Neuro2a (N2a) Gehirnneuromzellen von Mäusen

Zellen präsentieren

KlonenNeuro-2AEs ist durchvon R.J.KlebeundF.H. RuddlenachANative Tumoren von weißen Ratten aufgebaut. Die Zelle produziert eine große Menge an Mikrotubulin, das in den Nervenzellen als Kontraktionssystem in Reaktion auf den Fluss von Plasma fungiert.

Zellen Eigenschaften

1）Quelle:Hirnneuroblastoma

2）Form：Amiba-ähnliche Stammzellen

3）Inhalt:>1x10⁶ Anzahl der Zellen

4）Spezifikationen:T25Flascheoder1 mlGefrierrohrverpackung

5) Verwendung:Nur für wissenschaftliche Zwecke.

Transport und Lagerung:TrockeneisTransportund die Erholung zu überleben.Zellen：（1）1 mlGefrierrohr Verpackung Trockeneis Transport, nach Erhalt-80Grad Kühlschrank aufbewahren nach Übernachtung in flüssigen Stickstoff oder direkt Erholung,Wenn Trockeneis sauber ist,Flaschendeckel gefriert,Zerstörung und Verunreinigung der Zellen, bitte kontaktieren Sie uns sofortKontakt。（2）T25Überleben der FlascheZellenNormale Lieferung,EmpfangenFolgen Sie der Behandlung nach dem Empfang der Zelle.

Nach Empfang der ZellenBehandlung:

1Nach Erhalt der Zellen,75%Die Flaschenwand wird mit Alkohol desinfiziertT25Flasche in37℃ Aufbewahrungskammer ca.2-3hWenn die Kulturflasche gebrochen ist, Flüssigkeitsüberschlüsse und Zellen kontaminiert sind, kontaktieren Sie uns bitte unverzüglich, nachdem Sie ein Foto gemacht haben.

2Bitte hier4oder5XBestätigen Sie den Zellstand unter dem Mikroskop und fotografieren Sie die gerade empfangenen Zellen (10×，20x) jedes2-3Eine Aufbewahrung sowie ein Bild des Aussehens der Kulturflasche als Grundlage für den Zellstand beim Erhalt nach dem Verkauf.

3）Zellen: Zellen in37℃ in der Kühlkammer platziert2-3hBeobachten Sie das Wachstum der Zellen unter dem Mikroskop und die Klebstoffsituationen, einige Klebstoffzellen fallen während des Express-Transports aufgrund der Vibration ab und gründen sich nach dem Abfall. Wenn man die Wachstumsdichte der Zellen unter dem Spiegel beobachtet,60%Anschließend können Sie das Infusionsmedium aus der Flasche entfernen (wenn nicht geklebte Zellen zentrifugiert werden müssen, werden sie wieder in die ursprüngliche Flasche aufgegeben).,Neue Formulierungen für spezielle Medien hinzufügen6-8 mlIn die Zellkultur setzen, um fortzusetzen. Wenn die Zellen wachsen70%-80%Darüber hinaus können Zellen verarbeitet werden. Während der Übertragung müssen Zellen, die aufgrund von Transportvibrationen abgefallen sind, zentrifugiert zurückgewinnt werden.

4）Hinweis: Das Transportmedium (Irrigationsmedium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie es durch ein spezielles Medium, das nach den Bedingungen der Anleitung für die Zellkultur neu formuliert wurde, um Zellen zu kultivieren. Erste Empfehlung nach Empfang der ZellenT25Pflanzenflaschen1：2Übertragung

Einer.KulturmediumundAusbildungEinfrierenVorbereitung:

1）vorbereitenMEMKulturmedium;hochwertigKuhserum,10%；Doppelkampf,1%。

2）AufbaubedingungenGas: Luft,95%Kohlendioxid,5%Temperatur:37℃，Die Feuchtigkeit des Aufbaukammers ist70%-80%。

