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Produktkategorien
Shanghai Langhong Biotechnologie Co., Ltd.
Hybridprüfung vor Ort
VerhandlungsfähigAktualisieren am05/06
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Übersicht
Das Grundprinzip der in-situ-Hybridisierungsprüfung besteht darin, eine komplementäre Basensequenz zwischen den einzelnen Ketten von Nukleensäuremolekulen zu verwenden, die radioaktive oder nicht-radioaktive exotische Nukleensäure (d. h. Sonde) mit der zu prüfenden DNA oder RNA auf dem Gewebe, der Zelle oder dem Chromosom komplementär zu paaren, um zu einem spezifischen Nukleensäurehybride zu kombinieren.
Produktdetails
FISH-Methoden und Schritte
Einer. Sondendeformation
Die Sonde wird in einem 75 ° C thermostatischen Wasserbad für 5 Minuten erwärmt, sofort 0 ° C, 5 ~ 10 Minuten, so dass die doppelkettige DNA-Sonde deformiert wird.
Zwei. Probenveränderung
① Die vorbereiteten 5-8um Gläserproben werden 2-3 h in einem 50oC-Koffer gebraten. (Die durch Giemsa gefärbten Proben müssen im Voraus in der Feststoffflüssigkeit verfärbt und dann gebraten werden).
② Nehmen Sie die Folienprobe ab und tauchen Sie sie in einer Degenerationsflüssigkeit mit einem Volumenanteil von 70% Formamid / 2 x SSC bei 70 bis 75 ° C für 2 bis 3 Minuten.
3. Die Probe wird sofort in der Reihenfolge durch den Volumenanteil von 70%, den Volumenanteil von 90% und den Volumenanteil von 100% Eis-Ethanol-Serie entwässert, jedes Mal 5 Minuten, und dann mit Luft getrocknet.
Drei. Hybridisierung
Die degenerierte oder vorgebrannte DNA-Sonde 10 µL auf eine degenerierte und dehydrierte Folienprobe tropfen, mit einer 18×18-Deckelfolie abdecken, mit einer Parafilm-Abdeckung versehen und über Nacht bei 37°C in einer feuchten dunklen Box (ca. 15 bis 17 h) hybridisieren. Da es weniger Hybridflüssigkeit und eine hohe Hybridtemperatur und eine lange Dauer gibt, wird dieser Prozess in einer nassen Box durchgeführt, um den feuchten Zustand der Probe zu erhalten.
Vier. Entfernen
Dieser Schritt hilft, die Sonde, die nicht spezifisch gebunden ist, zu entfernen und somit den Boden zu senken.
(1) Am nächsten Tag der Hybridisierung werden die Proben aus dem 37 ° C-Gehäuse entnommen und die Deckscheibe mit einer Klinge vorsichtig entfernt.
(2) Die gekreuzte Folienprobe in 50% Formamid / 2 x SSC mit einem Volumenanteil von 42 bis 50 ° C vorerwärmt wird und 3 Mal je 5 Minuten gewaschen wird.
(3) Waschen Sie in 1 x SSC von 42 bis 50 ° C vorerwärmt 3 mal, je 5 min.
(4) Wäschen Sie die Folien bei Raumtemperatur in einer 2 x SSC leicht.
(5) Entfernen Sie die Folie und trocknen sie natürlich.
(6) Nehmen Sie 200 μL Multiinfektionslösung (PI / Antifade oder DAPI / Antifade Infusion) und tropfen Sie auf die Folienprobe und decken Sie die Folie ab.
Fünf. Fluoreszenzmikroskop FISH Ergebnisse beobachten
