Einführung

Eine Vielzahl von biologischen Anwendungen zur Überwachung der Zellzahl, der Reproduktion, der Gesundheit, der Fusion und der ZytotoxicitätNichtsMarken der ZellenErkennungDiese AnwendungenbrauchenEinsatz effektiver und zuverlässiger Lichtdurchlässigkeit(TL)Bildgebungs- und Analysefunktionen, die eine präzise Teilung zur Quantifizierung von Zellen und zur Bewertung verschiedener Zellreaktionen und -morphologien ermöglichen. Darüber hinaus ist die Kombination von hohem Kontrast transmittierendes Licht Bildgebung und fluoreszierend markierte Bildgebung für viele zellbasierte ErkennungAnalyseEs ist sehr wichtig.

MetaXpress 6.5Benutzerdefinierter ModuleditorTLDer Zellteilungsalgorithmus ist eine Art Bildgebung von Zellen mit durchlässigem Licht.undQuantitativ optimierte und zuverlässige Analysealgorithmen. Diese Anwendungsanleitung zeigtTLPraktizität und Genauigkeit der Zellteilung.Analyse und Quantifizierung durch den Vergleich der gesamten Zellzahl im durchlässigen Licht mit der Zellkernenzahl der fluoreszierenden FärbungCHOundHeLaAlgorithmus der Zellen (Abbildung) 1）.

Methode

gebenCHOundHeLaZellverdünnung in schwarz, untenTransparent.96Loch in der Platte, von der Platte obenStartplatte (in der obersten Zeile)Jedes Loch20，000Eine Zelle.）Drücken Sie jede Zelle1：2Der Anteil inAbwärts in der MikroporenplatteVerdünnung，6Ein Loch zurück.Zellkultur24StundehinterIn37°Cund5 % CO2 Verwendet in der AusbildungsboxHöchst 33342ZellenNukleare Farbstoffe Zellfärbung30Minuten. Und dann benutzen.4%Polyformaldehyde Fixierungszellen und mitDPBSWaschen Sie zweimal. durchImageXpressMikro®Hochwertige Bildgebungssysteme undMetaXpressSoftware zur Bildgebung von Zellen. verwenden10x Plan FluorDas Objektiv bildet ein Sichtfeld ab, das bis zu1500Eine Zelle. Durchlässiges Licht undDAPIFluoreszenzkanal für Aufnahmen mit Belichtungszeit von15 msund35 ms.

Vorteile

verwenden
Transmittierendes LichtbildpaarZielobjekteAufteilung und ZählüberwachungDurchlässiges LichtZellverpflanzung

Verwendung vieler AnalysemethodenBewertungTLAuswirkungen des Zellteilungsalgorithmus

Lernen Sie die verschiedenen Zelltypen und -größen kennenQuantifizierungswerkzeuge
Quantitative und analytische Werkzeuge

Bild 1：Einstellungen zur Analyse des durchlässigen LichtsAufnahmenderHeLaundCHOZellenBildbenutzerdefinierte Module. machenVerwendenHöchst 33342ZellenNukleare Farbstoffe färben die Zellen. verwendenDAPIKanäle undLichtdurchlässigkeit(TL)durchführenZellbildgebung,EinstellungBenutzerdefinierte Module zur Analyse und Quantifizierung von Zellen basierend auf transmittiertem Lichtbildgebung und Nukleofluorescenzbildgebung.

Im benutzerdefinierten ModuleditorEinstellungTLZellteilungsalgorithmus

Genaue Zellteilung ist wichtig für die Quantifizierung von Zellen, die durch durchlässiges Licht erfasst werden.fürTLZellenAufteilenAusgewählte ZellenAlgorithmenEinkannGenaue TrennungundErkennungHeLaundCHOZellen （Bild 2). Es gibt weitere Einstellungen zur Auswahl. ZellenAlgorithmenBoder ZellenAlgorithmenCkönnenEinzelnezur Analyse kleiner oder großer Zellen.In der Analyseim ModulSetup möglichNach Gesamtfläche filternkleiner als150 pM2Zellen (Bild) 3). dieseine EinstellungkönnenmitVermeiden Sie kleine tote Zellen, die umgeben werdenAlsLebende Zellen werden gezählt und analysiert.Außerdem,Einrichtete ZellenKernzählalgorithmus kannmitGenauquantitativHeLaundCHOderZellkern (Bild) 4).