3）Gefrierflüssigkeit：90%Serum，10% DMSO，Aktuell verfügbarJetztKompatibel。

Zweitens:ZellenBearbeitung：

1）Erholung der gefrorenen Zellen：：

wird enthalten1 mlGefrierrohr der Zellsuspension in37℃ Wasserbad schnell schütteln auftauen, fügen Sie zu enthalten4-6mL speziellDas Medium wird in einem Zentrifugerrohr gleichmäßig vermischt. in1000 RPMZentrifuge unter Bedingungen3-5 MinutenEntfernen Sie die Oberflüssigkeit und das spezielle Medium suspendiert die Zellen wieder. Anschließend fügen Sie die Zellsuspension6-8ml speziellMedium in Flaschen (oder Schalen)37℃ über Nacht kultivieren. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2）Zellen übertragen:wennZellenDichte bis80%-90%，Das heißtDurchführbarErziehung。

Für die klebende Zelltransmission kann man sich auf die folgenden Methoden beziehen:

1. Lass los!Kultiviert ohne KalziumMagnesium-IonenderPBSZellen waschen1-2Mal。

2. beitreten0.25％（w / v(Panproteinase)-0,53 mM EDTAaufIn der Kulturflasche（T25Flasche1-2 ml，T75Flasche2-3 ml），Platziert in37℃AusbildungskastenMittelverdauung1-2Minute(Schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit ausreichend verlängern)Aber...Später unter dem Mikroskop beobachtet.ZellverdungSituation,WennDie Zellen werden weitgehend rundetUnd fallen.Schnell zurück zum Tisch, tippen.Ein paar Minuten.Nach dem Aufbau der Flaschebeitreten3-4 mlenthält10%FBSDas KultivmediumBeendenVerdauung。

3.Vorsichtig schlagen und aussaugenIn1000 RPMArtikelZentrifugieren3-5 MinutenEntfernen Sie die Flüssigkeit und fügen Sie hinzu.1-2 mlNach der Kultivierung gut blasen.Drücken Sie die Zellsuspension1：2Anteil an den neuenT25In der Flasche, hinzugefügt6-8 mlNeue spezielle Medien, die gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert werden, um das Wachstum der Zellen lebendig zu halten, und die nachfolgende Generation basiert auf den tatsächlichen Umständen1:2~1:5Verhältnis durchgeführt。

3Zellfrieren:Empfang der Zellen vor der Kultivierung empfohlen3Eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente eingefroren. Hier unten.T25Flaschen zum Beispiel;

1. Zellenbeim EinfrierennachDer Prozess der Zelltransmission sammelt verdaute Zellen in eine Zentrifuge, die mit einer Blutzählplatte gezählt werden kann, um die Gefrierdichte der Zellen zu bestimmen. Die empfohlene Gefrierdichte der Zellen ist1×10⁶~1×10⁷Eine lebende Zelle.im/ml.

2. 1000 Umdrehungen pro MinuteZentrifugieren3-5 MinutenEntfernen Sie die Oberfläche. Die Zellen mit der vorbereiteten Zellfrierflüssigkeit wieder suspendieren, drücken Sie jede1 mlGefrierflüssigkeit enthält1×10⁶~1×10⁷Eine lebende Zelle.im mlZuordnung zu einem Gefrierrohr Zuordnung der Zellen zu einem Gefrierrohr mit Namen, Algebra, Datum und anderen Informationen.

3. Stellen Sie die Zellen, die eingefroren werden sollen, in die Kühlbox des Programms,-80Übernachten Sie im Kühlschrank und speichern Sie es anschließend in einen flüssigen Stickstoffbehälter. Aufzeichnen Sie auch die Position der Gefrierrohre im flüssigen Stickstoffbehälter für die spätere Überprüfung und Verwendung.

Hinweis:

1. Alle tierischen Zellen werden als potenziell biologisch gefährlich angesehen und müssen in einem Biosicherheitsstand der zweiten Stufe betrieben werden. Bitte achten Sie darauf, dass alle Abfälle und Gefäße, die mit dieser Zelle in Berührung gekommen sind, sterilisiert werden müssen, bevor sie entsorgt werden können.

2. Es wird empfohlen, bei der Erholung gefrorener Zellen immer Schutzhandschuhe, Kleidung und Schutzmasken zu tragen. Hinweis: Ein Gefrierrohr, das in flüssigen Stickstoff eingetaucht ist, leckt und wird langsam mit flüssigem Stickstoff gefüllt. Wenn flüssiger Stickstoff in eine Gasphase umgewandelt wird, kann der Behälter explodieren oder seinen Deckel mit gefährlicher Kraft abblasen, wodurch fliegendes Schutt verursacht wird, das Menschen verletzt.