1. Dieser Test basiert auf GB 5009.299-2024, NY/T 4439-2023 und den zugehörigen Gruppen- und Unternehmensstandards zur Bestimmung des Lactferritingehalts in pasteurisierter Milch, Ultrahochtemperatur-Sterilisierungsmilch und Säuglingspulver.

2. Um eine gute Spitzenform und Trennung zu erzielen, wurden die Vorbehandlungs- und Flüssigchromatografiebedingungen angemessen optimiert, um bei einer Kolonnentemperatur von 30 ° C und einer Durchflussgeschwindigkeit von 1,0 mL / min0,1% Trifluoressigsäure Wasser - 0,1% Trifluoressigsäure NitrilAls Flussphase wird eine gradiente Abwäsche durchgeführt, wobei der maximale Systemdruckwert 106 bar nicht übersteigt.

3. Die Testergebnisse zeigen: Lacteferrin-Standardlösung (50,0 μg / mL) Chromatografie Spitze Asymmetrie Faktor 1,00, Spitzenform gut, theoretische Anzahl der Türme 30549, ausgezeichnete Säulenwirkung; Drei aufeinanderfolgende Probenaufnahmen, die Retentionszeit und die RSD der Spitzenfläche sind weniger als 1%, die Methode ist gut reproduzierbar; Lineares Tiefpunkt (1,00 μg/mL) mit einem Signal-Rausch-Verhältnis von 8,2 und einer höheren Methodenempfindlichkeit; Linearer Bereich 1,00-200 μg/mL, linearer Korrelationskoeffizient r²≥ 0,9998, gut linear.

4. Bei Versuchen zur Bestimmung des Lactoferrin-Gehalts in Milchprodukten mit der Gegenphase-Flüssigchromatographie zeigte die BioBasic 4-Chromatografie-Säule (Apertur 300 Å) in Verbindung mit dem effizienten Flüssigchromatografiesystem Vanquish Core eine gute Reproduzierbarkeit und eine ausgezeichnete Stabilität, wobei sowohl die Detektionsgrenzen als auch die Quantitätsgrenzen den Standardanforderungen entsprechen und für Milchprodukteunternehmen und Lebensmittelprüflabore zur Verfügung stehen.

1.1 Probenextraktion

1.1.1Flüssigkeitsproben: Mikromilch (Rohmilch, Pasteurisierte Milch) / Normalmilch (UHT-Sterilisierungsmilch)

Wägen Sie die Probe 5 g (genau bis 0,1 mg) in einem 50 mL-Zentrifugerrohr mit skaliertem Drehdeckel, kondensieren Sie sie mit Phosphatpuffer II auf 25,0 mL, schwingen Sie 3 min und zentrifugieren Sie 12.000 U/min bei 4 ° C für 15 min. Lassen Sie bei Raumtemperatur stehen, entfernen Sie die obere Schicht und nehmen Sie die Reinigung ab.

1.1.2Feste Probe: Milchpulver (Milchpulver für Säuglinge und Kleinkinder)

Wägen Sie die Probe 2 g (genau bis 0,1 mg) in einem 50 mL-Zentrifugerrohr mit skaliertem Drehdeckel, fügen Sie die Menge Phosphatpuffer II mit einer warmen Schwingungslösung hinzu, kondensieren Sie mit Phosphatpuffer II auf 50,0 mL, schütteln Sie 3 min, stehen Sie länger als 30 min und zentrifizieren Sie 12.000 U/min bei 4 ° C für 15 min. Lassen Sie bei Raumtemperatur stehen, entfernen Sie die obere Schicht und nehmen Sie die Reinigung ab.

1.2 Reinigung der Probe

1.2.1Aktivierung: HyperSep Hepatin-Affinität Säule (P/N: 60105-110-B) unteren End Luer Anschluss an die Festphase-Extraktion, die obere End über den Adapter (P/N: 60104-259) seriell 10 mL Spritze leere Kolben, 2 x 5 mL Phosphatpuffer II hinzufügen, um Hepatin-Affinität zu aktivieren und die Tropfgeschwindigkeit 2d/3s zu kontrollieren;

1.2.2Obere Probe: Wenn die Flüssigkeitsoberfläche des Aktivierungsschritts sich der Säulensiebplatte nähert, nehmen Sie 10,0 mL der oben genannten Probe genau in eine leere Spritze (P/N: S7510-10), kontrollieren Sie die Tropfgeschwindigkeit 2 d/3 s und entfernen Sie den Abfluss;

1.2.3Waschen: Wenn die Flüssigkeitsoberfläche in der Nähe der Säulensiebplatte steht, fügen Sie 2 x 5 mL Phosphatpuffer II hinzu, waschen Sie die Säulen, entfernen Sie den Abfluss, entfernen Sie den Adapter und die leere Spritze und trocknen Sie die Säulen 2 min unter negativem Druck;

1.2.4Waschen: Fügen Sie 2 x 2,5 mL Phosphatpuffer I hinzu und waschen, sammeln Sie die gesamte Waschflüssigkeit und kondensieren Sie mit Phosphatpuffer I auf 5,00 mL über einen 0,2 μm hydrophilen PTFE-Nadelfilter (P/N: 42213-NPL) und testen Sie das Filter auf.

Thermo Scientific ™ Vanquish Core ™ Hocheffizientes Flüssigchromatografiesystem, Konfiguration: Pumpe Quaternary Pump C (VC-P20-A), Automatischer Probenahmer Split Sampler CT (VC-A12-A), Säulenthermokammer Column Compartment C (VC-C10-A), Detektor Diode Array Detector CG (VC-D11-A), Datenverarbeitung Chromeleon ™ 7.3

Chromatografie: BioBasic 4, 5 μm, 4,6 x 250 mm (P/N: 72305-254630)

Flussphase: A: 0,1% Trifluoressigsäure Wasser B: 0,1% Trifluoressigsäure Nitril

Durchflussgeschwindigkeit: 1,0 ml/min

Gradientenreinigungsverfahren:

Probenvolumen: 50 µL

Zylindertemperatur: 30 ℃

Detektor: DAD, Erfassungswellenlänge: 280 nm; Erfassungsfrequenz: 5 Hz; Spektralaufnahme: 190-400 nm