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NanoCoulter überprüft fünf Methoden zur extrazellulären Veskeltrennung: Effizienz und Reinheit im Wettbewerb
Datum:2024-10-21Lesen Sie:0
In den letzten Jahren haben extrazelluläre Veskeln (EVs) aufgrund ihrer wichtigen Rolle in der biomedizinischen Forschung viel Aufmerksamkeit erhalten, die nicht nur eine entscheidende Rolle bei der interzellulären Kommunikation spielen, sondern auch ein großes Potenzial bei der frühen Diagnose und Behandlung von Krankheiten zeigen. Die effektive und qualitativ hochwertige Trennung dieser Bläschen bleibt jedoch eine Herausforderung. In einer jüngsten Studie führten die Forscher eine umfassende Bewertung der Qualität und Effizienz von fünf häufig verwendeten Methoden zur extrazellulären Veskeltrennung durch den NanoCoulter-Partikelanalysator, der auf der Resistance-Pulse-Sensing-Technologie (RPS) basiert.[1]Dies bietet den Forschern wertvolle Referenzen. Die entsprechenden Berichte wurden in der öffentlichen Nummer ausführlich gelesen, sieheQualitäts- und Effizienzbewertung von fünf Methoden zur extrazellulären Veskeln-Isolierung mit Resistenz-Impulsinduktion.
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Was sind extrazelluläre Veskeln?



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EVs beziehen sich auf die von den Zellen freigegebenen nanoskaligen Bläschen, die weit verbreitet in Körperflüssigkeiten wie Blut, Urin und Speichel vorkommen. Diese Bläschen sind reich an funktionellen Proteinen, kleinen Molekülen, Nukleinsäuren und anderen Metaboliten. EVs sind in fast allen Arten von Zellen und Körperflüssigkeiten vorhanden, einschließlich Plasma, Urin, Speichel und Muttermilch. Die Art und der Gehalt an Proteinen, Lipiden und miRNA, die von EVs getragen werden, spiegeln direkt den Typ ihrer Quelle wider. Die Forschung über EVs trägt zu einem besseren Verständnis der Zellphysiologie und Pathologie bei, und klinisch zeigt EVs nicht nur ein großes Potenzial für die Diagnose von Krankheiten, sondern könnte auch ein neues Werkzeug für die Drogenlieferung sein. Deshalb ist die Trennung und Charakterisierung von hochreinen EVs, die spezifische experimentelle Anforderungen erfüllen, besonders wichtig.


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Fünf Trennungsmethoden im Komplettvergleich



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In dieser Studie haben die Forscher eine detaillierte Bewertung von fünf gängigen EV-Trennungstechniken durchgeführt, darunter:

1.Konventionelle Differenzzentrifuge (UC)Drehzahlen über 30.000 U/min werden als Überdrehzentrifuge bezeichnet. Die Trennung von Proben unterschiedlicher Größe auf der Grundlage von Übergeschwindigkeitszentralisierung durch eine Methode zur allmählichen Erhöhung der Zentrifugalgeschwindigkeit kann eine hochreine EV effektiv isolieren, die oft als "Goldstandard" für die Extraktion von Nanopartikeln angesehen wird.

2.Ultrafiltration (UF)Die schnelle selektive Trennung von Proben durch die Filtration der Mikroporenstruktur der semipermeablen Membran ist für die Massenproduktion geeignet.
3.exoEasy Membranaffinität: Mit einer affinitätsmodifizierten Membran (Affinitätsmembran) für die Trennung des Mediums, einfache Bedienung.
4.qEV Säulenanalyse: Basierend auf der Dimensions-Blockierchromatographie, nach der Molekülgröße der zu messenden Komponente getrennt, geeignet für EVs mit gleichmäßiger Trenngröße.
5.ExoQuick Polymerabsetzungsmethode: Methode zur Änderung der Löslichkeit und Dispersionsfähigkeit von EVs durch Verwendung von Polymeren wie PEG, damit sie in einer Lösung resuminiert und dann durch Zentrifugierung ausgefällt werden. Diese Methode ist kurz, einfach zu bedienen und relativ mild für EV.

