1、Verwendung:

Die Immunaffinitätssäule kann selektiv Traxoxin A in der medizinischen Probenflüssigkeit adsorbieren, was eine sehr gezielte Reinigungswirkung auf die Probe ausübt. Die nach der Säule gereinigte Probenflüssigkeit kann direkt für die HPLC-Analyse verwendet werden oder nach Stickstoffblaslösung mit LC-MS / MS getestet werden.

2、Übersicht:

Ohratoxin A (OTA), ein giftiger Stoffwechsel, der von bestimmten Bakterien der Genus Ohratoxin und Penicillin produziert wird, ist ein Pilztoxin mit starkem Nieren- und Lebergift und hat teratogene, mutationsverursachende und krebserregende Wirkungen.

3、Grundsatz:

Die Grundlage für die Bestimmung ist die Antigen- und Antikörper-Reaktion, der Antikörper wird in der Säule verbunden, die Probe wird nach der Extraktion und Filtration langsam durch die Trabamycin A-Immunaffinitätssäule, das Toxin in der Immunaffinitätssäule wird mit den Antikörpern gebunden, danach wird die Immunaffinitätssäule gewaschen, um andere unbedingte Substanzen zu entfernen, die nicht gebunden wurden. Tracytoxin A mit Methanol abwaschen und dann in das Analysegerät zur Detektion injizieren.

4、Verpackungszusammensetzung:

Jede Box enthält eine Immunaffinitätssäule von Tramycin A in verschiedenen Spezifikationen und eine Bedienungsanleitung.

5、Benötigtes Material, aber nicht in der Box verfügbar:

5.1 Ausrüstung und Verbrauchsmaterialien

--- HPLC / LC-MS / MS

--- Luftsteuerung

--- Luftpumpe

--- Waage

--- Hochgeschwindigkeits-Homogenizer (≥10.000/min) oder Schüttelbett

--- Zerkleinerer

--- Unterscheidungssieb

Dosierbehälter: 100mL/10mL

Spritze: 20 ml

Pipette oder Pipette: 1 ml

--- Homogene Tasse (oder 250 ml Flasche mit Konus)

---- Probeflasche

---- Flasche

5.2 Reagenzien

Methanol (CH)₃OH): Reine Analyse im Extraktionsprozess / Reine Chromatografie im Waschprozess

Natriumchlorid (NaCl): analytisch rein

Salzsäure (HCl): Reine Analyse

Natriumhydroxid (NaOH): analytisch rein

Natriumwasserstoffphosphat (NaH)₂PO₄• Reine Analyse

Kaliumdihydrogenphosphorsäure (KH)₂PO₄• Reine Analyse

KCl: Reine Analyse

Twain-20 (C)₅₈H₁₁₄O₂₆• Reine Analyse

Wasser (H)₂O): Destillationswasser oder Deionisierung

6、Hinweis:

Vor der Verwendung muss die Immunaffinitätssäule auf Raumtemperatur zurückkehren (22-25 ° C).

--- Affinitätssäule 2 ~ 8 ° C gelagert, darf nicht gefroren werden.

--- Bitte verwenden Sie die Immunaffinitätssäule innerhalb des Gültigkeitsdatums.

--- Es ist notwendig, die Flüssigkeit in der Säule zu entleeren.

- Probenmenge: Nach Bedarf kann die Probenmenge angemessen erhöht oder reduziert werden, beachten Sie, dass die Menge der Extraktionsflüssigkeit entsprechend geändert werden muss.

--- Säulenkapazität: Die Säulenkapazität beträgt 200ng, wenn der Gehalt des zu prüfenden Toxins in der Probe durch ein verdünnendes Vielfaches höher als die Säulenkapazität geteilt wird, muss das Volumen der oberen Flüssigkeit angemessen reduziert und erneut getestet werden.

---pH: Der pH der oberen Lösung der Affinitätssäule muss zwischen 6 und 8 liegen, wenn eine Abweichung von diesem Bereich den pH mit Salzsäure oder Natriumhydroxid regeln muss.

