Die Probenahme von Mikroorganismen in der Luft beeinflusst direkt die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der mikrobiellen Prüfung und besteht darin, eine effiziente Erfassung von Mikroben in der Luft (z. B. Bakterien, Pilze, Viren usw.) zu gewährleisten, während sie möglichst aktiv bleiben (für die Weiterkultivierung oder Analyse). Im Folgenden werden spezifische Methoden zur Verbesserung der Probeneffektivität in Bezug auf die Vorbereitung der Probe, die Optimierung der Parameter, die Betriebsvorschriften, die Wartung der Anlage und die Unterstützungsmaßnahmen aufgeführt:
Vor der Probenahme: Definieren Sie die Anforderungen und bereiten Sie die Grundlage vor
Die Planung vor der Probenahme ist eine Voraussetzung, um die Wirkung zu gewährleisten, und ein gezieltes Programm muss in Verbindung mit den Testzwecken (z. B. Umweltüberwachung, Sterilisierungswirkungsbewertung, wissenschaftliche Analyse usw.) entwickelt werden.
1. vernünftige Auswahl der Probenahmertyp
Probenahmer mit unterschiedlichen Prinzipien eignen sich für verschiedene Szenarien und mikrobielle Eigenschaften, wobei die Wahl der passenden Art die Grundlage ist:
Impact-Probenahmer (z. B. Anderson-Kaskade-Impact-Probenahmer, Rift-Impact-Probenahmer): Mikroorganismen werden durch einen hohen Luftstrom auf ein Kulturmedium oder eine Auffangmembran getroffen und eignen sich für die Erkennung von lebenden Bakterien, die kultiviert werden müssen (z. B. Messung der Gesamtzahl der Kolonien), insbesondere für die Erfassung von Mikroorganismen mit verschiedenen Partikelgrößen (Kaskade-Impact kann die Verteilung der Aerosolpartikelgrößen unterscheiden).
Filter-Probenahmer (z. B. Membran-Filter-Probenahmer): Verwendung von Filtermembranen (z. B. Polycarbonatmembranen, gemischte Zellulosemembranen) zur Festnahme von Mikroorganismen, geeignet für hochempfindliche Tests (z. B. qPCR-Quantifizierung, Virus-Detektion) oder zur Analyse von Szenarien, in denen Mikroorganismen mit Partikeln assoziiert sind, aber beachten Sie die Auswirkungen des Filtermaterials auf die mikrobielle Aktivität (z. B. Auswahl eines Filterfilms mit niedriger Adsorption).
Sedentative Probenahmer (z. B. Flachplattenabsetzungsmethode): Einfache, aber ineffiziente Bedienung, nur geeignet für die grobe Umweltmikrobielle Untersuchung (z. B. tägliche Reinraum-Überwachung) und nicht empfohlen für die Probenahme von Mikroben in niedrigen Konzentrationen oder kleinen Partikelgrößen.
Zentrifugalprobenaufnahmer: Mikroorganismen durch Zentrifugalkraft trennen, geeignet für die Probenahme in beweglichen Szenarien (z. B. Werkstätten, öffentliche Plätze), der Vorteil ist, dass es klein und tragbar ist, aber die Erfassungseffizienz wird von der Luftstromstabilität stark beeinflusst.
2. Optimierte Auswahl des Auffangmediums
Das Auffangmedium (Medium, Filter, Absorptionsflüssigkeit) bestimmt direkt die Effizienz und Überlebensfähigkeit des Mikrobes:
Auswahl des Mediums: Wahl eines speziellen Mediums basierend auf den Zielmikrobiellen Eigenschaften (z. B. Nährstoff-Agal für die Detektion von Bakterien, Kartoffelglukose-Agal-PDA für Pilze, selektives Medium für pathogene Bakterien); Stellen Sie sicher, dass das Medium frisch ist (nach der Zubereitung nicht länger als 7 Tage bei 4 ° C gekühlt) und gleichmäßig dick ist (etwa 3-5 mm), um trockene Risse oder Verschmutzung zu vermeiden.
Filterfilm Auswahl: Vorzugsweise Filterfilm mit niedriger Adsorption und hoher Porosität (z. B. PTFE-Membran, Zellulosenitrat-Membran) verwenden, um den Verlust von Mikroorganismen durch statische Elektrizität oder Adsorption zu reduzieren; Die Filtermembranapertur muss der mikrobiellen Größe entsprechen (in der Regel 0,22 μm oder 0,45 μm, die Probenahme von Viren kann mit einer 0,1 μm Filtermembran ausgewählt werden).
