≥4201% wie bestimmt durch SDS-PAGE Base 3-Ester

Human Lymphocyte Antigen 6 Komplex Genoma A Elisa Testbox ≥4202% wie bestimmt durch SDS-PAGE L-Valorin Salz

Humanes Lymphozytenfunktionsverwandtes Antigen 3 Elisa Testbox ≥4203% wie durch SDS-PAGE 3,4,5-Trifluorbenzonitril bestimmt

Human Lymphocyte-Funktion-Relevant Antigen 2 Elisa Testbox ≥4204% wie bestimmt durch SDS-PAGE 4-Phenylbor

Versuchsbericht:
Trennung und Kultivierung:
Entfernen Sie unter sterilen Bedingungen das atriale Gewebe von Ratten im Alter von 1-3d SD und waschen Sie diesen Gewebeblock zweimal mit PBS, danach wird es etwa 1mm3 groß sein;
2, fügen Sie 4 ml Enzym-Verdauungslösung (0,1% 0,1% Kollagen Typ I) in den Gewebeblöcken hinzu, mischen Sie 10s, verdauen Sie 10 min unter 37 ° C, dann schlagen Sie eine Einzelzellsuspension mit einem Tropfenrohr, fänden Sie natürlich aus und sammeln Sie das Oberwasser, verwenden Sie ein 10% FBS-Medium, um die Verdauung zu beenden und nach 4 ° C zu platzieren;
3, das restliche Gewebe 3 bis 4 ml enzymatische Verdauungslösung hinzufügen, 10s zu mischen, 37 ° C zu verdauen 10 min nach der oben genannten Methode sammeln und 4 ° C nach der Verdauung zu beenden, wiederholen Sie diesen Schritt 2-3 Mal, bis das Gewebe * verdauen wird;
4, mit 200 Mesh Edelstahl Sieb Filter Zell Verdauungsflüssigkeit, 1200r / min Zentrifuge 10min, entfernen Sie die obere Reinigung, sedimentierte Zellen mit einem 10% FBS DMEM / F12-Medium gemischt, in einer 25cm2-Kulturflasche impft, in 37 ° C, 5% CO2-Kultivkammer platziert;
5, nach 1 Stunde der Differenz-Klebung, saugen Sie das Medium aus und impfen Sie in einer 6-Loch-Platte nach den experimentellen Bedürfnissen, um die Kultur fortzusetzen;
Immunfluorescenzprüfung:
1, warten Sie auf das Wachstum der atrialen Muskelzellen auf 80% Fusion, entfernen Sie das Medium, spülen Sie die Zellen zweimal mit PBS, je 10 Minuten, und fixieren Sie die Zellen mit 4% Polyformaldehyde bei Raumtemperatur für 15 Minuten;
Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 min, und dann mit 0,1% Triton X-100-Membran für 15 min unter 4 ° C-Bedingungen;
Spülen Sie die Zellen mit PBS zweimal, jeweils 10 Minuten, und schließen Sie die Zellen mit 4% BSA für 30 Minuten bei Raumtemperatur;
Verdünnen Sie alpha-Actin im Verhältnis von 1: 100 und legen Sie es dann über Nacht in einem 4 ° C Kühlschrank, um die Zellen zu inkubieren;
5, PBS spülen Sie die Zellen dreimal, jeweils 10 min, verdünnen Sie die Anti-α-Aktin-Resistenz im Verhältnis von 1: 150, 1 h unter 37 ° C;
Spülen Sie 3 Mal mit PBS, jeweils 10 Minuten, dann beobachten Sie das Bild unter dem umgekehrten Fluoreszenzmikroskop und fotografieren Sie es.