Chemische leuchtende MagnetperlenWährend der Prüfung ist es anfällig für die Leistung der Magnetkörler, die Betriebsbedingungen und das Reaktionssystem, die Reunion der Magnetkörler, die Anomalie des Lichtsignals und die Erkennung einer schlechten Wiederholbarkeit. Kernprobleme können effizient gelöst werden, indem die Materialauswahl optimiert, die Betriebsparameter angepasst und die Spezifikationsaufrechterhaltung angepasst wird.
1. Problem 1: Magnetkörlen werden wiedervereint und können nicht gleichmäßig verteilt werden
Die Reunion der magnetischen Kugeln führt zu einer Verringerung der Reaktionskontaktfläche, die sich direkt auf die Detektionsempfindlichkeit auswirkt.
*** Häufige Ursachen ***
1. Die Dichte der Oberflächenmodifikationsgruppen (wie Carboxyl, Amino) ist unzureichend und die gegenseitige Ausschlusskraft ist schwach.
2. Lagerflüssigkeit flüchtig oder Änderung der Ionenkonzentration, zerstören die Kolloidstabilität.
3. Wiederholtes Gefrierschmelzen während des Betriebs, was zu einer zweiten Ansammlung von Magnetkörlen führt.
** Lösung *:
1. Wählen Sie magnetische Perlen mit hoher Modifikationsdichte (z. B. Carboxyldichte ≥ 20 μmol / g), um die Dispersion sicherzustellen.
2. Verschließen Sie bei der Lagerung vor Licht und fügen Sie spezielle Konservierungsflüssigkeiten hinzu (z. B. PBS, das 0,02% Natrium enthält), um Konzentrationsschwankungen zu vermeiden.
3. Nach dem Auffrieren mit einem Wirbelsozilator vollständig vermischen (1000-1500 U/min, 30 Sekunden), starke Schütterungen zu verbieten.
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2. Problem 2: Lichtemittierendes Signal ist schwach und die Unterscheidungsgrenze nicht erreicht
Die Lichtintensität des Signals bestimmt direkt die Empfindlichkeit der Detektion, und schwache Signale sind in der Regel mit einer geringen Reaktionseffizienz verbunden.
*** Häufige Ursachen ***
1. Magnetkörgel und Antikörper / Antigen koppeln ineffizient, unzureichende Bindungsstellen.
2. Verringerte oder unzureichende Aktivität der luminescenten Substrate (z. B. Lumino, Pipidine).
Die Reaktionstemperatur abweicht vom optimalen Bereich (normalerweise 25-37 ° C) und die Enzymaktivität wird unterdrückt.
** Lösung *:
1. Optimierung der Kopplungsbedingungen: Anpassung des pH-Werts (z. B. pH = 5,0-6,0, wenn Carboxyl-Magnetperlen gekoppelt sind), Zugabe von EDC / NHS-Aktivierungsmitteln, um die Kopplungseffizienz auf mehr als 80% zu erhöhen.
2. Verwenden Sie ein frisch zusammengesetztes leuchtendes Substrat, um die Verwendung genau zu kontrollieren (z. B. 100 μL / Loch), um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.
3. Verwenden Sie einen thermostatischen Inkubator (± 0,5 ° C Genauigkeit), um die Stabilität der Reaktionstemperatur zu gewährleisten und Raumtemperaturschwankungen zu vermeiden, die die Enzymaktivität beeinflussen.
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Problem 3: Schlechte Wiederholbarkeit der Erkennung, zu hoher CV-Wert
Eine schlechte Wiederholbarkeit (CV-Werte > 10%) kann zu unzuverlässigen Ergebnissen führen, die vor allem auf die Betriebs- oder Systemkonsistenz zurückzuführen sind.
*** Häufige Ursachen ***
1. Bei der Probenahme von Magnetkörlen ist der Volumenfehler groß (z. B. unzureichende Pipettenpräzision).
2. Die magnetische Trennzeit ist inkonsistent, was zu unterschiedlichen Restmengen von nicht gebundenen Magnetkörlen führt.
3. Die Wäscheschritte sind nicht normiert und die verbleibenden Verunreinigungen stören die Leuchtreaktion.
** Lösung *:
1. Verwenden Sie eine hochpräzise Pipette (z. B. 10-1000 μL, Fehler ≤ ± 1%), Kalibrieren Sie vor der Probenahme, um sicherzustellen, dass das Volumen jedes Lochs konsistent ist.
2. Stellen Sie eine feste magnetische Trennzeit ein (z. B. 5 Minuten), verwenden Sie einen magnetischen Rahmen mit Zeitfunktion, um Zeitschwankungen zu vermeiden.
3. Verwenden Sie den Schritt "Einweichen-Trocknen" (z. B. 200 μL Waschflüssigkeit pro Loch hinzufügen, nach 30 Sekunden Einweichen trocknen), wiederholen Sie 3 Mal, um sicherzustellen, dass der Rückstand < 5 μL ist.
4. Problem 4: Magnetkörlen fallen schnell ab und schichten während der Reaktion
Zu schnell absetzende Magnetkörlen können zu einer unzureichenden Reaktion führen, die insbesondere in der Inkubationsphase die Gleichmäßigkeit der Ergebnisse beeinflusst.
*** Häufige Ursachen ***
1. Die Magnetperlengröße ist zu groß (z. B. > 500 nm), und die Schwerkraft ist größer als die Diffusionskraft.
2. Die Viskosität des Reaktionssystems ist niedrig und kann die Magnetkörlensuspension nicht unterstützen.
** Lösung *:
1. Wählen Sie die Magnetperlen, die sich an die Partikelgröße anpassen (regelmäßige Tests empfehlen 100-300 nm), um die Dispersion und die magnetische Reaktionsgeschwindigkeit auszugleichen.
Hinzufügen einer kleinen Menge an Verdickungsmittel (z. B. 0,1% BSA) in die Reaktionsflüssigkeit, um die Viskosität des Systems zu verbessern und die Ablagegeschwindigkeit zu verlangsamen; Zur Inkubation wird alle 10 Minuten sanft vermischt (500 Umdrehungen pro Minute, 10 Sekunden).