Herpes-Virus-Testkit

Herpes-Virus-TestkitVerpackungsgröße 25T / Karton & 50T / Karton

[Prüfprinzip]

Herpes-Virus-TestkitDiese Kit ist spezifisch für das Gen konzipiert, so dass eine PCR-Reaktion durchgeführt und ein Fluoreszenzsignal freigegeben wird, wenn die DNA in der zu prüfenden Probe enthalten ist. Mit dem Instrument werden die entsprechenden Fluoreszenzsignale während des PCR-Prozesses in Echtzeit überwacht und ausgegeben, um die qualitative Analyse der Testergebnisse zu ermöglichen.

[Hauptbestandteile]

Lagerbedingungen und Gültigkeitsdauer: unter -20 ° C aufbewahren, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden, Gültigkeitsdauer 12 Monate.

【Applizierte Instrumente】 ABI-Serie, Bio-Rad-Serie, Agilent Stratagene MX-Serie, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Rotor-Gene-Serie, Hangzhou Bogie-Serie und andere mehrkanale Echtzeit-Fluoreszenz-quantitative PCR-Messgeräte.

[Musteranforderungen]

1. Wenn die Originalprobe verwendet wird. Proben (Gehirn- und Wirbelsäulenflüssigkeit, Venenblut, Gelenkflüssigkeit des Patienten, Venenblut von kranken Tieren, Milch, Kolonien, Müsse usw.) sollten frisch gesammelt werden und Originalproben mit doppeltem Sterilisierungswasser oder physiologischer Salzsuspension für Sterilisierung verwenden.

2. Wenn nach der Sterilisation ein PCR-Test durchgeführt werden muss, sollte die Originalprobe mit selektiver Sterilisation sterilisiert werden.

3. Wenn die Probe nach der Sammlung nicht unmittelbar nachgewiesen werden kann, kann sie über Nacht in einer Kühlkammer von 2 bis 8 ° C gelagert werden; Für eine langfristige Aufbewahrung sollten die Proben bei -20 °C bis -80 °C gefroren werden.

[Prüfmethode]

1. Reagenzverbereitung (Reagenzverbereitungsbereich)

(1) Entfernen Sie das Reagenzgerät aus dem Kühlschrank, entfernen Sie das für das Experiment erforderliche Reagenz aus dem Reagenzgerät, schmelzen Sie es vollständig und mischen Sie es und zentrifugieren Sie es sofort, um die an der Rohrwand befestigte Flüssigkeit zu entfernen.

(2) Berechnen Sie die Anzahl der Reaktionen (n), die für das Experiment erforderlich sind, und berechnen Sie die für das Experiment erforderlichen Dosen anhand des Reaktionssystems, das in der folgenden Tabelle dargestellt ist.

n = Anzahl der negativen Kontrollen (1T) + Anzahl der positiven Kontrollen (1T) + Fehlerreserve (1T) + Anzahl der Proben

(3) Fügen Sie das oben genannte Reagenz in ein steriles Zentrifugerrohr hinzu und zentrifizieren Sie es sofort nach vollständiger Mischung. Das Reagenz wird in das PCR-Röhrchen nach 20 μL/Röhrchen aufgeteilt.

(4) Nach dem Abdecken des PCR-Reaktionsrohres wird das PCR-Reaktionsrohr in den Probenbehandlungsbereich übertragen. Die übrigen Reagenzien werden im Kühlschrank unter -20 ° C gefriert.

Probenvorbereitung (Probenbehandlungsbereich)

Die Nukleinsäure kann mit einer DNA/RNA-Extraktions-Kit extrahiert werden. Die spezifischen Vorgänge müssen den Anweisungen der Kit folgen.

3. Beispiel

Zu den oben vorbereiteten PCR-Probenröhren werden jeweils 5 μl der verarbeiteten Probe-DNA und ein Endvolumen von 25 μl/Röhre hinzugefügt, nachdem die PCR-Reaktionsdeckel gemischt wurde, wird sie sofortig mit niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert und auf das PCR-Instrument übertragen. Die negativen Kontrollen und die positiven Kontrollrohre werden jeweils mit 5 μl negativen oder positiven Kontrollen, die mit dem Kit geliefert werden, mit einem Endvolumen von 25 μl/Röhre versehen und nach dem Mischen des PCR-Reaktionsdeckels sofortig auf das PCR-Instrument übertragen.

PCR (PCR-Amplified Zone)

(1) Nehmen Sie die bereiten PCR-Röhren aus dem Probenbehandlungsbereich, legen Sie sie an die entsprechende Position in der Echtzeit-Fluoreszenz-Quantitative-PCR-Probe-Slot und erfassen Sie die Reihenfolge der Platzierung.

(2) Setzen Sie die Parameter der Nukleinsäure-Amplifikation für die PCR-Amplifikation nach der folgenden Tabelle.