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TEM-Ergebnisse aus fünf Trennungsmethoden


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RPS-Technologie


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Die Resistance Impulse Sensing (RPS)-Technologie ist eine aufstrebende Technologie zur Charakterisierung von Nanopartikeln, die derzeit auch elektrisch basiert.Charakterisierung der PartikelMethoden. Die Größe und Konzentration der extrazellulären Veskeln und das Zeta-Potenzial werden durch die Messung von Stromveränderungen durch kleine Nanopore bewertet. Diese Methode hat die Vorteile der Präzision, Schnelligkeit, Einfachheit und hoher Empfindlichkeit, was sie zu einem idealen Werkzeug für die Bewertung der Qualität der Methode der Folliculentrennung macht.

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Partikelgrößendatenvergleich von fünf Trennungsmethoden


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Konzentrationsdatenvergleich von fünf Trennmethoden


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Zeta-Potenzialdatenvergleich von fünf Trennungsmethoden


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TrennungDas Geheimnis hinter dem Kampf um Effizienz und Reinheit


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Mit der RPS-Technologie analysierten die Forscher detailliert die Partikelgrößenverteilung, die Partikelkonzentration und die Reinheit der einzelnen Trennmethoden. Die Ergebnisse zeigten, dass, obwohl die Verwendung von Ultrafiltration, qEV-Säulenstratifizierung und ExoQuick-Methoden eine höhere Partikelkonzentration erzielen können, die herkömmliche Differenz-Übergeschwindigkeitszentrifugation die beste Reinheit aufweist.

PartikelgrößenverteilungUC, UF, exoEasy und qEV isolierten EV-Partikelgrößen waren konsistent, etwa 71 nm, während ExoQuick isolierte EV-Partikelgrößen etwas größer waren, durchschnittlich 77 nm.

PartikelkonzentrationUltrafiltration (UC) zeigt die höchste Partikelkonzentration mit 2,10 x 1012/mL, Die Partikelkonzentration der UC-Methode ist relativ niedrig, 7,33 x 10.10von / ml.

ReinheitDie UC-Methode hat die höchste EV-Reinheit mit einer Anzahl von Partikeln pro Milligramm Protein von 7,88 x 1011.


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EV-Reinheitsdatenvergleich von fünf Trennungsmethoden


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Wie wähle ich die richtige Trennmethode?


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Jede Trennungsmethode hat ihreVorteile. Die Ergebnisse zeigen, dass die Übergeschwindigkeitszentrifugation zwar komplex und länger betrieben wird, aber die Übergeschwindigkeitszentrifugation immer noch die erste Wahl ist, wenn das Experiment EVs mit höherer Reinheit erfordert; Allerdings für Anwendungsszenarien, die Effizienz und Massenproduktion verfolgen, bieten die Ultrafiltration und die qEV-Säulen-Stratifizierung eine schnellere Trenngeschwindigkeit und eine höhere Partikelkonzentration.

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Darstellung der Funktionsweise der NanoCoulter Partikel-Analyse-Plattform

Das Verständnis der Vorteile und Nachteile verschiedener Isolationsmethoden wird Forschern helfen, experimentelle Forschung und Anwendungsentwicklung im Zusammenhang mit extrazellulären Veskeln besser durchzuführen. Dieser Artikel umfasst eine umfassende Bewertung von fünf Methoden der extrazellulären Veskeln-Isolierung mit der RPS-Technologie, mit der präzisen Leistung von NanoCoulter, die wissenschaftliche Grundlage für die Auswahl der geeigneten Trennungstechnik für die Forscher bietet.

