Schweine Cyclovirus Typ 1 Farbstoff Methode Fluoreszenz Quantitative PCR-Kit

SchweinekreisvirusTyp 1 Farbstoff Methode Fluoreszenz Quantitative PCR Kit
Schweinezirkovirus 1 (PCV-1)

Produkte und Merkmale:
Schweine Cyclovirus Typ 1 Farbstoff Methode Fluoreszenz Quantitative PCR-KitFolgende Eigenschaften:

1. Wenn Sie es öffnen, müssen Sie nur eine Virusprobe bereitstellen.

2. Ein einzigartiger Vorläufer, der nach der konservierten Sequenz des Schweine-Cyclovirus-Typ-1-Farbstoffes entworfen wurde und keine Kreuzreaktion mit dem zugehörigen Virus aufweist.

Empfindlichkeit kann mehrere hundert Kopien / Reaktionen erreichen.

4. Ein-Rohr-fluoreszierende quantitative PCR-Detektion, um eine nachfolgende Verschmutzung zu vermeiden.

5. Diese Kit ist ausreichend für 50 fluoreszierende quantitative PCR mit 20 μL Reaktionssystem.

Dieses Produkt ist nur für die wissenschaftliche Forschung geeignet und kann nicht für die klinische Diagnose verwendet werden.

Transport und Lagerung： Tieftemperaturtransport,-20 ° C aufbewahren, gültig für ein Jahr。

Eigenes Reagenz： DNA-Schablone, 10 x ROX (abhängig vom Modell, siehe Verwendung).

Gebrauchsanweisung Einer,VerdünnungPCR-positive Kontrolle(mit10E2-10E7 Kopien / μL diese 6 10-fache Verdünnung als Beispiel)

1. Hinweis: Da die Standardkonzentration sehr hoch ist, müssen die folgenden Verdünnungsvorgänge in einem separaten Bereich durchgeführt werden und die Probe oder andere Bestandteile dieses Kits nicht verschmutzt werden). Um die Produktstabilität zu erhöhen und die Verbreitung von Infektionserregern zu vermeiden, bietet dieses Produkt keine lebenden Proben als positive Kontrolle, sondern nur DNA-Fragmente, die direkt als positive Kontrolle verwendet werden können.

2. Markieren Sie 6 Zentrifugerrohre mit 7, 6, 5, 4, 3 und 2.

3. Fügen Sie jeweils 45 μL fluoreszierende PCR-spezielle Schablonenverdünnung mit einem Kernpistol-Kopf hinzu (vorzugsweise mit einem Kernpistol-Kopf, gleich unten).

4. Fügen Sie 5 μL 1 x 10E8-Kopie/μL positiver Kontrolle in Röhre 7 hinzu und schütteln Sie 1 Minute vollständig, um eine positive Kontrolle von 1 x 10E7-Kopie/μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

5. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie 5 μL 1 x 10E7-Kopie/μL positiver Kontrolle (von der vorherigen Verdünnung) in die Röhre 6 und schütteln Sie für 1 Minute vollständig, um eine positive Kontrolle von 1 x 10E6-Kopie/μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

6. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie 5 μL 1 x 10E6-Kopie/μL positiver Kontrolle in Röhre 5 hinzu und schütteln Sie 1 Minute lang, um eine positive Kontrolle von 1 x 10E5-Kopie/μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

Wiederholen Sie den obigen Vorgang, bis Sie eine positive Kontrolle von sechs Verdünnungsgraden erhalten haben. Auf Eis setzen.

2. ProbenVorbereitung der DNA：

8. Wenn es N Proben gibt, müssen N + 2 Extraktionen eingestellt werden, von denen eine PC ist (Probe zur positiven Kontrolle vorbereitet),

Einer ist.NC (Probenvorbereitung mit negativer Kontrolle). Die PCR-positive Kontrolle Nr. 4 (Konzentration 1 x 10E4 Kopien/μL, 10 μL entspricht 10.000 Kopien) oder Nr. 5 (Konzentration 1 x 10E5 Kopien/μL, 10 μL entspricht 100.000 Kopien) mit einer bestimmten Menge Wasser kann als PC verwendet werden, um das Gesamtvolumen zu erreichen, das für jede Präparation erforderlich ist. Außerdem wird Wasser als NC verwendet. Wenn für jede Präparation 200 μL Proben erforderlich sind, müssen auch die PC- und NC-Volumen 200 μL betragen.

