Laut Statistiken nahe80%Organische und anorganische Stoffe können durch eine effiziente Flüssigchromatographie getrennt werden, in derC18Die Chromatografie-Säulen sind die am häufigsten verwendeten Typen von Chromatografie-Säulen in der effizienten Flüssigchromatografie. Hier unten.C18Eine Einführung in die Auswahl, Wartung und Reparatur der Chromatografie-Säulen.

Einer,C18Auswahl der Säulen

C18Die wichtigsten Überlegungen bei der Auswahl2Ein Problem, nämlich die Auswirkungen von Säulenfüllstoffen und Säulenspezifikationen auf die Chromatografie Säulen.

Die physikalischen Eigenschaften von Säulenfüllstoffen haben einen wichtigen Einfluss auf das chromatografische Verhalten von Füllstoffen. Zu den wichtigsten physikalischen Eigenschaften von Füllstoffen gehören: Partikelgröße, Durchmesser, Porenvolumen, Bindungsphase-Chemie, Kohlenstoffgehalt und Alkylierung.

(1)Die Partikelgröße bezieht sich auf die Größe des Partikeldurchmessers der Säulenfüllung. Tatsächlich ist die Partikelgröße, die auf der Chromatografie-Säule angegeben ist, ein Durchschnittswert. wie die Partikelgröße."5μmNicht alle Partikeldurchmesser der Säulen sind5μmEs gibt tatsächlich eine Partikelverteilung. Diese Verteilung spielt eine wichtige Rolle für den Kolonnenwiderdruck und die Kolonnenwirksamkeit. Im Allgemeinen ist je kleiner die durchschnittliche Partikelgröße, desto kleiner die Partikelverteilung, desto höher die Effektivität der Chromatografie und desto höher der Gegendruck. AktuellC18Säulenfüllstoff Partikelgröße in4～10μmZwischen.

(2)Der Durchmesser bezieht sich auf den Lochspalt zwischen den Füllstoffpartikeln. Im Allgemeinen bezeichnet man den Durchschnittsdurchmesser des Füllstoffs. Die durchschnittliche Durchmesserverteilung der kugelförmigen Füllstoffe nach der Installation der Säulen ist relativ eng, die Säulenbettstruktur ist gleichmäßig, die Säulenwirkung ist hoch und die Reproduzierbarkeit ist gut; Die mittlere Durchmesserverteilung der formlosen Füllstoffe ist breit, die Struktur des Säulenbettes ist ungleichmäßig, die lineare Geschwindigkeit des Flusses ist ungleichmäßig und das Spektrum erweitert sich. Die Größe der durchschnittlichen Apertur hat einen größeren Einfluss auf die Trennung von Makromolekularverbindungen und kann bei der Trennung von Proben mit größeren Molekülen einen molekularen Absorptionseffekt oder einen Adsorptionseffekt haben, der die quantitative Rückgewinnungsrate und Genauigkeit beeinflusst. Daher sollte bei der Isolierung von Protein- oder Polypeptidproben durch Reverse-Phase-Chromatografie die Wahl großer Poren in Betracht gezogen werden.(wie30 nm)Gegensäulenfüllung. Das Porenvolumen als Parameter der Silikon-Porosität kann bei der Trennung und Analyse größerer molekularer Verbindungen als Referenz verwendet werden, indem ein größeres Porenvolumen mit Gegenphasensäulenfüllstoff ausgewählt wird.

(3)Chemische Bindungsphase-Füllstoffe spielen eine sehr wichtige Rolle in der effizienten Flüssigchromatographie. Es kann größere polare organische Gruppen binden und kleinere polare Lösungsmittel als Flussphase verwenden. Auch kleinere polare organische Gruppen können gebunden werden und größere polare Lösungsmittel als Flussphase verwendet werden.C18Die chromatografische Säule ist mit Silanierung gebunden(Si-O-Si-C)Diese Bindungsreaktion ist derzeit am häufigsten eingesetzt. Wie z.B. Octalakyltrichlorsilan und vollporöses SilikonM-Porasil-C18Die Reaktion erzeugt eine chemische Bindungsphase, die alsM-Bondapak-C18.

