JC-1 Mitochondriale Membran Potential Testkit

Produktbeschreibung

JC-1Mitochondriale Membran Potential Detection Kit（JC-1 Mitochondriale Membran Potential Assay Kit(ist eine Art vonJC-1Kits für fluoreszierende Sonden zur schnellen und empfindlichen Erkennung von Potenzialänderungen in Zellen, Geweben oder reinigen mitochondrialen Membranen. Der Rückgang des mitochondrialen Membranpotenzials ist ein markantes Ereignis in der frühen Phase der Apoptose. Diese Kit kann daher für die frühzeitige Detektion der Apoptose verwendet werden.

JC-1ist eine weit verbreitete Methode zur Erkennung von Mitochondrialmembranpotenzialen△PsmDie ideale Fluoreszenzsonde.JC-1Farbstoffe, die sich in den Mitochondrien auf eine potentialabhängige Weise ansammeln, können verwendet werden, um das Potenzial einer Zelle, eines Gewebes oder einer gereinigten mitochondrialen Membran zu erkennen. im normalen Mitochondrium,JC-1Aggregiert sich in der Mitochondrienmatrix zu Polymeren, die eine starke rote Fluoreszenz emittieren (Ex = 585 nm, Em = 590 nm）； ungesunde Mitochondrien aufgrund eines Abfalls oder Verlustes des Membranpotenzials,JC-1Es kann nur in Form eines Monomers im Zellplasma vorhanden sein und grüne Fluoreszenz erzeugen (Ex = 514 nm, Em = 529 nm）。JC-1Es kann nicht nur für qualitative Erkennungen verwendet werden, da Farbänderungen Veränderungen im Mitochondrialmembranpotential sehr direkt widerspiegeln können. Es kann auch für die quantitative Detektion verwendet werden, da der Depolarisierungsgrad der Mitochondrien rot passieren kann./Verhältnis der grünen Fluoreszenz-Intensität zu messen.

Produktzusammensetzung

speichernund Transport：-20Trocknen lassen, mindestens1Jahr wirksam. Transport:EisbeutelTransport

Gebrauchsanweisung JC-1 Mitochondriale Membran Potential Testkit

1. JC-1Färbungsflüssigkeitsvorbereitung

Für sechs Loch-Platten kann dieses Kit nachgewiesen werden100Eine Probe. Für jedes Loch erforderlichJC-1Die Menge der Färbungsflüssigkeit1 mlAndere Kulturgeräte. JC-1Die Menge der Färbungsflüssigkeit und so weiter; Für jede Zellsuspension 50～100Millionen Zellen benötigt 0,5 ml JC-1Arbeitsflüssigkeit färben. Nehmen Sie die richtige Menge JC-1（200×(Gemäß jedem50μL JC-1（200×(Beitritt) 8 mlVerhältnis von ultrareinem Wasser verdünnt JC-1. Starke Schütterung vollständig gelöst und vermischt JC-1und dann beitreten. 2ml JC-1Färbungspuffer (5×Nach der Mischung wird JC-1Arbeitsflüssigkeit färben.

[Hinweis]:Zuerst muss. JC-1（200×Mit ultrareinem Wasser (zur Verfügung gestellt) vollständig gelöst und vermischt, kann hinzugefügt werden JC-1Färbungspuffer (5×）。 Nicht erstellt JC-1Färbungspuffer (1×(wieder beitreten) JC-1（200×so). JC-1Es kann schwierig sein, vollständig aufzulösen, was die nachfolgenden Tests ernsthaft beeinträchtigen kann.

2. Einstellung der positiven Kontrolle

CCCP（10mM(Presse empfehlen) 1∶1000 Anteil der Zellkulturflüssigkeit hinzugefügt, verdünnt zu 10μMBehandlung der Zellen 20 MinutenAnschließend werden Sie wie folgt geladen: JC-1Ermittlung des mitochondrialen Membranpotentials. Für die meisten Zellen, in der Regel 10μM CCCPBearbeitung 20 MinutenDas Membranpotential der hinteren Mitochondrien wirdWanquanVerlust,JC-1Die Beobachtung nach der Färbung sollte grün fluoreszieren; Die normalen Zellen JC-1Nach der Färbung sollte rot fluoreszieren. Für bestimmte Zellen,CCCPWirkungskonzentration und Wirkungszeit möglich

Die Unterschiede müssen nach eigener Anleitung der relevanten Literatur entschieden werden.

