Vor einiger Zeit mit euch geteilt.PCRProzesskontrolle der ReaktionWir reden heute.PCRBetriebsmethoden. Praxis kann gesagt werden, die ganzePCRDie am leichtesten zu ignorierende, aber auch entscheidende Komponente des Experimentsprozesses.

Im Folgenden teilen wir einige unserer ersten Erfahrungen, die nur persönliche Meinung darstellen.

Zunächst die Systemkonfiguration (einzelne Komponenten getrennt, nicht vorgemischt). Berechnen Sie vor der Konfiguration das erforderliche Volumen der einzelnen Komponenten und teilen sie nach einer einheitlichen Konfiguration aus. Einige Klassenkameraden können schmerzhafte Reagentien haben, lieben die EinlochkonfigurationAber für Experimente ist die erfolgreiche Erreichung effektiver Ergebnisse auf einmal die größte Einsparung. Beachten Sie bei der Konfiguration des Systems die Reihenfolge, in der die einzelnen Komponenten hinzugefügt werden:dH₂O,Die übrigen Komponenten werden nach Größe hinzugefügt. Beim Ablauf wird der Saugkopf unter der Flüssigkeitsoberfläche eingesteckt,Wiederholtes Absaugen und Waschen von Pistolenkopfen nach der Entlassung der Flüssigkeit ist streng verboten (vor allem Anteile, Enzyme, Schablonen). Der Saugkopf hat eine gewisse Adsorptivität, die Flüssigkeit wird nach der Entlassung, wie die Schmierkomponente an der Stelle wird zurückgezogen, nach drei oder fünf Schmierungen kann die Zielkomponente schwere Verluste haben. Wenn Sie die Komponenten im Saugkopf vollständig verschieben möchten, ändern Sie die Position, um den Saugkopf zu schmieren. Auch die Mischung des Systems muss beachtet werden, es kann langsam mit einem Pipetten in der richtigen Menge geblasen werden5-10Zweitens kann man langsam nach oben und nach unten mischen; Wenn eine Mischung mit einem Wirbelsozilator erforderlich ist, sollte die Drehzahl so weit wie möglich gesteuert werden.600rpmIm Folgenden ist die Schädigung des Enzyms größer, wenn die Drehzahl zu schnell ist, und der Unterschied zwischen der Kurve und dem Sprung der Low-Copy-Schablone wird deutlicher sein. System aufgeteilt inpcrBeim Reaktionsrohr wird der Pipette gehaltenDie Operation des "Saugen eines Dutzendes" ist nicht einfach, Blasen zu erzeugen.

Noch einmal die experimentelle Umgebung. Es ist üblich, ein Reaktionssystem in einem ultrareinen Arbeitstisch zu konfigurieren und eine Vorlage im Biosicherheitsschrank hinzuzufügen. Innerhalb der Supernet-Plattform wird es keine großen Probleme mit dem regelmäßigen Betrieb geben; Biosicherheitsschränke sind eine schwere Region der Aerosolverschmutzung. Das Aerosol im Biosicherheitsschrank stammt hauptsächlich aus dem Abzugskopf nach der Probenahme, der Biosicherheitsschrank ist hauptsächlich durch den Zirkulationswind, die Restschablone des Abzugskopfes wird sich leicht mit dem Zirkulationswind durch die gesamte innere Umgebung des Sicherheitsschranks durchdringen, so dass jedes Mal, wenn das Experiment beendet ist, der Abzugskopf rechtzeitig verpackt werden muss, um den Sicherheitsschrank zu entfernen. Besonders wenn der gesamte Experiment am Nachmittag nicht abgeschlossen ist, muss die Leberexplosion weitergeführt werden, müssen Sie den Abfalleinkopf im Mülleimer reinigen, wenn niemand ihn verwendet, dann UV-Bestrahlung auswischen. Die Tischreinigung und die UV-Tötung nach dem Ende des Experiments sind grundlegend, müssen jedoch tatsächlich an Ort und Stelle umgesetzt werden.

Schließlich teilen Sie, wie ein Komplex-Loch-Experiment funktioniert, um die Bündelbarkeit der Kurve zu verbessern. Bei der Konfiguration von Reaktionslochern können die Vorlagen und das System aller Reaktionslocher gemischt und dann loch für loch aufgeteilt werden. Dadurch kann das Risiko eines Sprunglochs effektiv verringert werden. Bei geringer Kopienvergrößerung (CtWerte33Nachdem die Kurve springt), wird die Schablone nicht empfohlen, das Reaktionssystem zu mischen, und zu diesem Zeitpunkt ist die ehrliche, loch für loch hinzugefügte Schablone sicherer (Poisson-Verteilungseffekt ist offensichtlich).

Haben Sie zu diesem Zeitpunkt das Gefühl, dass Sie stark furchtbar sind und es kaum erwarten können, ein Experiment zu machen? Keine Sorge zuerst, die Arbeit, die Gutes tut, wird ihr Werkzeug bevorzugen. TechnologiekonzentrationPCRInstrument16Jahre, können Sie verschiedene Gradienten anbietenPCRInstrumente undQPCRHelfen Sie Ihrer Forschung!