(4)Kohlenstoffgehalt ist der Kohlenstoffgehalt im Füllstoff. Die herkömmliche Messtechnik besteht darin, den Füllstoff bis zum Bruch der Kohlenwasserstoffbindung zu erhitzen und den Kohlenwasserstoffgehalt durch Messung des Gewichtsverlusts oder des gebildeten Kohlendioxids zu berechnen. Der Kohlenstoffgehalt kann erhöht werden, indem die Länge der Kohlenstoffbindung erhöht oder die Bindungsdichte erhöht wird. Der Kohlenstoffgehalt steigt und der Retentionswert der Säulen steigt. Das chromatografische Verhalten der Bindungsphase ist mit der Bindungsdichte verbunden, aber auch mit der Dichte des Silikons und der Oberfläche des Füllstoffs, je höher die Dichte des Füllstoffs ist, desto mehr Silikon benötigt wird, desto höher ist der Kohlenstoffgehalt der Säule. Wenn verwendet2Füllstofffüllsäulen mit unterschiedlicher Dichte und dem gleichen Kohlenstoffgehalt werden sich deutlich unterscheiden. Daher reicht es nicht aus, das Verhalten der Chromatografie allein anhand des Kohlenstoffgehalts vorherzusagen.

(5) C18Silanisierungsmittel sind größer als2 nmMakromoleküle, die daher an benachbarte Silikonolbasen gebunden sindC18Silanisierungsmittel erzeugen starke Stereoresistenzen. Das Ergebnis führt zu einer großen Menge an verbleibenden Silikongruppen auf der Silikon-Oberfläche, die nicht mit dem silikanisierten Reagenz reagieren, und diese polaren Silikongruppen können unter bestimmten Chromatografiebedingungen mit alkalischen Verbindungen interagieren, was zu einer spitzenförmigen Verzögerung führt, die die Ergebnisse der quantitativen Analyse beeinflussen kann. Diese Probleme können zum Teil durch Alkylierung überwunden werden. Die Alkylierung ist eine unabhängige Reaktion, die in der Bindungsphase durchgeführt wird, um die Silikonöle auf der Silikonoberfläche zu reduzieren. Alkylierung mit kleinen Molekülen(wie Trimethylsilan)Reagenzien, deren Raumblockade weit kleiner ist alsC18Gruppen. Die meisten festen Phasen sind nur30%Abdeckbare Verbindungsstelle. Es wird berichtet, dass die höchste Abdeckung durch bestimmte sehr aktive Chemikalien und spezielle Reaktionsbedingungen erreicht werden kann.50%Ein gutes Verständnis der physikalischen Eigenschaften der Silikon-Bindungsphase hilft bei der Auswahl der geeigneten Chromatografie-Säulen in der Reaktion einer effizienten Flüssigchromatographie. Auf der Oberfläche.C18Die Säulen, obwohl die chemischen Funktionen der gleichen, aber in der Tat verschiedene MarkenC18Die Leistung der Säulen kann stark variieren, was zu unterschiedlichen Trennungsergebnissen führt.

Die Auswahl der Säulenfüllstoffe hängt von der Möglichkeit der chromatografischen Trennung ab, während die Auswahl der Säulenspezifikationen die Analysegeschwindigkeit, die Trennfähigkeit, die Detektionsfähigkeit und den Lösungsmittelverbrauch für jede Analyse direkt beeinflusst. Die Säulenspezifikationen umfassen zwei Aspekte: den Säuleninnendurchmesser und die Säulenlänge. Der Innendurchmesser der Säule, Analyse Typ ist in der Regel2～6 mm,Vorbereitungstyp20 mmErwachsene erreichbar80 mmSäulenlänge, analytisch5～30 cmVorbereitungstyp15～50 cmIm Allgemeinen beeinflusst der Innendurchmesser der Säule nicht das Verhältnis zwischen der Trennung und der Analysezeit. Heute hat sich die Säulentechnologie so entwickelt, dass Säulen mit unterschiedlichen Säuleninnendurchmessern die gleiche Leistung haben können. Säulen mit unterschiedlichen Innendurchmessern sind charakteristisch, für die gleiche Analysezeit und den gleichen Trennungsgrad verbrauchen Säulen mit größeren Innendurchmessern mehr Lösungsmittel als Säulen mit kleineren Innendurchmessern. Andererseits benötigen Säulen mit kleineren Innendurchmessern auch weniger Probenmengen für das gleiche Detektionssignal. Daher können kleine Innendurchmessersäulen bei Probengrößen* verwendet werden. Die Erhöhung der Säulenlänge kann den Trenneffekt verbessern, aber der Widerstand erhöht sich auch, und der Eingangsdruck muss erhöht werden. Der Zylinderdruck ist ein Haupthindernis für eine erhöhte Trennung und eine verkürzte Analysezeit. Die Trennung, die Analysezeit und der Säulendruck begrenzen sich gegenseitig, wählen Sie beide aus.3Auch ein Faktor ist ausgewählt. Lange Säulen können eine hohe Trennung geben, kurze Säulen können eine schnelle Trennung bieten, und wir können die geeignete Chromatografie-Säulen abhängig von der Probe auswählen.

