RiboNAT™ Schnelle sterile Testkits

RiboNAT ™ Schnelle sterile Testkits

Bei der Sicherheitsprüfung von Injektionsmitteln muss die sterile Testmethode nach der multinationalen Pharmakophie mindestens 14 Tage kultiviert werden. Einige Zelltherapien müssen jedoch innerhalb weniger Tage nach der Geburt an den Patienten infudiert werden, was es schwierig macht, sterile Tests vor der Verabreichung abzuschließen, was zu einer wachsenden Nachfrage nach sterilen Testmethoden führt, die schneller Ergebnisse liefern, um die Patientensicherheit zu verbessern.

RiboNAT ™ Es handelt sich um ein schnelles steriles Testkit mit Nukleinsäure-Amplifikationsprüfung (NAT), das den Test in nur sieben Stunden durchführen kann und die Testzeit im Vergleich zu herkömmlichen Methoden erheblich verkürzt. Im Gegensatz zu herkömmlichen NAT-Tests, die sich nur auf die genomische DNA von Mikroben richten, RiboNAT ™ Es wird Ribososomal RNA (rRNA) untersucht. Da der Anteil an rRNA im Mikroorganisme höher ist, macht dies die Detektion empfindlicher. Gleichzeitig sind herkömmliche Methoden anfällig für falsche Positivitäten durch tote bakterielle Rückstände von DNA oder verunreinigte DNA in Umwelt und Materialien, während RiboNAT ™ Das Problem wurde effektiv reduziert und die Genauigkeit der Prüfung verbessert.

◆ Eigenschaften

Ergebnisse am Tag der Prüfung (ca. 7 Stunden)

Testen mit rRNA-Echtzeit-Reverse Transcription PCR (RT-rt PCR) mit einer höheren Empfindlichkeit (9 CFU/ml) als gDNA-Tests

Verringerung der falschen Positivitäten durch tote Bakterien und restliche DNA

Mehrere Bakterien (sauerstoffbedürftige und anaerobe) und Pilze auf einmal erkennen

• Experimentelle Prozesse

◆ Spezifikationen des Testkits

◆ Zusammensetzung des Kits

• Empfindlichkeitsprüfung

Abbildung 1. Erkennungsempfindlichkeit

Für die sechs in der Pharmakoteke vorgeschriebenen Mikroorganismen wurde eine mikrobielle Suspension mit einer Konzentration von 9 CFU/ml hergestellt. Benutzung von RiboNAT ™ Extrahieren Sie die RNA aus diesen Suspensionen und prüfen Sie die Ribososomal-RNA (rRNA). Die rRNA aller Mikroorganismen wurde erfolgreich nachgewiesen, wobei die Ct-Werte unter 35 liegen.

Abbildung 2. Detektionsempfindlichkeit in Zellsuspensionsproben

Für sechs Mikroorganismen, die in der Pharmakokie vorgeschrieben wurden, wurde eine mikrobielle Suspension mit einer Konzentration von 9 CFU / ml und 0,25 x 10⁶ Zellen / ml HEK293 Zellen gemischt. Benutzung von RiboNAT ™ Extrahieren Sie die RNA aus der gemischten Suspension und prüfen Sie die rRNA. Die rRNA aller Mikroorganismen wurde erfolgreich nachgewiesen, wobei die Ct-Werte unter 35 liegen.

Darüber hinaus wurden alle 6 Stämme unter folgenden Bedingungen nachgewiesen (Daten nicht angezeigt):

• Interplasmige Stammzellen (MSC): 0,5 x 10⁶Zellen/ml

T-Zelle: 1,0 x 10⁶Zellen/ml

• Höhere Empfindlichkeit

Bakterienkonzentration: 2 CFU/ml

Inkubationszeit: 3-15 h

Abbildung 3. Höhere Empfindlichkeit

Für Aspergillus brasiliensis, Clostridium sporogenes und Cutibacterium acnes wurden Konzentrationen von2 CFUMikrobiologische Suspension. Obwohl RiboNAT ™ Die Inkubationszeit ist im üblichen Betriebsprozess von 3 Stunden vorgeschrieben, aber das Experiment verzögerte die Inkubationszeit auf 3-15 Stunden. Nach Inkubation RiboNAT verwenden ™ Extrahieren Sie die RNA und testen Sie die rRNA. Die Ergebnisse zeigten, dass drei Stämme, darunter streng anaerobe Bakterien (Bacillus sporae) und langsam wachsende Bakterien (Acne propionata), nach 14 Stunden oder länger Inkubation erfolgreich nachgewiesen wurden und Ct-Werte unter 35 lagen.

• Verringerung der falschen Positiven

RiboNAT ™ Enthält tote bakterielle DNA-Inaktivierungsmittel und DNase-Behandlungsschritte, die das Risiko von falsch positiven DNA-Resten in der Probe effektiv verringern.

Abbildung 4. Verringerung der falschen Positiven

Verwenden Sie kommerziell sterile PBS als Testprobe für den Bakterienukleinsäure-Test (NAT). Eine Reihe von Experimenten (Abbildung oben) extrahiert DNA mit einem kommerziellen Kit und führt anschließend eine quantitative PCR-Detektion durch, die auf Bakterien ausgerichtet ist. Eine weitere Reihe von Experimenten (Abbildung unten) mit RiboNAT ™ Die RNA wird extrahiert und anschließend durch Echtzeit-reverse fluorescent quantitative PCR getestet. Sechs Amplifikationskurven wurden in einer DNA-basierten Methode beobachtet, während RiboNAT verwendet wurde ™ Kein Verstärkungssignal erkannt.

◆ Produktliste