Hinweis: Die Fluoreszenz-PCR-Messgeräte der ABI-Serie wählen keine ROX-Korrektur bei der Einstellung und wählen die Löschgruppe None.

Referenzwert (Referenzbereich)

1. Wirksamkeitsbestimmung der Kit:

(1) Positive Kontrolle: Es gibt eine typische S-Verstärkungskurve oder einen Ct-Wert von ≤35.

(2) Negativer Kontrol: Ct-Wert > 38 oder kein Ct-Wert, die Linie ist geradlinig oder leicht schräg, keine exponentielle Wachstumsperiode.

2. Die Probenergebnisse bestimmen:

(1) Positiv: Die Proben haben einen Ct-Wert von ≤35 oder eine deutliche exponentielle Wachstumsperiode.

(2) Verdächtig: Die Ct-Werte der Proben liegen im Bereich von 35 bis 38. Zu diesem Zeitpunkt sollte die Probe wiederholt getestet werden, wenn das wiederholte Experimentergebnis Ct-Wert noch im Bereich von 35 bis 38 ist und eine offensichtliche exponentielle Wachstumsperiode hat, wird es als positiv bestimmt, sonst als negativ.

(3) Negativ: Die Probe ergab einen Ct-Wert > 38 oder keinen Ct-Wert.

[Erklärung der Testergebnisse]

(Einschränkungen der Prüfmethode)

1. Fälschungsnegative Ergebnisse können auftreten, wenn die Nukleinsäurekonzentration in der Testprobe niedriger als in diesem Kit nachgewiesen wird.

2. Die falsche Handhabung der untersuchten Probe während der Entnahme, des Transports, der Lagerung und der Verarbeitung kann zu einer falschen negativen Ergebnisse führen, die zu einer DNA-Abbau führen.

Eine Kreuzkontamination der Probe während der Entnahme, des Transports, der Lagerung und der Verarbeitung kann gefälschte positive Ergebnisse erzielen.

Produktleistungsindikator: Die Detektionsbegrenzung des Produkts beträgt 103 Kopien / ml, der ProduktCV-Wert ≤ 3%.

[Achtung]

1. Die Labore, die diese Kit verwenden, werden streng in Übereinstimmung mit den in den betreffenden Teilen des Landes erlassenen Normen für die Verwaltung von Laboren für Genamplifikationsprüfungen verwaltet;

Um den RNA-Abbau zu vermeiden, sollte der Probenverarbeitungsprozess unter 0-4 ° C betrieben werden und sofort nach Abschluss des Experiments an Bord getestet werden; Geräteverbrauchsmaterialien, die bei der Probenbehandlung verwendet werden, müssen nukleazyfrei behandelt werden;

3. Alle regionalen Gegenstände sind speziell bestimmt und dürfen nicht kreuzverwendet werden, um Verschmutzung zu vermeiden; Nach Abschluss der Prüfung sollte der Arbeitstisch sofort gereinigt werden;

4. Bei der Absorption der Reaktionsflüssigkeit sollte die Erzeugung von Blasen so weit wie möglich vermieden werden; Vor dem PCR-Gerät sollten Sie darauf achten, ob die einzelnen Reaktionsrohre dicht abgedeckt sind, um zu vermeiden, dass das Verdampfen der Flüssigkeit ungenaue Ergebnisse verursacht;

5. Alle Reagenzien in der Kit sollten vor der Verwendung bei normaler Temperatur vollständig geschmolzen und umgehend zentrifugiert werden;

Die in der Kit enthaltenen negativen und positiven Kontrollen müssen vor der ersten Verwendung vollständig in den Probenvorbereitungsbereich übertragen und getrennt aufbewahrt werden.

Um Fluoreszenzstörungen zu verhindern, sollte der direkte Kontakt mit bloßen Händen mit dem PCR-Reaktionsröhrchen vermieden werden und jede Markierung auf dem PCR-Reaktionsröhrchen vermieden werden.

8. Der Saugkopf, der während der Prüfung verwendet wurde, sollte direkt in den Abfallbehälter mit 10% Hypochlorsäure geschlagen werden, das endgültige PCR-Reaktionsröhrchen untersucht werden, den Deckel geöffnet und mit anderen Abfällen sterilisiert werden; Arbeitstisch und verschiedene Versuchsmittel sollten regelmäßig mit 10% Hypochlorsäure, 75% Alkohol oder UV-Lampe desinfiziert werden;

Die Parameter für die Verstärkung des Instruments müssen gemäß den einschlägigen Anforderungen dieser Anweisung festgelegt werden; Verschiedene Chargennummern können nicht gemischt werden; und während der Gültigkeitsdauer verwendet werden. Produkte werden ausschließlich zur wissenschaftlichen Forschung verwendet.