Einer,Wyatt Multi-Winkel-LaserstreuerVorbereitung vor dem Test

Lösungsmittelvorbereitung

Wasserphasesystem: Verwenden Sie ultrareines Wasser oder eine Salzlösung (ca. 1 L), fügen Sie 0,02% NaN3-Inhibitor hinzu und filtrieren Sie mit einer 0,22 μm Filtermembran.

Organisches Phasensystem: HPLC-Lösungsmittel verwenden und mit 0,22 μm Filtermembran filtern (das importierte Reagenz wird je nach der tatsächlichen Situation behandelt).

Probenvorbereitung

Zubereitungskonzentration nach Molekulargewichtsbereich (Quantierungsring 100 μL):

Molekulargewicht ~ 1000kDa: 0,5-1mg / mL

Molekulargewicht ~ 100kDa: 1-2mg / ml

Molekulargewicht ~ 10kDa: 3-5mg / ml

Molekulargewicht ~ 5kDa: 5-10mg / ml

Die Proben müssen mit einer 0,22 μm oder 0,45 μm Filtermembran gefiltert werden oder Verunreinigungen durch eine Zentrifugalbehandlung entfernen und möglichst eine Flusspassung verwenden.

Instrumentsprüfung

Stellen Sie sicher, dass das Netzkabelanschluss, der Netzschalter und der Schalter (für Netzkabelsignalanschlüsse) eingeschaltet sind.

2. Anlage und Gleichgewicht

Startreihenfolge

Schalten Sie die Pumpe, die Kolonnentemperatur (Einstellungstemperatur), das Probeneinsatzsystem (manuelle/automatische Probeneinsatzgeräte), den Differenz- oder UV-Detektor, den Viskositätsmelder, den Multi-Winkel-Laser-Lichtstreuungsdetektor und den Computer ab.

Systemspülung und -ausgleich

Öffnen Sie die Pumpe, spülen Sie das System mit ultrareinem Wasser für ca. 5 Minuten (Säuberpumpe) und schließen Sie das Säuberventil.

Verwenden Sie ein neues Flussphase-Spülsystem (ein organisches System verwendet die Flussphase direkt).

Die Durchflussgeschwindigkeit wird auf 0,1 mL/min eingestellt (wenn der Viskositätsdetektor angeschlossen ist, muss die Pumpe erst eingeschaltet werden, nachdem sie die Arbeitsfläche erreicht hat, und IP & DP im Zustand Purge On).

Wenn keine GPC/SEC-Säule im System angeschlossen ist, kann die Durchflussgeschwindigkeit direkt auf 0,1-1,0 ml/min eingestellt werden (ohne Viskositätsdetektor muss sich das Differenzdetektorventil im Zustand "Purge On" befinden).

Wenn die GPC/SEC-Säule im System angeschlossen ist, muss die Durchflussgeschwindigkeit mit 0,1 mL/min als Ausgangsgeschwindigkeit erhöht werden, um alle 1-2 Minuten 0,1 mL zu erhöhen und die Durchflussgeschwindigkeit auf 0,4-0,5 mL/min anzupassen, um das System vollständig auszugleichen.

Ausgleichszeit: Das Wasserphasensystem empfiehlt, einen Tag im Voraus zu spülen und auszugleichen und am nächsten Tag mit dem Test zu beginnen; Die Ausgleichszeit des organischen Phasensystems beträgt in der Regel 3-12 Stunden.

Testbetrieb und Datenerfassung

Systembalance und Basisstabilität

Sobald das System vollständig ausgeglichen ist, wird die Durchflussgeschwindigkeit schrittweise auf die Testdurchflussgeschwindigkeit angepasst.

Das Purge-Ventil des Differenzdetektors wird in den Zustand „Purge Off“ eingestellt, bis das Signal stabil ist.

Die Arbeitsweise des Viskosometers (Visco Star) ist im Anhang zu sehen, bis die Grundlinie stabil ist.

Test-Vorlage aufrufen

Die entsprechende Testvorlage wird in der Astra-Software aufgerufen (die von dem Installationsingenieur erstellte Vorlage/Methode wird empfohlen).

Datei → Neu → Experimentieren von Vorlage/Methode → Meine Vorlagen/Methoden, wählen Sie die entsprechende Vorlage aus.

Datei → Neu → Sample Set Template/blank sequence → Meine Vorlagen/Methode, wählen Sie die entsprechende Testvorlage aus.

Probenahme und Datenerfassung

Das Probeneinsatzventil wird vom Zustand „load“ in den Zustand „inject“ gedreht und durch das Probeneinsatzsystem probiert.

Die Astra-Software beginnt automatisch mit der Erfassung von Daten, die nach Abschluss der Erfassung anhalten oder manuell anhalten (Experiment → Stop).

Datenspeicherung

Wenn die Datenerfassung abgeschlossen ist, klicken Sie auf File → Save as..., benennen Sie die Datei und speichern Sie sie.

Vier,Wyatt Multi-Winkel-LaserstreuerDatenverarbeitung und Berichtsansicht

Datenverarbeitungsprozesse

Basislinienanpassung: Doppelklicken Sie auf Basislinie, markieren Sie LS 11 (90° Winkel), anpassen Sie den Endpunkt der Basislinie, um das Basislinienniveau zu gewährleisten, und klicken Sie auf OK / Anwendung, um zu speichern.

Fixieren Sie den Gipfel: Bewegen Sie die Maus zum Ausgangspunkt des Gipfels, halten Sie die linke Taste gedrückt und ziehen Sie zum Fallpunkt des Gipfels, lösen Sie die linke Taste, um den Gipfelbereich zu definieren, verfeinern Sie den Rand des Gipfelbereichs und klicken Sie auf OK / Anwendung zum Speichern.

Eingabe und Normalisierung von dn/dc-Werten: Geben Sie den dn/dc-Wert ein und wählen Sie normalisieren aus (keine Wiederholung erforderlich, wenn in der Vorlage Standardproben <50kDa wie BSA, dextran unter diesem System normalisiert wurden).

Bericht anzeigen: Nachdem Sie die oben genannten Schritte abgeschlossen haben, sehen Sie sich den Bericht an, um die Testergebnisse zu erhalten.

Korrektur (regelmäßig durchgeführt)

Verzögerte Volumenkorrektur: Die Korrektur des Volumens der Leitungen zwischen den einzelnen Detektoren, um die Ausrichtung der Spitzenpositionen sicherzustellen, wird in der Regel von einem Installationsingenieur durchgeführt und die Ergebnisse in einer Astra-Softwarevorlage gespeichert.

Korrektur des 90° Winkelsignals (Korrektur des Turfens): Erhalten Sie den Korrekturkoeffizienten für den Wert der 90° Winkelstreuungsintensität und den Spannungswert, empfohlen jährlich oder alle halbjährlichen Zeiten.

18-Winkelnormalisierte Korrektur: Kalibrieren Sie die anderen 17 Detektoren mit Standardprodukten von Rg < 10 nm, wie z. B. Dextran mit 30 kDa oder BSA im Rinderserum, im Winkel von 90°.