NISTmAb ist ein weitgehend charakterisierter monokloner Antikörper, der als Muster in der Entwicklung neuer Technologien zur Charakterisierung von Proteinen verwendet werden soll. In dieser Applikationsliteratur verwenden wir SUPR-DSF, um Lektionen aus der Differenzial-Scan-Fluoreszenzmethode (DSE) von NISTmAb zu erhalten, und die Ergebnisse von Kairo werden mit der Life-Indicator-Scan-Thermomethe (DSO) verglichen. SUPR-DSE löste alle zwei Domänen von NISTAb ab: CH2(690C.CH3(830)) und die FAB-Domäne (94oC) mit hoher Auflösung. Darüber hinaus stimmt der gemessene Tm-Wert mit der Literatur überein. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Anwendung von SUPR-DSF einen einfachen Zugang zu hochwertigen Proteinstabilitätsinformationen ermöglicht.

Schlussfolgerung:

Der SUPR-DSF von Protein Stable kann die Entkettungstemperatur schnell und genau messen, indem er die Spitzenverschiebung der endogenen Proteinfluorescenz erkennt. Die Ergebnisse zeigten, dass SUPR-DSF in der Lage ist, genaue Entkettungstemperaturen zu erhalten, einschließlich ultrahoher Entkettungstemperaturen wie Fab-Domänen (94 °C). Dies hat auch bestätigt, dass SUPR-DSF auf der Grundlage der endogenen Fluoreszenzmethode konsistente Ergebnisse mit DSC erzielen kann. Der Vorteil des Tests mit einer 384-Loch-Platte besteht darin, dass der Durchfluss verbessert wird, die Bequemlichkeit erhöht und gleichzeitig der Probenverbrauch reduziert wird.

Methode:

NISTmAb in einer Konzentration von 1 mg/ml wird in einer L-Histaminbuffer mit pH 6 in 384-Loch-LPCR-Mikroporplatten mit einer Dosis von 104 L pro Loch hergestellt. Nach der Aufteilung wird die Mikroporplatte nach 60 Sekunden zentrifugiert und mit einer transparenten Folie versiegelt. Setzen Sie das kontinuierliche Mischverfahren in SUPR-DSF ein, um die Fluoreszenzkanale von 150 bis 105 ° C bei einer Erwärmungsrate von 10 ° C pro Minute zu messen, die Daten aus dem Fluoreszenzspektrum zu erhalten, berechnen sie mit der BCM-Methode und quantifizieren Sie die Spektralschwächung. Die BCM-Daten werden in eine Funktion der Temperatur verarbeitet und in eine primäre Ableitung für die Analyse umgewandelt. Berechnen Sie die Entkettungstemperatur basierend auf den Spitzen der Derivate. Alle Probenmethoden und -ergebnisse sind verfügbar.