3. Für suspendierte Zellen

1）取10～60 Millionen Zellen, wieder aufgehängt 0,5 mlIn der Zellkulturflüssigkeit kann die Zellkulturflüssigkeit Serum und Phenolrot enthalten.

2(Beitritt)0,5 ml JC-1Arbeitsflüssigkeit färben und mehrmals umgekehrt mischen. In der Zellkultur 37℃ Inkubieren20 Minuten。

3während der Inkubation entsprechend jedem 1ml JC-1Färbungspuffer (5×(Beitritt) 4 mlVerhältnis des destillierten Wassers, in der richtigen Menge JC-1Färbungspuffer (1×und in ein Eisbad platziert.

4）37nach dem Ende der Inkubation,600×g4℃ Zentrifuge3～4 Minutensedimentierte Zellen. Achten Sie darauf, möglichst keine Zellen zu entfernen.

5(Verwenden) JC-1Färbungspuffer (1×(Waschen) 2 Nächster: Beitritt 1ml JC-1Färbungspuffer (1×die Zellen wiederaufhängen,600×g4℃ Zentrifuge3～4 MinutenZellen absetzen und entfernen. Wieder beitreten 1ml JC-1Färbungspuffer (1×die Zellen wiederaufhängen,600×g4℃ Zentrifuge3～4 MinutenZellen absetzen und entfernen.

6(Wieder angemessene Mengen verwenden) JC-1Färbungspuffer (1×Nach der Wiedersuspension mit Fluoreszenzmikroskop oder Laserkofokusmikroskop beobachtet, kann auch mit Fluoreszenzspektralisierung Photometrische Erkennung oder Flow-Zytometrie-Analyse.

4. Für Wandzellen

[Achtung]: Für klebende Zellen, wenn Sie eine Fluoreszenz-Spektrophotometer oder Flow-Zytometrie verwenden möchten, können Sie zuerst die Zellen sammeln und anschließend auf die Methode der suspendierten Zellen verweisen.

1Für ein Loch in einer sechslochigen Platte, absorbieren Sie die Kulturflüssigkeit, die nach spezifischen Experimenten verfügbar ist, wenn nötig PBSoder eine andere geeignete Lösung, um die Zellen einmal zu waschen, fügen 1 mlZellkulturflüssigkeit. Die Zellkulturflüssigkeit kann Serum und Phenolrot enthalten.

2(Beitritt) 1ml JC-1Färbungsflüssigkeit, vollständig vermischt. In der Zellkultur 37℃ Inkubieren20 Minuten。

3während der Inkubation entsprechend jedem 1ml JC-1Färbungspuffer (5×(Beitritt) 4 mlVerhältnis des destillierten Wassers, in der richtigen Menge JC-1Färbungspuffer (1×und in ein Eisbad platziert.

4）37℃ nach dem Ende der Inkubation entfernen, mitJC-1Färbungspuffer (1×(Waschen) 2 Zweimal.

5(Beitritt) 2 mlZellkulturflüssigkeit, die Serum und Phenolrot enthalten kann.

6Beobachtung unter einem Fluoreszenzmikroskop oder einem Laserkofokusmikroskop.

5. Für gereinigte Mitochondrien

1(wird vorbereitet werden) JC-1Wiederverwendung der Färbungsflüssigkeit JC-1Färbungspuffer (1×(Verdünnung) 5 doppelt.

2）0.9mL 5doppelt verdünnt. JC-1Färbungsflüssigkeit hinzugefügt 0,1 mlGesamtproteinmenge ist 10～100 μggereinigte Mitochondrien.

3Detektion mit Fluoreszenzspektrometer oder Fluoreszentase-Skalierer: Zeitabtastung direkt mit Fluoreszenzspektrometer nach Mischung (Zeit Scannen(Die Wellenlänge ist485 nmDie Emissionswellenlänge ist 590nmWenn ein Fluoreszentase-Skalierer verwendet wird, kann die Anregungswellenlänge nicht auf 485 nmWenn, kann in475～520 nmStellen Sie die Stimulierungswellenlänge im Bereich ein. Außerdem können Sie sich auf die folgenden Schritte beziehen: 6 Die Wellenlängeneinstellung führt zur Fluoreszenzverkennung durch.

