Um die Genauigkeit des Probenbehandlungsprozesses des Luftmikrobiellen Probenahmers zu gewährleisten, liegt der Kern in der "sterilen Kontrolle des gesamten Prozesses, der Reduzierung von mikrobiellen Verlusten und der Normierung des Betriebsprozesses", von der Übertragung der Probe bis zur Berechnung der Ergebnisse muss jeder Abschnitt streng kontrolliert werden. Hier sind die konkreten Punkte:
1. Übertragung von Proben: Vermeidung von Verschmutzung und Verlust
Bei der Übertragung der Probe vom Probenahmer in den Bearbeitungsbehälter (z. B. Petrischalen, Zentrifugerrohre) müssen sowohl äußere Verschmutzung als auch der Verlust von Zielmikroben geschützt werden:
Sterile Umgebung:
Die Übertragung muss in einem Biosicherheitsschrank erfolgen und der Probenkopf, die Behälterfläche und die Hände des Bedieners vor dem Betrieb mit 75% Alkohol desinfiziert werden. Verwenden Sie sterile Schleifen und Pipetten (die Pistolenkopfe müssen sterilisiert werden) und vermeiden Sie den Kontakt mit nicht sterilen Bereichen (z. B. der Außenwand des Behälters).
Fehlerhinweis: Wenn Sie in einer offenen Umgebung arbeiten, mischen sich Bakterien in der Luft mit der Probe, was zu einer hohen Zahl von Kolonien führt, insbesondere bei Proben mit niedrigen Konzentrationen.
Vollständige Entfernung der Probenflüssigkeit:
Bei Impakt-, Sieb-Loch-Probenahmern muss der Probenkopf nach der Probenahme wiederholt mit steriler Waschlösung (z. B. 0,85% steriles physiologisches Salzwasser, Phosphatpuffer PBS) gespült werden (mindestens 3 Mal), um sicherzustellen, dass die anhaltenden Mikroben vollständig in die Waschlösung gelangen; Der Wirbel schwingung 1 ~ 2 Minuten (Drehzahl 2000 ~ 3000 rpm), brechen die Mikroben Aggregation, die Dispersion zu erhöhen.
2. Probenverdünnung: Gewährleistung der Genauigkeit der Verdünnungsvermöglichungen
Wenn die Konzentration von Mikroben in der Probe hoch ist, muss ein Gradient verdünnt werden, um eine zählbare Anzahl von Kolonien (30 bis 300 CFU / Scheibe) zu erhalten, können Fehler des Verdünnungsprozesses die Genauigkeit der Ergebnisse direkt beeinflussen:
Verdünnung und Behälter: 9 ml sterile Verdünnung (Fehler ≤ ± 0,1 ml) mit einem sterilen Gradientenverdünnungsröhrchen (z. B. Schraubendeckelrohr mit einer Kapazität von 10 ml) vorgeladen; Kennzeichnen Sie die Verdünnungsmethoden (10-1, 10-2 usw.) deutlich, um Verwechslung zu vermeiden.
Betriebsbedingungen:
Stellen Sie bei der Pipettierung sicher, dass die Kontaktfläche der Spitze des Schlauchs / des Pistolenkopfes 1 ~ 2 cm unter der Flüssigkeitsfläche liegt, um das Einatmen von Blasen zu vermeiden;
Wenn Sie von einer hohen Konzentration zu einer niedrigen Konzentration verdünnen, müssen Sie jeden Schritt mischen (10 bis 15 Mal mit der Hand reiben), um sicherzustellen, dass die Verdünnung gleichmäßig ist;
2 bis 3 parallele Proben mit dem gleichen Verdünnungsvervielfachen, um zufällige Fehler zu reduzieren.
Kultivierung und Zählung: Kontrolle der Kultivierungsbedingungen, Normierung der Zählungsnormen
Das Wachstum von Mikroben wird stark von den Kulturbedingungen beeinflusst und erfordert strikte Einheitsparameter:
Auswahl und Vorbereitung des Mediums:
Abhängig vom Typ des Zielmikrobies wählen Sie das Medium aus (z. B. Nachweis von Nährstoff-Agal für Bakterien, Pilz-Glukose-Agal-PDA für Kartoffeln), das Medium muss gründlich sterilisiert werden (121 ° C Hochdruckdampfsterilisierung 20 Minuten), und der pH-Wert erfüllt die Anforderungen (Bakterien pH 7,2 ~ 7,4, Pilz pH 5,6 ~ 5,8), um zu vermeiden, dass Mikroben aufgrund von Nährstoffmangeln oder Säure-Alkali-Unbehagen nicht wachsen können.
Kultivierungsbedingungen:
Temperatur: Bakterien 36 ± 1 ° C, Pilze 28 ± 1 ° C, der thermostatische Kühlraum muss täglich die Temperatur kalibrieren (Fehler ≤ ± 0,5 ° C);
Zeit: Bakterienkultur 48 ± 2 Stunden, Pilzkultur 72 ± 2 Stunden, um zu vermeiden, dass eine zu kurze Kultur zu Kolonien Leakage oder zu lange zu Kolonien überlappen führt.
Zählregeln:
Wählen Sie die Anzahl der Kolonien in 30 ~ 300 CFU (unter 30 Ergebnisse Fehler ist groß, über 300 Kolonien leicht überlappen);
Wenn der Unterschied in der Anzahl der parallelen Flächenplattenkolonien mit demselben Verdünnungsgrad mehr als das Doppelte beträgt (z. B. 20 und 50 Flächenplattenkolonien mit 10-3-Verdünnungsgrad), muss erneut untersucht werden;
Bei der Zählung müssen Zielmikroben und Schadstoffbakterien unterschieden werden (durch Kolonialmorphologie und Chromoskopie bestimmt werden können).
Qualitätskontrolle: Überprüfung der Zuverlässigkeit
Leere Kontrollversuche:
Bei jeder Probenverarbeitung wird die Probenahme festgelegt (der Probenahmer nimmt keine Luft auf, spült den Probenkopf nur mit der Abwasserung) und die Betriebslücke (direkt sterile Abwasserung mit der Kultur), wenn die Anzahl der leeren Kolonien > 5 CFU zeigt, dass es eine Verschmutzung gibt, müssen erneute Experimente durchgeführt werden.
Positive Kontrolle und Rückgewinnungsrate:
Die Probenahme wird regelmäßig mit Standardflüssigkeiten in bekannten Konzentrationen (z. B. E. coli, Staphylococcus aureus) simuliert, um die Recyclingrate zu berechnen (die Recyclingrate muss zwischen 70% und 130% liegen, sonst muss die Effizienz des Probenahmers oder der Verarbeitungsprozess überprüft werden).
Instrumentkalibrierung:
Der Probenahmer muss den Durchfluss regelmäßig kalibrieren (Fehler ≤ ± 5%), um Abweichungen des Probenvolumens aufgrund von Unzulässigkeit des Durchflusses zu vermeiden;
Geräte wie Pipettenpistolen und Ausrüstungsbehälter müssen jährlich zertifiziert werden, um sicherzustellen, dass die Parameter genau sind.