9. Reinigung der Probe nach eigener WahlDNA， Dieses Kit ist kompatibel mit den meisten auf dem Markt verfügbaren VirusDNA-Abholkits. Es ist auch möglich, den One-Tube-Virus DNAout oder die Upgrade-Version des Column-Virus DNAout des Unternehmens zu kaufen. Dieser Test-Kit gibt 15-mal kostenlos ein-Rohr-Virus-DNAout。

3. EinrichtenqPCR-Reaktion (20 μL-System, im Probenvorbereitungsraum durchgeführt):

10. Wenn nur1 Wiederholung markiert N+9 PCR-Röhrchen, von denen N+2 für die zuvor erhaltenen N+2 verwendet wurden.

Proben,1 für die PCR-negative Kontrolle und 6 für die PCR-positive Kontrolle. Wenn Sie 2-3 Wiederholungen durchführen, erhöht sich die Anzahl der Reaktionseinstellungen entsprechend um das 2- oder 3-fache.

11. Drücken Sie die folgenden Tabellen, um die Zutaten in die Markierungsröhre hinzuzufügen (in dieser Tabelle ist nur eine Wiederholung aufgeführt. Die positive Kontrolle wird erst eingestellt, nachdem die Probe und die negative Kontrolle eingestellt sind, und die positive Kontrolle wird erst eingefügt, bis alle Proben auf dem Deckel gelagert sind):

AnmerkungenNur die ABI7500, 7700 und 7900 Instrumente benötigen ROX als Kontroll, andere fluoreszierende PCR-Instrumente (z.B. iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 und LightCycler480) brauchen keine ROX, ersetzen Sie sie durch Wasser.

12. Nachdem Sie den Deckel abgedeckt haben, fahren Sie nach den folgenden Parametern durch PCR (die spezifischen PCR-Parameter können je nach Instrument selbst optimiert werden).

13. Datenerhebung

Die spezifischen Vorgänge werden nach dem von den verwendeten Instrumenten empfohlenen Verfahren durchgeführt. Die in diesem Produkt enthaltenen fluoreszierenden Farbstoffe binden sich nichtDas maximale Absorptionsspektrum bei DNA liegt bei 471 nm, das maximale Absorptionsspektrum bei der Kombination von DNA bei 500 nm und das maximale Emissionsspektrum bei 530 nm. Die Signalaufnahme kann in einem multiplen oder erweiterten Schritt eingestellt werden.

4. Datenverarbeitung:

Wenn diese Kit zur quantitativen Prüfung verwendet wird, wird die Standardkurve mit dem Logwert der positiven Kontrollkonzentration als horizontale Achse und dem Ct-Wert als vertikale Achse gezeichnet. Dann wird der Ct-Wert der Probe aus der Standardkurve berechnet, um den Logwert der DNA-Konzentration der Probe zu berechnen.

Wenn diese Kit für qualitative Tests verwendet wird und nur positiv oder negativ beurteilt wird, muss die negative Kontroll Ct größer oder gleich 40 sein. Die positive Kontrolle muss ein Fluoreszenz-Logarithmus-Wachstum haben, eine typische Verstärkungskurve haben und Ct-Werte sollten kleiner oder gleich 30 sein. Die Probe wird negativ behandelt, wenn ihre Ct größer oder gleich 40 ist, und positiv, wenn sie kleiner oder gleich 35 ist. Wenn es zwischen 35 und 40 ist, wiederholen Sie es. Der Ct-Wert des wiederholten Experiments ist negativ, wenn er größer oder gleich 40 ist, und positiv, wenn er kleiner ist als 40.

Nur für wissenschaftliche Zwecke, nicht für klinische Tests und therapeutische Anwendungen.