illumina NextSeq 500/550 v2.5 Sequenzierungskit

Produktname:illumina NextSeq 500/550 v2.5 Sequenzierungskit(150 Zyklen) auf Lager

Artikelnummer: 20024904

Produktmarke: illumina

illumina NextSeq 500/550 Sequenzierungskit auf Lager， illumina Sequenzierungs-Kit, vor Ort verfügbar, beraten Sie sich willkommen

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Die zweite Generation der Sequenzierungstechnologie von llumina, die Synthetic Edge Sequencing (SBS), ist eine weit verbreitete Technologie der nächsten Generation der Sequenzierung (NGS), die für die Generierung von mehr als 90% der weltweiten Sequenzierungsdaten verantwortlich ist.

Die zweite Generation der Sequenzierungstechnologie von Illumina wird als Sequencing-by-Synthesis (SBS) bezeichnet. SBS umfasst hauptsächlich drei Schritte wie Basisleistung, Fluoreszenz-Anregung und Signalsammlung, Schneiden. Diese drei Schritte können wiederholt werden und im Zyklus durchgeführt werden. Jedem Zyklus wird einmal eine Basis gemessen. Um festzustellen, wie viele Basen (d.h. Leselänge), wie viele Zyklen. Die Anzahl der Sequenzierungszyklen kann in der Software festgelegt werden. Wie lange die Sequenzierung geeignet ist, hängt von der Art des Projekts und den Anforderungen ab. Meistens bestimmt das SR-Experiment (Single-End-Sequenzierung) 1x50 Basen und das PE-Experiment (Double-End-Sequenzierung) 2x150 Basen.

1 Basisverlängerung

Die in Illumina-Sequenzierungsreagenzien verwendeten dNTPs weisen gleichzeitig zwei modifizierende Gruppen auf: eine Fluoreszenzgruppe und eine reversible Terminationsgruppe. Die vier Basen A, G, C und T markieren jeweils vier verschiedene Fluoreszenzgruppen, die unter Laseranregung mit unterschiedlichen Wellenlängen Fluoreszenz mit unterschiedlichen Wellenlängen (d. h. Farben) emittieren können. Die fluoreszierende Farbe entspricht der Basisart, so dass die Basis basierend auf der Wellenlänge des angeregten Lichts erkannt werden kann. Die Endgruppen der vier Basen sind identisch. Aufgrund der Anwesenheit der Endgruppe können alle dNTP nur um eine Basis zu einem Zeitpunkt verlängert werden, unabhängig davon, wie lange die Reaktionszeit gegeben wird. Da die Endgruppe reversibel ist, kann die Endgruppe nach der Fluoreszenzsignalsammelung mit einem Scheirmittel entfernt werden, um die Base in ihren natürlichen verlängerbaren Zustand wiederherzustellen, dann kann der nächste Zyklus fortgesetzt werden, um eine Base zu bestimmen.

Die reversible Termination Group-Technologie ist ein wichtiges Merkmal der zweiten Generation der Illumina-Sequenzierung. Zusammen mit der PCR-Brückentechnologie bilden sie die beiden Säulen der zweiten Generation der Illumina-Sequenzierung und legen eine solide Grundlage für einen stabilen Zugang zu qualitativ hochwertigen Sequenzierungsdaten.

2 Signalversammlung

Die Sequenziergeräte der Serie HiSeq verfügen über zwei rot-grüne Laserröhre und zwei Farbfilter. Sie können beide kombiniert werden, um vier verschiedene Stimulierungswellenlängen zu bilden, die genau für die Stimulierung von A, G, C und T 4 Basisen verwendet werden.

Das Signal, das von den auf dem Cluster markierten Fluoreszenzgruppen unter Laseranregung erzeugt wird, kann mit einer Kamera aufgenommen oder gescannt werden. Die Scantechnik ist relativ schnell und wird von der X10-Serie verwendet. Da die FC-Fläche relativ groß ist und die obere und untere Oberfläche getrennt fotografiert werden müssen, ist der Aufnahmeprozess ziemlich zeitaufwendig. Für den klassischen HiSeq 2000 dauert das Fluoreszenzsignal, das durch einen Sequenzierungszyklus erzeugt wird, etwa 40 Minuten, bis das Foto aufgenommen wird, was länger dauert als die Sequenzierungsreaktion selbst.

