ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)

ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)

MABTECH ELISPOT Prüfprinzipien

ELISPOT-Experimente verwendet PVDF-Membran-gestützte 96-Loch-Platte (Cat: MSIPS 4510, Millipore), verpackt mit spezifischen monoklonalen Antikörpern (erfordert giftfreie, endotoxinfreie, hohe Affinität mit Antikörpern), um die zelluläre Sekretion von Zytokinen zu erfassen.

Die zu erkennenden Zellen und Antigen-Stimulatoren werden dann in den Bohren der Platte kultiviert. Unter Stimulation des Stimulators sekretieren die T-Zellen die entsprechenden Zytokinen im entsprechenden Zeitraum. Zu diesem Zeitpunkt werden die Zytokinen von Antikörpern auf der Membran eingehüllt gefangen.

Nach dem Waschen der Zelle kann das gefangene Zytokin an den Biotin-gekennzeichneten zweiten Antikörper gebunden werden, dann wird das Enzym-Marker mit Biotin gebunden, um eine chemische Enzym-Kombination zu durchführen, um einen kreisen Fleck lokal in der Membran zu bilden (natürlich kann auch ein Fluorescent-gekennzeichneter zweiter Antikörper verwendet werden, so dass die nachfolgenden chemischen Färbungsmethoden gespart werden und mehrere Zytokine auf einmal detektiert werden können), jeder Fleck entspricht der Zelle, die ein Zytokin sekretiert.

Die Zahl der Flecken auf der Membran, die durch die Gesamtzahl der Zellen, die ursprünglich in das Loch hinzugefügt wurden, geteilt wird, kann den Prozentsatz der positiven Zellen berechnen.

MABTECHDiese Technologie hat drei Vorteile:

1: Hohe Empfindlichkeit. Nur eine Zelle in einer Million Zellen kann ein Zytokin ausscheiden, was im Vergleich zu herkömmlichen ELISA-Methoden um zwei bis drei Größenordnungen höher ist.

Zweitens: Einzellige Ebene, lebende Zellfunktionsprüfung. ELISPOT ist eine direkte Stimulation aktiver Zellen mit Antigenen, die die Funktion der lebenden Zellen erkennen.

3: Einfache und wirtschaftliche Bedienung und hohe Durchflusssicherung. ELISPOT hat keinen komplexen in vitro-zellulären Amplifikationsprozess, verwendet keine Isotope und arbeitet nach einem standardisierten Experiment, in dem ein Experimentierender Hunderte von Proben gleichzeitig verarbeiten kann, mit einer weit höheren Effizienz als andere Testmethoden.

ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)

MABTECH: 3420-2APW-2 enthält:

Vorbeschichtete Platten, mAb IL4-I(2 weiße Platten) Detektion mAb: IL4-II, ALP(150 μl)

BCIP/NBT-plus Substrat (25ml)

Positive Kontrolle: Anti-CD3mAb (CD3-2) (100 μl)

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