--- Die Einhaltung des Lösungsmittels und der Flussphase bei der Überprüfung an Bord kann die Auswirkungen der Lösungsmittelwirkung beseitigen.

--- Paramycin kann Krebs verursachen, sollte Handschuhmaske und andere Schutzwerkzeuge tragen.

--- Verwendete Behälter und Standardlösungen werden über Nacht in Natriumhipchloralösung (5% V/V) eingeweicht.

7、Zubereitung der Prüfflüssigkeit:

7.1 Extraktion

70% Methanol-Wasserlösung (V-Methanol: V-Wasser = 70:30): Nehmen Sie 700 ml Methanol und geben Sie deionisiertes Wasser zu 1 L.

7.2 Phosphatpufferlösung (PBS)

Wegen Sie 8,00 g Natriumchlorid, 1,20 g Natriumdihydrogenphosphat (oder 2,92 g Natriumdihydrogenphosphat), 0,20 g Kalimdihydrogenphosphat, 0,20 g KCL, lösen Sie es mit 900 ml Wasser auf, regeln Sie den pH mit Salzsäure auf 7,0 ± 0,1 und verdünnen Sie es mit Wasser auf 1000 ml.

7.3 Phosphat-Twain-Puffer (kurz PBST)

Nehmen Sie 1 ml Twain-20 und verdünnen Sie den PBS-Puffer auf 1000 ml.

8 undProbenbehandlung：

--- 3 g ± 0,01 g Probe (feste Probe muss zerkleinert werden und über 2 mm Probe-Sieb), 3 g Natriumchlorid in homogene Flasche, 60 ml Extrakt hinzufügen (siehe 7.1);

--- hohe Geschwindigkeit Homogenität (≥10,000r / min) 2min;

--- Zentrifuge 10min (8000r / min);

--- Nehmen Sie 5 ml Oberflüssigkeit in eine 50 ml Flasche, verdünnen Sie mit PBS-Puffer auf die Skala, mischen und Zentrifugieren Sie 15min (8000r / min);

--- Nehmen Sie 20 ml Oberflüssigkeit über Immunaffilitätssäule zu reinigen.

Verdünnung: 10

9、Betriebsverfahren:

9.1 Ähnlich

--- Entfernen Sie die Immunaffinitätssäule und durchdringen Sie das untere Ende der Spritze direkt in die Affinitätssäule

Ein quadratischer Stecker, um die Verbindung der Spritze-Zylinder und der Affinitätssäule zu vervollständigen, um sie auf einem pneumatisch gesteuerten Betriebsrahmen zu befestigen;

--- nach Entleerung der Flüssigkeit in der Affinitätssäule, nehmen Sie die Prüfflüssigkeit in Schritt 8 und injizieren Sie sie in die Spritze;

- Flüssigkeit mit einer Geschwindigkeit von 1 bis 2 Tropfen / Sekunde abfließen lassen;

9.2 Wäsche

--- Flüssigkeit abtrocknen;

--- Waschen Sie die Immunaffinitätssäule mit 10 mL LPBST-Puffer (siehe 7.3), 10 mL Wasser mit einer Durchflussgeschwindigkeit von 2 ~ 3 Tropfen / s;

9.3 Entfernung

--- nach dem Enttrocknen der Flüssigkeit, nehmen Sie die Spritze ab, trocknen Sie die Flüssigkeit in der Affinitätssäule, waschen Sie sie mit 1,5 ml Methanol ab, sammeln Sie die Enttrockneung in einer 2 ml Probenflasche, verdünnen Sie sie mit Wasser auf die Skala und mischen Sie sie;

--- Nach dem Filtern mit einem 0,22 μm Mikroporenfilter in die Probenflasche für die HPLC-Analyse übertragen.

* Die letzte Flüssigkeit muss vor jedem Aufnahme getrocknet werden.

10、Interpretation der Ergebnisse:

Tramboxin-A-Gehalt = Erkennungskonzentration x Verdünnungsvermöglichung

11 undLagerbedingungen und Gültigkeitsdauer：

Lagerbedingungen: 2 ~ 8 ° C.

Gültigkeitsdauer: Das Produkt ist 18 Monate gültig.