Die Wahl der geeigneten Trennungsmethode sollte die spezifischen Anforderungen der experimentellen Anforderungen berücksichtigen, einschließlich der Effizienz, Reinheit und Bedienungsfreundlichkeit der Trennung. Wählen Sie auch die geeignete Partikelcharakterisierungsmethode,In der oben genannten Studie zeigte NanoCoulter die folgenden Vorteile für die Charakterisierung von EV:


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Vorteil 1: Einzelpartikel-Detektion, Präzision ohne Störungen

NanoCoulter ermöglicht mit seiner fortschrittlichen RPS-Technologie die genaue Erfassung und Analyse jedes Nanopartikels.Stellen Sie sich vor, dass in einer komplexen Bioflüssigkeit jedes winzige EV, das durch Nanopore geht, seiner "vollständigen medizinischen Untersuchung" nicht entkommen kann.Brechen Sie das Phänomen der Verzerrung von kleinen Partikeln in den traditionellen optischen Methoden, die das Signal von großen Partikeln schützen.Vor allem bei EVs.Jede der Daten von Biofluidproben, unabhängig davon, ob sie Größe, Konzentration oder Zeta-Potenzial haben, stammt aus direkten Messungen einzelner Partikel, um sicherzustellen, dass die Ergebnisse wahrhaft und zuverlässig sind.Diese Genauigkeit kann die Forschung der Zellböskeln auf ein neues Niveau bringen!


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Vorteil 2: Hochpräzise, mehrparametrische Analyse


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NanoCoulter ermöglicht eine umfassende Analyse der Partikelgröße, der Partikelgrößenverteilung, der Partikelkonzentration und des Zeta-Potenzials von EVs.Genaue Partikelgrößenverteilungsanalysen helfen uns, die wahre Größenverteilung von EVs zu verstehen, wobei die Partikelkonzentration die Fülle und die Trennungsmasse von EVs widerspiegelt und das Zeta-Potenzial eng mit der Stabilität von EVs und der Dosierzielung von engineering EVs verbunden ist.Diese Daten geben uns umfassende Informationen über EVs und bieten eine solide Datenunterstützung für die nanopharmazeutische Forschung und klinische Anwendungen.


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Vorteil 3: Anpassung an komplexe Proben

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Im Gegensatz zu den herkömmlichen optischen Methoden, bei denen die ganzheitliche Analyse von Partikeln in einer Probe durchgeführt wird, leistet NanoCoulter eine ausgezeichnete Leistung in komplexen multidispersen Proben.Es ist in der Lage, Nanopartikel in niedrigen Brechungsraten, hohen Ionenkonzentrationen oder Flüssigkeiten mit geringer Flüssigkeit genau zu charakterisieren, um zuverlässige Ergebnisse auch in komplexen biologischen Flüssigkeiten zu erzielen und ist speziell für die biomedizinische Forschung geeignet.

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Vorteil 4: Schneller und einfacher Betriebsprozess

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Der NanoCoulter ist einfach und schnell zu bedienen und erfordert keine komplizierten Vorbearbeitungen der Proben, Heizmotoren und Kalibrierungsschritte.Jeder Nanoporchip wurde bei der Herstellung streng standardisiert und verifiziert, so dass der Kunde keine Standardprodukte verbraucht.Dies ermöglicht es den Forschern, Ergebnisse schneller zu erhalten und das Tempo der wissenschaftlichen Entdeckungen zu beschleunigen.

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Vorteil 5: weit verbreitet

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Der Anwendungsbereich von NanoCoulter geht weit über die Forschung von EVs hinaus.In den Bereichen Biomedizin, Materialwissenschaften und Umweltüberwachung zeigt es ein großes Potenzial und einen großen Wert.Durch seine hohe Präzision, hohe Stabilität und breite Anwendungsfähigkeit wird NanoCoulter allmählich zu einem leistungsstarken Assistenten, den Forscher benötigen.


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Referenzen:
[1] Yang M, Guo J, Fang L, et al. Qualitäts- und Effizienzbewertung von fünf extrazellulären Vesikel-Isolationsmethoden unter Verwendung der resistiven Impulserfassungsstrategie. Anale Methoden. 2024; 16(32):5536-5544. Veröffentlicht 2024 Aug 15. Doi:10.1039/d4ay01158a