4Beobachtung mit Fluoreszenzmikroskop oder Laserkofokusmikroskop: Methode und folgende Schritte 6。

6. Fluoreszenzbeobachtung und Ergebnisanalyse

Erkennung JC-1Bei Monomer kann das Stimulationslicht auf 490 nmLichtemittierung auf 530nm; Prüfung JC-1Bei Polymeren kann das Licht auf 525 nmLichtemittierung auf 590nm。

[Hinweis1】: Bei der Messung der Fluoreszenz müssen das angeregte Licht und das emittierte Licht nicht auf die maximale angeregte Wellenlänge und die maximale emittierte Wellenlänge eingestellt werden. Bei der Beobachtung mit einem Fluoreszenzmikroskop JC-1Polymere können häufig verwendet werden, um Propylidijodid oder Cy3Standard-Banddurchgangsfilter verwendet werden. Erkennung JC-1Monomer kann häufig verwendet werden, um zu erkennen FITCoder GFPStandard-Banddurchgangsfilter. Das Auftreten grüner Fluoreszenz deutet darauf hin, dass das mitochondriale Membranpotenzial abnimmt und dass sich die Zelle wahrscheinlich in einem frühen Stadium der Apoptose befindet. Die Erscheinung roter Fluoreszenz zeigt, dass das Mitochondrialpotenzial relativ normal ist und der Zustand der Zelle relativ normal ist.

Hinweise

1）JC-1（200×(in der4℃, Eisbad und andere niedrigere Temperaturen unter Kondensation und Kleben in Zentrifugerrohrboden, Rohrwand oder Rohrdeckel, können20～25℃ Wasserbad Temperatur für einen Moment nach der vollständigen Schmelze verwenden.

2(Ladung abgeschlossen) JC-1Später verwenden JC-1Färbungspuffer (1×(beim Waschen) JC-1Färbungspuffer (1×(Aufrechterhalten) 4Bei ca. °C ist die Wäschewirkung zu diesem Zeitpunkt besser.

3）JC-1Nachdem die Sonde geladen und gewaschen ist 30 MinutenFolgeprüfungen innerhalb abgeschlossen werden. Vor der Prüfung muss ein Eisbad aufbewahrt werden.

4Bitte nichtJC-1Färbungspuffer (5×(Alle hergestelltJC-1Färbungspuffer (1×），Diese Kit muss während der Verwendung direkt verwendet werden.JC-1Färbungspuffer (5×）。

5(Wenn gefunden wird JC-1Färbungspuffer (5×Es gibt Niederlage, muss vollständig aufgelöst werden, bevor es verwendet werden kann. 37Die Erwärmung fördert die Auflösung.

6）CCCPFür mitochondriale Elektronenübertragungsketten-Inhibitoren, giftig, achten Sie bitte auf vorsichtigen Schutz.

7Zur Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte eine experimentelle Anzug und Einweg-Handschuhe.

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JC-1JC-1 TeilreferenzenJC-1 Mitochondriale Membran Potential Testkit

(1) [IF=9.7]Beitrag der Ferroptose und der dualen Funktionen von GPX4 zur Progression der OsteoarthritisEBioMedizin Veröffentlicht:27. Januar 2022 DOI: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

Die Rohdaten dieses Diagramms stammen aus der Literatur (1).

(2) [IF=11.4]VDR reguliert die Mitochondrialfunktion als Schutzmechanismus gegen Nierentubuläre Zellschäden bei diabetischen Ratten. -Redox Biologie -Band 70, April 2024, 103062.V

Die Rohdaten dieses Diagramms stammen aus der Literatur (2).

(3)[IF=11.1]LONP1 zielt auf HMGCS2 ab, um die mitochondriale Funktion zu schützen und chronische Nierenerkrankungen zu dämpfen.EMBO Mol Med(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

Immunofluoreszenz-Co-Positionierungsanalyse LONP1, HMGCS2 und Mitochondrien in mPTC (oben, Maßstab: 20um) und menschlichem Nierengewebe (unten, Maßstab: 200um).

Die Rohdaten dieses Diagramms stammen aus der Literatur (3).