C18Grundprinzipien der Wahl der Säulen:

(1)Die Wahl von Füllstoffen mit alkylierten Dichtungen verhindert die Verzögerung alkalischer Verbindungen.

(2)Wählen Sie eine Säule mit hohem Kohlenstoffgehalt, um den Retentionswert zu erhöhen.

(3)Wählen Sie eine kürzere Säule(wie15 cm，7,5 cm).

(4)Wählen Sie Füllstoffe mit kleinen Partikelgrößen.

(5)Für Komponenten mit großem Molekulargewicht werden Säulen mit großen Durchmessern ausgewählt.

Zwei,C18Täglicher Gebrauch und Wartung der Säulen

In der täglichen Trennungsanalyse wirkt sich die richtige Verwendung der Chromatografie direkt auf die Lebensdauer der Chromatografie aus. Im FolgendenC18Die Säulen sollten beim täglichen Gebrauch beachtet werden.

(1)Beim Entladen und Austausch der Säulen ist die Bewegung leichter und die Verbindung muss in Maße geschraubt werden. Starke mechanische Vibrationen müssen verhindert werden, um eine Lücke im Säulenbett zu vermeiden.

(2)Wenn das Gerät für die routinemäßige Analyse verwendet wird und die Probenarten begrenzt sind, aber die Anzahl der Analysen groß ist, können Sie für jede Klasse der routinemäßigen Analyse konfigurieren1Wurzeln spezielle Säulen, die dazu beitragen, die Lebensdauer der Säulen zu verlängern.

(3)Wenn eine Zylindertemperaturregeleinrichtung verwendet wird, sollte darauf geachtet werden, dass sie nach der Durchlaufphase erwärmt werden kann.

(4)Vor der Verwendung der Flussphase muss eine Entgasung durchgeführt werden, um die Kolonnenwirkung und die Auswirkungsprüfung zu vermeiden. Die Probenlösung muss angemessen vorbehandelt und filtriert werden, um die Verschmutzung und Verstopfung der Säulen zu reduzieren.

(5)Beim Austausch der Flussphase-Art sollte auf die gegenseitige Löslichkeit des Lösungsmittels achtet werden, um das Auftreten von Salzalysen zu verhindern.

(6)Der tatsächliche Betriebsdruck der Säule sollte unter dem Höchstdruck beim Füllen liegen, vorzugsweise unter der Hälfte des Höchstdrucks. Normalerweise nicht mehr als20 593.965～29 419,95 kPabei niedrigem Druck(≤14 709,975 kPa)Der Bereich der Verwendung ermöglicht es, dass die Säulen eine hohe Säulenwirkung über einen langen Zeitraum aufrechterhalten.

(7) C18Die Chromatografie-Säule gehört zu den nicht-polar gebundenen Chromatografie-Säulen, diepH-WertDer Wert muss streng kontrolliert werden.2～7Zwischen, um die Säulen nicht zu beschädigen.

(8)Nach Abschluss der Trennanalysearbeit sollte die Ausfallzeit nicht sofort beendet werden, das chromatografische Analysesystem muss rechtzeitig gespült werden, im Allgemeinen0,5 Stundenoben, um Verunreinigungen in der Chromatografie Säule zu entfernen.

(9)Wenn Salze in der Flussphase vorhanden sind, werden sie zuerst mit Wasser ausreichend gereinigt. Wenn es sich um Amine handelt(wie Trimethylamine oder Tetrabutylamine)Zur Flussphase hinzugefügt, um zu verwenden50%Methanol und0.05%Spülen Sie die Phosphorsäure-Lösung mit einem gemischten Lösungsmittel, nicht nur mit Wasser.

(10) C18In der Regel wird Methanol als Konservierungslösungsmittel verwendet, um zu verhindern, dass die Säulen durch trockene Risse beschädigt werden. Es ist streng verboten, Wasser oder Pufferlösungen für eine lange Zeit in der Chromatografie zu halten.