kombinierenZellzahl und Fluoreszenzkernenzahl unter durchlässigem Licht

verwendenTLZellteilungsalgorithmusEinstellungKundenspezifische Module können genau aufgeteilt werdenHeLaundCHOZellen (Bild) 6）.Es gibt keinen statistischen Unterschied zwischen der Gesamtzellenzahl und der Kernzahl im durchlässigen Licht,ZeigeTLGenauigkeit des Zellteilungsalgorithmus (Abbildung) 7). Neben der ZellzahlTLDer Zellteilungsalgorithmus kann auch mehrereDatenzur Beurteilung der Zellreaktionen undZellenUnterschiedliche Merkmale der Form (Bild) 5). Zum Beispiel können Zellen und ZellenZielobjekteDie Gesamtzahl und die Durchschnittszahlen, Fläche, Stärke, Form, Höhe、Breite und verschiedeneandereunterschiedliche Lesungen. verwendenFilteroptionenDie Entfernung der umgebenden toten Zellen kann weiterOptimierungDieseProzess und reduzierenWenigerNotwendigkeit der Verwendung von lebenden Zellen oder ganzzelligen Färbung. Darüber hinaus Zellkernenfärbung und ZählungZellenÜberprüfenElefantenDer Einsatz von Algorithmen zeigt, dass durch die Analyse der durchlässigen Lichtbildgebung.

Bild 2. gebenTLDer Zellteilungsalgorithmus wird auf ausgewählteHeLaZellen übertragen Lichtbild.Im benutzerdefinierten Moduleditor können SiemitdurchEinstellungWählen Sie Quellwellenlängen und repräsentative Zelltypen PaareTLDer Zellteilungsalgorithmus wird konfiguriert. ZellenAlgorithmenEinkönnenmiteffektivBild erkennenderHeLaundCHOZellen.

Bild3. TLZellteilung undFiltereinstellungen nach dem FilternÜberlagerte Vergleichsbilder. Die minimale FlächeEinstellen auf150 μm2mitFiltern死Zellen.

Bild 4. verwendenZellenüberprüfungElefantenAufteilenModul fürFluoreszenzzellenkernbilddurchführenZählen.Die Quantifizierung der Zellen basierend auf der Nukleation der Zellen,machenVerwendenHöchst 33342Für den ZellkerndurchführenFärbung. Optimierung der Breite- und Intensitätsschätzungen auf Mindest- und Maximalbereite, die die lokalen Hintergrundparameter übersteigenErkennungAlleFeinZellkern.FeinZellkern blau (Bild links), AnalyseVerschleiernGelb (rechts).

Bild5. HeLaRepräsentative Bilder von Zellen,EinstellungBenutzerdefinierte Module BildanalyseMethode. blauVerschleiernVertreter verabschiedetTLVerwendung von ZellteilungsalgorithmenTLFilterAbdeckenVerschlossenes FilternEntdeckte Zellen, die gelb repräsentiert durch die Zählung überprüftElefantenAlgorithmus entdeckt den Zellkern. Die erforderlichen Messungen für benutzerdefinierte Module können auf der Registerkarte Messungen durchgeführt werdenEinstellung.benötigenDas zu messende Objekt wirdDefinitionfürkanndurchTLZellteilungAlgorithmenVerschleierte Objekte ausführen und die Zählungsüberprüfung auswählenElefantenAbdeckenverschlossenMessung jedesZielobjekteEigenschaften.

Bild6. HeLaundCHOBild der Zellen undAnwendungenTLZellteilung benutzerdefinierte ModuleNach der OptimierungBildanalyseErgebnisse.DAPIDer Zellkern ist blau(links)，In den BildernAnalyseMitteMaskeFür Gelb(rechts)Die Zellen im LichtHellblaue Maske. Durchgeführt10x Plan FluorObjektive inImageXpressMikroAufnahme von Bildern auf dem System und die Verwendung neuerTLEin benutzerdefiniertes Modul für die Konfiguration des Zellteilungsalgorithmus analysiert das Bild.

Bild 7. basierendTLZellteilung und NuklearitätAnzahl der ObjekteModulvergleichHeLaundCHODie Gesamtzahl der Zellen. Drücken1：2Verhältnis der verdünnten Zellen aus jedem Loch20，000Die Konzentration einer Zelle beginnt.

Schlussfolgerungen

MetaXpressBenutzerdefinierter ModuleditorTLDer Zellteilungsalgorithmus kannmitEffektive Quantifizierung und Analyse einer Vielzahl von Zelltypen und -größen.ImageXpress®MikrokonfokaleDie optimierte Trennfunktion durch das Drehscheibe-Kofokuss-Hochinhalts-Bildanalyse-System ermöglicht die Analyse von fluorescent unabhängigenZellenMorphologie. Quantifizieren von Zellen mit transmittiertem LichtbildkannFlexibilität der Testfähigkeit der Forscher. DieseAnwendungsbeschreibungDie beschriebene Methode zeigt sichTLDie Zellteilungsalgorithmen können für eine Vielzahl von Tests verwendet werden, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, Reproduktion, Zytotoxizitätsstudien und Transfektionen.