Shanghai Forschung Elisa Kit Betriebsschritte

Schritte zur Bedienung des elisa-KitsEinführung:

Präzise Prüfung, Einblick in das Leben - Shanghai Xingyue Biotechnology Co., Ltd.

XinYu BioDetect, Ihr zuverlässiger Forschungspartner

Schritte zur Bedienung des elisa-KitsTypische Zusammensetzung:

Ein Standard-ELISA-Kit enthält in der Regel die folgenden Komponenten:

Vorverpackte Mikroporenplatte: 96 oder 48 Löcher Plastikplatte, die gut gefangen Antikörper oder Antigene (je nach Typ) im Loch verpackt sind. Das ist der Ort, an dem die Reaktion stattfindet.

2, Enzym-Marker-Antigen (oder Enzym-Marker zur Erkennung von Antikörpern / Antigenen): Je nach ELISA-Typ, bieten Sie Moringa-Peroxidase oder alkalische Phosphatase-Marker-Antigen (für die indirekte Methode oder die Klemmenmethode) oder Enzym-Marker-Antigen (für das Wettbewerbsrecht).

Standardprodukt: eine Gradientlösung der Antigen- oder Antikörper-Serie mit bekannten genauen Konzentrationen. Verwendet zur Zeichnung von Standardkurven zur Berechnung der Konzentration des zu messenden Objekts in der Probe.

Detektion von Antikörpern (nur Klemmenmethode): Unmarkierte Antikörper gegen einen anderen Epitopen des Antigens.

5, Probenverdünnungsflüssigkeit: Verwendet wird, um die Probe zu verdünnen, damit ihre Substrate mit dem Standard- und Puffersystem übereinstimmt und nicht-spezifische Störungen reduziert werden.

6, Waschpuffer: In der Regel ist es ein Phosphatpuffer mit Twain-20. Zum Waschen von nicht gebundenen Stoffen zwischen den Schritten, um Hintergrundstörungen zu reduzieren. Waschen ist der Schlüssel zum Erfolg des Experiments.

7, geschlossene Flüssigkeit: häufig verwendet Rinderserum Protein oder Entfettete Milchpulverlösung. Verwendet an nicht gebundenen Stellen auf der Mikroporplatte, nachdem die Packung geschlossen wurde, um unspezifische Adsorption in den nachfolgenden Schritten zu verhindern und den Hintergrund zu reduzieren.

8. Grundlösung:

Für HRP: häufig verwendet Tetramethylbiphenamin oder 3,3 ', 5,5 '-Tetramethylbiphenamin.

Für AP: häufig verwendet für Nitrobenzelphosphate.

9. Endflüssigkeit:

Für HRP-TMB: häufig verwendete verdünnte Schwefelsäure-Lösung.

Für AP-pNPP: häufig verwendete* Lösung. Verwendet zur Beendigung der enzymatischen Reaktion und zur Stabilisierung der Endfarbe.

10, Plattendichtung: Abdecken Sie die Mikroporplatte im Inkubationsschritt, um Verdunstung und Verschmutzung zu verhindern.

Anleitung: Detaillierte Betriebsschritte, Lagerbedingungen, Vorsichtsmaßnahmen, erwartete Ergebnisse und Standardkurvenzeichnungsmethoden usw.

Probenbehandlung und Anforderungen:

1. Serum: Die Vollblutprobe, die in einem Serumscheiderrohr gesammelt wird, wird über Nacht bei Raumtemperatur für 2 Stunden oder 4 ° C platziert und dann 1000 x g für 20 Minuten zentrifugiert, um die Reinigung zu entnehmen oder die Oberfläche bei -20 ° C oder -80 ° C aufbewahrt, aber wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

2. Plasma: Entnehmen Sie die Probe mit EDTA oder Hepatin als Antikoagulant und zentrifugieren Sie die Probe für 15 Minuten bei 2-8 ° C bei 1000 x g innerhalb von 30 Minuten nach der Entnahme, um die Reinigung zu erkennen oder die Reinigung bei -20 ° C oder -80 ° C zu bewahren, aber wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

3. Gewebehomologation: Spülen Sie das Gewebe mit vorgekühltem PBS (0,01 M, pH = 7,4), entfernen Sie das restliche Blut (die rotten Blutkörperchen, die in der Homologation aufgelöst sind, beeinflussen das Messergebnis), wiegen Sie das Gewebe und schneiden Sie es. Zerkleinertes Gewebe mit dem entsprechenden Volumen von PBS (in der Regel im Gewichtsvolumenverhältnis von 1: 9, zum Beispiel 1 g Gewebeprobe entspricht 9 ml PBS, das spezifische Volumen kann entsprechend den Anforderungen des Experiments angepasst und aufgezeichnet werden. Es wird empfohlen, einen Protease-Inhibitor in PBS hinzuzufügen) in einen Glas-Homogenator hinzuzufügen und vollständig auf Eis zu schleifen. Um die Gewebezellen weiter zu spalten, können homogene Slurms mit Ultraschall gebrochen oder wiederholt gefriert werden. Schließlich wird die Lösung in 5000 x g zentrifugiert für 5 bis 10 Minuten, um die klare Detektion zu entnehmen.

4. Zellkultur Klarheit: Bitte 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, um die Klarheit zu entnehmen und zu erkennen, oder die Klarheit bei -20 ° C oder -80 ° C aufbewahren, aber wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

5. Andere biologische Proben: 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, entnehmen Sie klar zu erkennen.

6. Aussehen der Probe: Die Probe sollte klar und transparent sein, und die Suspension sollte zentrifugiert entfernt werden.

7. Probenhaltung: Wenn die Probe innerhalb einer Woche nach der Erhebung getestet wird, kann sie bei 4 ° C aufbewahrt werden, wenn es nicht rechtzeitig detektiert werden kann, bitte nach einer Anwendungsmenge verteilen, bei -20 ° C (innerhalb von 1 Monat detektiert) oder -80 ° C (innerhalb von 6 Monaten detektiert) gefrieren, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden, wird die Blutlose der Probe das endgültige Testergebnis beeinflussen, daher ist die Blutlose der Probe nicht geeignet, diesen Test durchzuführen.

Ergonomische ELISA-Kits:

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