Absorptionsflüssigkeitsauswahl: Bei der Verwendung von flüssigen Absorptionsproben muss die Absorptionsflüssigkeit die "Erfassungseffizienz" und die "Aufrechterhaltung der mikrobiellen Aktivität" berücksichtigen (z. B. mit physiologischem Salzwasser oder Puffern mit 0,05% -0,1% Twain 80, um die mikrobielle Ablagerung und Adsorption zu reduzieren; Virusprobenangabe kann BSA hinzufügen, um die Virustruktur zu schützen).
Vermeiden Sie Verschmutzung vor der Probenahme
Die mikrobielle Probenahme ist anfällig für die Auswirkungen äußerer Verschmutzung und muss die "sterile Umgebung" vor der Probenahme streng kontrolliert werden:
Probenahmer (z. B. Spritzkopf, Filterklammer, Probenahmerrohr) müssen im Voraus sterilisiert werden (Hochdruckdampfsterilisierung bei 121 ° C / 20 min oder Trockenhitzsterilisierung bei 160 ° C / 2 h; Kunststoffteile können 30 min UV-Sterilisierung mit 75% Alkohol abgewischt werden).
Auffangsmittel wie Kulturmedium, Filterfilm und andere müssen unter sterilen Bedingungen geladen werden (z. B. in einem ultrareinen Arbeitstisch), um Handkontakt oder Luftverschmutzung zu vermeiden.
Vor der Probenahme wird der Probenbereich "ausgeglichen" (z. B. Türen und Fenster 30 Minuten vor der Probenahme im Reinraum schließen, um zu vermeiden, dass die Bewegungen des Personals zu Störungen des Luftstroms führen).
2. Probenahme: Optimierung der Parametereinstellung und Betriebsspezifikationen
Die Parametersteuerung und die Bedienungsdetails im Probenaufnahmeprozess stehen im Mittelpunkt der Effizienzsteigerung und müssen dynamisch an das Probenaufnahmeprinzip und die Umgebungsbedingungen angepasst werden.
Optimierung der Kernparameter
Passen Sie die wichtigsten Parameter an, um die Effizienz der Erfassung zu maximieren, je nach Probenahmertyp und Prüfanforderungen:
Abnahmefluss: Der Durchfluss muss dem Probenahmer-Design entsprechen (z. B. Anderson Probenahmer empfiehlt einen Durchfluss von 28,3 L/min, Spaltprobe kann 10-30 L/min eingestellt werden). Ein zu niedriger Durchfluss kann zu einer unzureichenden Erfassung kleiner Partikelgrößen (< 5 μm) führen. Ein zu hoher Durchfluss kann Mikroben durch Luftstromschlag deaktivieren oder Mediumspritze verursachen. Es wird empfohlen, den Durchfluss vor der Probenahme mit dem "Durchflusskalibrator" zu kalibrieren (Fehlerregelung innerhalb von ±5%).
Probezeit: Es ist notwendig, die „Erfassungsmenge“ und die „mikrobielle Aktivität“ auszugleichen. Kurzzeitige Probenahme (5-15 min) ist geeignet für Umgebungen mit hohen Konzentrationen (z. B. Schadstoffwerkstätten), um eine übermäßige Feuchtigkeit im Medium oder eine übermäßige Ansammlung von Mikroben zu vermeiden; Lange Probenahme (30-60 min) ist geeignet für eine Umgebung mit niedriger Konzentration (z. B. Reinraum, Operationssaal), aber beachten Sie: Die Probenahme mit dem Impaktprobenaufnehmer sollte nicht länger als 60 min sein (vermeiden Sie die Trocknung des Kulturmediums), und der Filterprobenaufnehmer muss eine Verstopfung des Filterfilms verhindern (große Partikel können durch Vorfiltration entfernt werden).
Probenhöhe und Position: Bestimmung der Probenpunkte entsprechend dem Testzweck:
Umweltüberwachung: Die Probenahmehöhe beträgt 1,2-1,5 m (gleichmäßig mit dem Atemband des Menschen), und jede Region hat 3-5 Probenahmepunkte (gleichmäßig verteilt, um Wandecken, Lüftungen und Verschmutzungsquellen direkt oben zu vermeiden).
Beurteilung der Desinfektionswirkung: Die Probenahme muss vor und nach der Desinfektion an derselben Stelle erfolgen, um die Konsistenz des Kontrastes sicherzustellen.
Aerosolnachverfolgung: Probenpunkte können in verschiedenen Höhen (z. B. 0,5 m, 1,5 m, 3 m) eingestellt werden, um die vertikale Verteilung der Mikroorganismen zu analysieren.
Luftstromstabilitätskontrolle: Vermeiden Sie, dass der Probenahmer bei der Probenahme direkt mit der Lüftung, dem Lüfter oder der Bewegungsrichtung des Personals konfrontiert ist; Bei Bedarf schalten Sie die lokalen Belüftungseinrichtungen aus oder verwenden Sie eine Windschutzkappe, um die Probenabweichung durch Luftstromstörungen zu reduzieren.