(11)Wählen Sie die geeigneteC18Schutzsäulen zum Schutz der Analysezüste vor Verunreinigungspartikeln und irreversiblen Adsorptionsstörungen. Die Partikelgröße der Füllung in der Schutzsäule sollte möglichst mit der Partikelgröße der Füllung der Analyse der Säule übereinstimmen.

(12)Die Aufbewahrungsdauer der Säulen sollte nicht zu lang sein. Kurzfristig nicht notwendig.C18Säulen, mit Methanol spülen30～60 MinutenAnschließend werden beide Enden der Säule verschlossen. Langfristige nicht verwendete Säulen, ist eine regelmäßige Spülung und erneute Dichtung; Zweitens nach dem Spülen, Säulen an beiden Enden montiert1Ein Behälter mit nur einer bestimmten Kapazität von Methanol(Nur ein Ende möglich.)zur Ergänzung der Verdampfung des Lösungsmittels in der Säule während einer längeren Lagerung.

Drei,C18Reparatur der Säulen

Chromatografie Säulen im täglichen Gebrauch, trotz des strengen Schutzes, Proben und Flussphase trotz der Vorbehandlung, aber nach einer langen Zeit der Verwendung, ist es immer noch schwierig * zu vermeiden, Säulen Verschmutzung, Festphasenverlust, Plattenknoten, Säulenbett Zusammenbruch und Säulen Effekt Abfall etc. Einige können durch Reparaturen teilweise wiederhergestellt werden.

1,Säulen Verschmutzung Regeneration Technologie

Nach der Verunreinigung der Chromatografie-Säulen kann mit dem geeigneten Lösungsmittel gespült werden, um die Säulenwirkung wiederherzustellen.C18Die konventionelle regenerative Waschmethode der Säulen ist: Methanol und TrichlorgianMethanol/ Wasser60 mlDurch die Chromatografie und Methanol60 mlNach der Archivierung der ausgeglichenen Chromatografie wird die Säulenwirkung wieder normal. Bei Bedarf entsprechend der Verschmutzung der Säulen(Organische Verschmutzung, Salzverschmutzung usw.)die Annahme0,05 Mol/L H2SO4und0,5 Mol/L H3PO4oder0,1 Mol/L EDTANatriumsalz spülen, dann mit Wasser spülen und schließlich mit Methanol versehen, nachdem die Chromatografie ausgeglichen ist. Für schwere VerschmutzungC18Säulen, können mit Wasser, Methanol, Chlorform und Ethan gespült werden, in der Reihenfolge umgekehrt und wieder gespült werden1jedes verwendete Lösungsmittel60 mlNicht mit dem Detektor verbunden, schließlich mit Methanol-Gleichgewicht-Chromatografie-Säule versiegelt.

2,Reparatur von Säulenverschmutzung

Wenn die Regeneration der Säulenverschmutzung nicht wirksam ist oder die bekannte Säulenverschmutzung schwer ist, kann die Säulenreparationsmethode verwendet werden, aber die Tiefe der Säulenverschmutzung sollte nicht überschritten werden.5 mmDie Methode besteht darin, eine spezielle kleine Schaufel zu graben, um den verschmutzten Teil zu entfernen, dann mit der gleichen Fixierphase und der gleichen Flussphase wie die Säulenfüllung zu vermischen, um eine Pulse zu bilden, und dann die Fixierphase sorgfältig in den ausgegrabenen Teil zu füllen.(Versuchen Sie, die nachgefüllte Befestigung so nah wie möglich an die Originaldichte zu bringen)Die Oberfläche kann repariert werden. Reparierte Säulen Wenn die Öffnung der Siebplatte an beiden Enden des Säulenkopfes konsistent ist, kann die Säulen mit der normalen Zeit umgekehrt werden, um die Dichte des Säulenbettes mit Hilfe der Flussphase zu wiederherstellen.

3,Reparatur von Kollaps

Der Zusammenbruch der Säulen hat viele Gründe. Wenn der Zusammenbruch weniger schwer ist, wenn die Siebplattenoffnung an beiden Enden des Zylinderkopfes konsistent ist, kann die Zylinde umgekehrt werden, um die Leistung wiederherzustellen. Wenn der Zusammenbruch schwer ist(5 mm)左右)Wenn die Reparaturmethode der Säulenverschmutzung verwendet werden kann, kann sie repariert werden.