Die HPLC-Präparationschromatografie ist ein wichtiges Werkzeug für die Trennung und Reinigung von Verbindungen in der High Performance Liquid Chromatography-Technologie.

- Zylinderrohr: in der Regel aus Edelstahl oder Glas hergestellt, mit guter Druckbeständigkeit und chemischer Stabilität. Der Innendurchmesser der Säulen bestimmt die Füllmenge und die Trennungsgröße der Chromatografie-Säulen, und der Innendurchmesser der Vorbereitung der Chromatografie-Säulen liegt im Bereich von 50 bis 200 mm.

- Füllstoffe: ist der Kernteil der Chromatografie Säule, die üblichen Füllstoffe sind Silikon, Aluminiumoxid, organische Polymer Mikrosphären und so weiter. Füllstoffe aus Silikonmatriz haben eine bessere mechanische Festigkeit und chemische Stabilität, durch die Bindung verschiedener funktioneller Gruppen (wie C18, C8, C4 usw.) kann die Trennung verschiedener polarer Verbindungen erreicht werden.

- Siebplatte: befindet sich an beiden Enden der Säulenröhre, um Füllstoffe zu unterstützen, um Füllstoffleckagen zu verhindern und gleichzeitig sicherzustellen, dass die Flussphase gleichmäßig durch die Chromatografie-Säulen passiert.

Schritte zur Herstellung der HPLC-Chromatografie:

1. Vorbereitung

Sicherheitskontrollen: Sicherstellung der Sicherheit im Laborbereich durch persönliche Schutzausrüstung wie Laborkleidung, Handschuhe und Schutzbrillen.

- Instrumentenprüfung: Überprüfen Sie den Zustand der HPLC-Geräte, um sicherzustellen, dass Säulen, Detektoren, Pumpen und andere Komponenten ordnungsgemäß funktionieren. Schalten Sie das HPLC-System ein und setzen Sie die richtigen Parameter wie Temperatur, Durchflussgeschwindigkeit und andere ein, damit das System in einem stabilen Zustand steht.

- Vorbereitung der Flussphase: Zubereitung der Flussphase gemäß den experimentellen Anforderungen, Filtern Sie das Lösungsmittel oder die Flussphase mit 0,2 μm Filterpapier und führen Sie eine Ultraschallandegasung durch, um die Blasen und Verunreinigungen zu entfernen.

- Probenvorbereitung: Die Probe wird mit dem richtigen Lösungsmittel gelöst und auf die richtige Konzentration verdünnt und ebenfalls mit einem 0,2 μm Filterfilm gefiltert, um sicherzustellen, dass die Probenlösung frei von Verunreinigungen ist.

2. Installation der Chromatografie-Säule: Installieren Sie die vorbereitende Chromatografie-Säule im HPLC-System, achten Sie darauf, dass die Verbindung eng ist, um Leckagen zu verhindern. Vor der Installation können Sie das Erscheinungsbild der Chromatografie-Säulen überprüfen, ob diese beschädigt sind.

3. Systemausgleich: Spülen Sie die Chromatogrammsäule mit der Flussphase, die allgemeine Spülzeit beträgt 15-30 Minuten, bis die Grundlinie glatt ist, um sicherzustellen, dass die Chromatogrammsäule mit der Flussphase gefüllt ist und den Gleichgewichtszustand erreicht hat.

4. Probenbezogenheit: Wählen Sie die geeignete Probenbezogenheit und die geeignete Probenbezogenheit aus und injizieren Sie die Probe in das HPLC-System. Beginnen Sie mit der Erfassung von Daten und erfassen Sie die Retentionszeit, Spitzenbreite, Spitzenhöhe und mehr.

5. Datenverarbeitung und Analyse: Berechnen Sie die relevanten Parameter der Chromatografie-Säule, wie die Anzahl der theoretischen Türmplatten, den Asymmetrikfaktor, den Trennungsgrad usw., um die Leistung der Chromatografie-Säule zu bewerten. Häufige Datenverarbeitungsmethoden umfassen die Messung der Spitzenfläche, die Messung der Spitzenhöhe, die quantitative und qualitative Analyse.

6. Reinigung und Aufbewahrung der Chromatografie-Säulen: Nach Abschluss der Messung reinigen Sie die Chromatografie-Säulen mit einem geeigneten Lösungsmittel und entfernen Sie die restlichen Proben und die Flussphase. Für die Gegenphase-Chromatografie-Säulen wird in der Regel zuerst mit Methanol oder Acetonitril und anschließend mit reinem Wasser gespült; Für die orthophasechromatografische Säule kann man mit organischen Lösungsmitteln wie orthohexan spülen. Nach der Reinigung bewahren Sie die Chromatografie gut, um Trocknung und Verschmutzung zu vermeiden.