Einleitung

Neomycinsulfat ist ein mehrkomponentes aminozuckerhaltiges Antibiotikum, das aus den Stoffwechselprodukten von Neomycin-Kettenschimmel (Streptomyces fradiae) isoliert wurde, mit einer breiten Wirkung auf das antibakterielle Spektrum, wegen seiner Ohr- und Nierentoxizität, klinisch für den externen und oralen Gebrauch. Neomycinsulfat Rohstoffe sind in inländischen und ausländischen Apotheken aufgenommen［1-5］.

Die Version 2025 der chinesischen Apotheke wird am 1. Oktober 2025 in Kraft treten. Neomycinsulfat wurde in dieser pharmakotischen Revision die Prüfung der relevanten Substanzen hinzugefügt und die Grenzen für Neomycin, Neomycin A und andere Verunreinigungen festgelegt. Die Methode ist eine effiziente Flüssigchromatographie, die die oben genannten Komponenten mit einer C18-Chromatographie-Säule trennt, die Flussphase ist eine Trifluoressigsäure-/Pentafloropropionsäure-/Natriumhydroxidlösung und der Detektor ist ein Impulsverstärkerdetektor.［6］Wenn diese chromatografische Bedingung auf einem Flüssigchromatometer ausgeführt wird, gibt es häufig folgende Probleme:

1. das System ist instabil, die Empfindlichkeit nimmt allmählich ab und die Reproduzierbarkeit ist schlecht;

2. Die Säulenwirkung fällt schnell ab, die Chromatografie Säulenlebensdauer ist kurz;

3. Flussphase enthält hohe Salz- und Ionen-Pairing-Reagenzien, die mit dem Massenspektrum verbunden sind.

Symer Fly bietet als Dienstleister im Bereich der wissenschaftlichen Analyse eine Ionenchromatografie-Lösung für diese Methode. Diese Lösung umfasst eine vollständige PEEK-Ionenchromatografie, Flussphase, Chromatografie-Säulen, Detektoren, Massenspektrum und professionelle Datenverarbeitungssoftware. Von der Formulierung von Flussphasen über die Reproduktion von Methoden über die Quantifizierung und Qualifizierung von Verunreinigungen bis hin zu einem One-Stop-Service, um Kunden dabei zu helfen, die Herausforderungen der neuen Projekte in der Apotheke einfach zu bewältigen.

Abbildung 1. Struktur des Neomycins und seiner Verunreinigungen

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Instrumente und chromatografische Bedingungen

Werkzeug: Dionex ™ ICS-6000 Ionenchromatografiesystem mit Doppelpumpe, Kolonnenthermometer und AS-AP-Probenahmer

色谱柱: Thermo Dionex™ IonPac™ AmG C18 (4×150mm, 3 μm, PN 302693)

Flussphase: 2% Trifluoressigsäure-Lösung (enthält 0,01% Pentafloropropionsäure, 0,6% 50% Natriumhydroxid)

Durchflussgeschwindigkeit: 0. 8 mL /min

Zylindertemperatur: 25 ℃;

Alkali nach der Säule: 50% NaOH-Lösung verdünnt 25mal

Durchflussgeschwindigkeit der Lösung nach der Säule: 0. 3 mL /min

Probenvolumen: 25 μL

Detektor: Impulsverstärkungsdetektor, vierwelliges Detektionspotential

Arbeitselektrode: 3 mm Goldelektrode (PN 063723)

Referenzelektrode: Ag/AgCl Referenzelektrode (PN 061879)

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Chromatografie

Abbildung 2. Diagramm der Isolierung von Neomycinsulfat durch AmG C18-Chromatografie[7](Klicken Sie auf das große Bild)

Die AmG C18-Chromatografie-Säule ist eine von Symer für Aminoglykoside-Antibiotika entwickelte Chromatografie-Säule, die Neomycin B, Neomycin C und verschiedene Verunreinigungen besser isolieren kann. Die Hauptspitzensymmetrie ermöglicht die Isolierung von 13 Komponenten aus Neomycinsulfat.

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Der lineare Bereich von Neomycin B, Neomycin C und Neomycin ist in der folgenden Tabelle [7]

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Wiederholung [7]

Nehmen Sie 6 Proben der gleichen Charge von Neomycinsulfat nach der oben genannten Methode, die Gesamtmenge der Verunreinigungen RSD (n = 6) beträgt 1,10%, die Methode ist gut wiederholbar.

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Strukturelle Identifizierung unbekannter Verunreinigungen in Verbindung mit MS

Ionen-Paar-Reagentien wie Trifluoressigsäure, Pentafloropropionsäure und Heptafluorbutyrsäure sind die häufig verwendeten Flussphasen für die Analyse von Aminoglykoside-Antibiotika. Mit Hilfe von Ionenpaarungsreagenzien können strukturähnliche Aminoglykoside-Antibiotika auf der C18-Chromatografie-Säule zufriedenstellend isoliert werden. Für die Massenspektrometrie von Aminoglykoside-Antibiotika ist eine Entsalzung der Flussphase erforderlich. Cationinenhemmer, die Anionen in der Flussphase effektiv entfernen können.

Abbildung 3. IC-MS/MS-Kombination zur Qualifizierung von Antibiotika-Verunreinigungen mit Aminoglykoside

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Zusammenfassung

Das von SymerFly eingeführte Aminoglykoside-Antibiotika-Analysesystem kann nicht nur die Nachweisbedürfnisse von Neomycin-Sulfat und Etimisin-Sulfat in der chinesischen Apotheke erfüllen, sondern auch für Antibiotika in anderen Apotheken wie USP, EP und anderen, die mit der HPLC-PAD-Methode getestet werden, wie Gentamycin-Sulfat, Amicasin-Sulfat, Oktamycin-Salzsäure usw. Das Programm hat folgende Vorteile:

AmG C18 chromatografische Säulentrennung ist gut, kann niedrige pH-Ionen-Paar-Flussphase tolerieren, eine längere Lebensdauer;

ICS 6000 Ionenchromatografiesystem, Vollstrom-PEEK-Material, das die Stabilität des Systems gewährleistet;

Der ICS6000 verfügt über einen Ampere-Detektor und eine goldene Elektrode mit einer sehr hohen Empfindlichkeit gegen Ammoniakose-Antibiotika;

Einfache Entsalzung, um den Bedarf an Massenspektrumverbindungen gerecht zu werden.

Interaktive Themen:

Welche Fragen haben Sie zur Bestimmung von Neomycinsulfat und Aminozucker-Antibiotika? Oder was halten Sie von der HPLC-PAD-Technologie? Willkommen im Kommentarbereich!

Referenzen:

Zweite Ausgabe der chinesischen Apotheke 2020

European Pharmacopeia 9.0: Band III

Die Internationale Pharmakopäe (5. Ausgabe)

4. The United States Pharmacopeial40-The National Formulary 35: volume III( American Pharmacopoeia 40-Nationale Rezept-Sammlung 35: Band 3) [S]

Japanese Pharmacopeia XVII (17. Ausgabe)

2. Ausgabe der chinesischen Apotheke 2025

7. Zhang Qian, Huang Minwen, FANG Wang, Warten Sie. HPLC-PAD-Methode zur Bestimmung des Neomycinsulfat-Gehalts und seiner verwandten Substanzen [J].

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