PK-59 (menschliche Bauchspeicheldrüsenkrebszellen)

PK-59 (menschliche Bauchspeicheldrüsenkrebszellen)

Behandlung nach Zellenempfang

1) Nach dem Empfang der Zellen, 75% Alkohol desinfizierte Flasche Wand T25 Flasche auf Raumtemperatur etwa 1 h platziert, wenn die Kultur Flasche gebrochen, Flüssigkeit überlaufen und die Zellen kontaminiert, bitte kontaktieren Sie uns rechtzeitig, nachdem Sie ein Foto gemacht haben.

2) Bitte bestätigen Sie den Zellstand unter einem 4- oder 5X-Mikroskop und machen Sie gleichzeitig 2-3 Fotos der gerade empfangenen Zellen (10 x, 20 x) sowie ein Bild des Aussehens der Kulturflasche, um den Zellstand nach dem Verkauf zu ermitteln.

3) Wandzellen:Die Zellen werden 1h bei Raumtemperatur platziert, beobachten Sie unter dem Mikroskop das Wachstum der Zellen und die Situation der Klebstoffzellen, einige Klebstoffzellen werden während des Express-Transports durch Vibrationen abfallen und sich nach dem Abfallen gründen.Wenn die Wachstumsdichte der Zellen unter dem Spiegel betrachtet wird, wenn sie unter 60% liegt, können Sie das Intrusionsmedium in der Flasche entfernen (wenn keine Zellen, die an der Wand geklebt sind, zentrifugal zurückgewinnt werden müssen, in die ursprüngliche Flasche wieder suspendiert werden), die neue Formulierung von 6-8 ml vollem Medium hinzufügen und in die Zellkultur setzen, um fortzusetzen. Wenn die Zellwachstumsdichte über 70-80% beträgt, kann die Zelle übertragen werden. Während der Übertragung müssen Zellen, die aufgrund von Transportvibrationen abgefallen sind, zentrifugiert zurückgewinnt werden.

4) Zelltransport auf dem Weg der Entfernung Betriebsmethode: Entfernte Zellen sammeln und nach der Zentrifuge entfernen, mit PBS reinigen, Zentrifuge entfernen und 1 ml Enzym in der Zentrifugeröhre hinzufügen, um die Verdauung für etwa 20 Sekunden zu zerstreuen, das gesamte Medium zu spielen, um die Verdauung zu beenden, die Zentrifuge nach der Wiederverlegung, die übrigen Klebstoffzellen werden nach der normalen Klebstoffzellen-Übertragungsmethode betrieben.

5)Hinweis: Transport-Medium (Irrigation-Medium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie nach der Anleitung Zellkulturbedingungen neue Formulierung spielen Vollkulturmedium Zellen zu kultivieren. Die erste Übertragung nach Empfang der Zellen empfiehlt eine T25-Kultivflasche 1: 2-Übertragung.

Drei, feinZellkultur Operation

1) Erholung von Zellen: Die folgenden Zellkultur-Gefrierbehandlung ist nur zur Information, die spezifischen Betriebsschritte sind in der Lieferanwendung vorrangig

Ein Gefrierrohr mit 1 ml Zellsuspension wird schnell in einem 37 ° C Wasserbad geschüttelt und mit 4 ml Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren Sie 3 min bei 1000 U/min, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach 1-2 ml Medium. Dann fügen Sie alle Zellsuspension in eine Flasche mit einer moderaten Menge an Medium, um über Nacht zu kultivieren (oder fügen Sie die Zellsuspension in eine 6 cm Schale, um etwa 4 ml volles Medium zu spielen, um über Nacht zu kultivieren). Am dritten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

a) Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

b) Fügen Sie 1 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,02 TA) in die Flasche hinzu, damit die Verdauungsflüssigkeit alle Zellen durchdringt, legen Sie die Flasche in einem 37 ° C-Gehäuse, um 1-3 min zu verdauen (abhängig von der Verdauungssituation der Zelle), und beobachten Sie dann die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die meisten Zellen sich runden und ausfallen, nehmen Sie schnell wieder auf den Arbeitstisch, klicken Sie auf die Flasche und fügen Sie 2-3 ml hinzu, um das gesamte Medium zu spielen, um die Verdauung zu beenden.

c) Vorsichtig in eine sterile Zentrifugerrohr eingeladen, 1000 U/min 5 min zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen, um gut zu blasen.

d) Die Zellsuspension im Verhältnis 1:2 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium verteilen und in eine Kultivkammer setzen.

Aufmerksamkeit der Wandzellen:

Die PBS muss wieder gewaschen werden.

Die Zellen werden mehrmals beobachtet, um die Zeit zu beherrschen, nicht die Verdauung zu beenden, ohne dass die Zellen grundlegend abfallen, und dann zu blasen, so dass die Zellen leichter differenzieren und sterben.

Schlagen Sie nicht immer auf die Zellen.