3 Schneiden

Nachdem das Fluoreszenzsignal gesammelt wurde, schalten Sie den Laser aus und entfernen Sie die Fluoreszenzgruppen und die Endgruppen, die auf der Basis markiert sind, um das Sequenzierungsprodukt des Primärs zu verlängern. Beide modifizierenden Gruppen wurden entfernt, um einerseits die interferierende Fluoreszenz zu beseitigen und einerseits die Basis am Ende der Kette in ihren natürlichen erweiterbaren Zustand zurückzuführen, um die nächste Sequenzierungsrunde vorzubereiten.

Wiederholen Sie die Schritte der Synthese, der Anregung und der Sammlung, um die Sequenzierung der zweiten Basis durchzuführen.

Der Sequenzierungszyklus kann mehrmals wiederholt werden. Theoretisch kann es wiederholt werden, bis das Signal-Rausch-Verhältnis so gering ist, dass das Basissignal nicht effektiv erkannt werden kann. Da die luminescente Effizienz der Fluoreszenzgruppe kontinuierlich abnimmt und die Aktivität des Taq-Enzyms kontinuierlich abnimmt, ist die Anzahl der Sequenzierungszyklen in der Tat begrenzt und die große Anzahl der Wiederholungen ist mit der Rezeptur des sbs-Reagents verbunden. Die Anzahl der Sequenzierungszyklen kann während der Software-Einstellung künstlich gemacht werden, und diese Wiederholungszahl ist die Länge des Lesens jedes Sequenzierungssegments. Derzeit hat die Illumina-Plattform eine Vielzahl von Leselängen von 2x100 bp, 2x125 bp, 2x150 bp, 2x300 bp und so weiter, von denen 2x150 bp weit verbreitet wird.

Single-End-Sequenzierung: Single-End-Sequenzierung (Single-read) segmentiert zunächst die DNA-Probe zu einem 200-500bp-Fragment, wobei die Initialsequenz an ein Ende des DNA-Fragments angeschlossen ist und das Ende dann mit einem Anschluss verbunden ist, um das Fragment an der Flow-Zelle zu fixieren, um einen DNA-Cluster zu erzeugen.

Zwei-End-Sequenzierung: Die Zwei-End-Sequenzierung (Paired-End) Methode bezieht sich auf den Aufbau einer zu testenden DNA-Bibliothek, wenn die Sequenzierungs-Primärbindungsstellen an den Verbindungen an beiden Enden hinzugefügt werden, nach Abschluss der * Rad-Sequenzierung entfernen Sie die Schablonenkette der * Rad-Sequenzierung und führen Sie die komplementäre Kette zur Regeneration und Vergrößerung an der ursprünglichen Stelle mit dem Paired-End-Modul, um die Schablonenmenge zu erreichen, die für die zweite Runde der Sequenzierung verwendet wird, um die synthetische Sequenzierung

Eine Genomabibliothek ist eine Sammlung von DNA, die durch das Klonen des gesamten Genoms eines Organismus in DNA-Fragmente einer bestimmten Länge auf einen bestimmten Träger entsteht. Die Genomabibliothek ist je nach DNA-Quelle in Nukleare Genomabibliothek, Chlorogene Genomabibliothek und Mitochondriale Genomabibliothek unterteilt. Der Spender der genetischen Informationen, der zur Zeit der Konstruktion der Genom-Bibliothek genomische DNA ist, hat keine Entwicklungsphase und keine Gewebe-Organspezifizität und enthält den Klon aller kodierenden und nicht kodierenden Sequenzen der genomischen DNA in einer * Genom-Bibliothek; Jedes Gen eines biologischen Organismus hat seinen Klon in einer Bibliothek, die einen Abstandsabschnitt enthält, so dass die Bibliothek die gesamte strukturelle Information des Genoms wirklich anzeigt.

Genomische Bibliothek: Die gesamte genetische Information eines bestimmten Biogenoms wird über einen Klonversorger in einer Rezeptorklongruppe gespeichert, die die Genomabibliothek dieses Organismus ist.

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Produktname: illumina 20024904 NextSeq 500/550 v2.5 Sequenzierungskit (150 Zyklen)

Artikelnummer: 20024904

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