3) Zellfrieren: Wenn die Zellen gut wachsen, können sie gefriert werden. Hier unten.T25 Flaschen zum Beispiel

a) Sammeln Sie Zellen und Zellkultur, laden Sie in sterile Zentrifugeröhre, Zentrifugieren Sie 4 min unter 1000 U/min, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, waschen Sie sie wieder mit PBS, entfernen Sie das PBS und führen Sie die Zellzählung durch.

b) Abhängig von der Anzahl der Zellen, die serolose Zellfrierflüssigkeit hinzufügen, so dass die Zelldichte 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 10 ^ 7 / ml, leicht vermischen, jedes Gefrierrohr 1 ml Zellsuspension einfrieren, achten Sie darauf, dass das Gefrierrohr gut gekennzeichnet ist.

c) Einfrierrohr in -80 ° C Kühlschrank und nach 24 h in flüssigen Stickstoff Bewässerung Lagerung übertragen. Aufzeichnen Sie die Position des Gefrierrohres für das nächste Mal.

IV. Aufmerksamkeit fördern

1) Probleme mit der Zelle, wiederkehren

a) verschiedene Probleme, die während des Zelltransports auftreten, Zellverlust, Flaschenbeschädigung, schwere Leckage von Kulturflüssigkeiten usw., Wiedergabe;

b) Probleme mit der Zellverkontamination, bitte geben Sie uns innerhalb von 3 Tagen nach Erhalt des Produkts echte Experimentergebnisse vor und senden Sie sie erneut nach der Überprüfung;

c) die überwiegende Mehrheit der Zellen nicht überlebt, 2 Tage nach der Stilllegung der Zellen bei normaler Temperatur und 2 Tage nach der Erholung der Zellen, die mit Trockeneis gefroren wurden (ein echtes und klares Zellstandsfoto erforderlich ist), wiederzugeben;

d) Trockeneis Gefrierlager Zellen nach 2 Tagen Erholung oder Normaltemperatur Lieferung Zellen für 2 Stunden und nicht geöffnet, Verunreinigung, Wiederausgabe;

e) Probleme mit der Zellaktivität, bitte senden Sie uns die wahren Ergebnisse innerhalb von 7 Tagen nach Erhalt des Produkts, um die Zellaktivität mit der Taipan-Blau-Chromatologie zu identifizieren, und tägliche Zellfotos, nachdem sie überprüft wurden, erneut zu senden;

f) Die Zelle am Tag des Empfangs und am 2. und 3. Tag bitte fotografieren, 3 Tage ohne Mitteilung, gilt als Produkt qualifiziert. Wenn ein Problem innerhalb von 4-7 Tagen auftritt, müssen Sie 3 Tage vor dem Empfang des Zellfotos und des Zellproblems sowie detaillierte Schritte für die zellbezogenen Handlungen zur Verfügung stellen und mit dem Techniker kommunizieren, den Techniker für unsere Verantwortung entscheidet, wiedersenden.

2) Probleme mit der Zelle, die nicht wiedergegeben werden

a) Kundenbetrieb verursacht zelluläre Verschmutzung, keine Wiedergabe;

b) ein schwerer Betriebsfehler des Kunden verursacht einen schlechten Zellzustand und wird nicht wiedergegeben;

c) Nicht empfohlene Zellkultursysteme verursachen einen schlechten Zellzustand und keine Wiedergabe;

d) schlechter Zellzustand, keine echten klaren Zellstandsfotos vor 3 Tagen der Kultur zur Verfügung gestellt, keine Wiedergabe;

e) wenn die Zellkultur durch andere Behandlungen zu Problemen bei den Zellen führt, nicht wiederauftreten;

f) Empfang der Zellen und die Erkenntnis eines Problems bei der Kommunikation mit dem Kundenservice-Personal, die sich als länger als 7 Tage nachweisen, nicht wiedersenden;

g) Je nach Umstand.

V. Hinweise

1. Alle Tierzellen werden als potenziell biologisch gefährlich angesehen und müssen in einem Biosicherheitsstand der zweiten Stufe betrieben werden, und bitte achten Sie darauf, dass alle Abfälle und Gefäße, die mit dieser Zelle in Berührung kommen, sterilisiert werden müssen, bevor sie entsorgt werden können.

Es wird empfohlen, immer Schutzhandschuhe, Kleidung und eine Schutzmaske zu tragen, wenn Sie gefrorene Zellen wiederherstellen. Hinweis: Ein Gefrierrohr, das in flüssigen Stickstoff eingetaucht ist, leckt und wird langsam mit flüssigem Stickstoff gefüllt. Wenn flüssiger Stickstoff in eine Gasphase umgewandelt wird, kann der Behälter explodieren oder seinen Deckel mit gefährlicher Kraft abblasen, wodurch fliegendes Schutt verursacht wird, das Menschen verletzt.

3. Diese Zelle dient ausschließlich der Wissenschaft. Die Anleitung ist nur zur Information und gilt als tatsächliche Anleitung!