iQue Screener PLUS

Die iQue Screener-Serie von Inlicyt ist das Hauptprodukt von Inlicyt, das suspendierte Zellen und Mikroperlen mit dem Stream-Prinzip analysiert. Es ist ein Filter mit hohem Inhalt, der 96-Loch-Platten und 384-Loch-Platten analysieren kann. HD-Typ kann 1536-Loch-Platten analysieren, mit Erkennungsgeschwindigkeit und umfassender Analysesoftware. Die iQue Screener-Serie ist in drei Modellen erhältlich: iQue Screener, iQue Screener HD und iQue Screene.

Echte Lösung --Suspendierte Zellen/Mikroperlen hohen Durchfluss Screening
High-Content-Screening fördert die Entwicklung von Arzneimitteln durch die Bereitstellung umfangreicher Daten und ist ein regelmäßiger Prozess im Arzneimittelforschungsprozess. Allerdings ist das Screening mit hohem Inhalt auf klebende Zellen beschränkt und kann keine wichtigeren Forschungsbereiche erreichen. InliCyt in den USA hat das iQue Screener-Screening-System eingeführt, das suspendierte Zellen und Mikroperlen analysiert, um schnelle experimentelle Daten mit hohem Inhalt für die heutigen Screening-Experimente zu liefern.

• Erhöhung der Effizienz der Entwicklung von kleinen Molekülen-Medikamenten in Phänotyp-Screening-Experimenten durch eine hohe Durchfluss-funktionale Screening von suspendierten Zellen;
• Bessere Hybridom-Informationen aus Antikörperentwicklungsstudien wurden erhalten, indem Daten über Antigenbindungen und Kreuzreaktionen gleichzeitig erhoben wurden, und die Screening-Ziele blieben in ihrem natürlichen Konfigurationszustand.
• Gewährleisten Sie, dass Prognosen für mehr in vitro-Toxizität durch vollautomatische, multi-Endpunkt-Experimente entwickelt werden können, die die gesundheitlichen Eigenschaften von Tausenden unabhängiger Zellen pro Sekunde analysieren.

Integrierte Lösungen

Eine Screening-Lösung, die Instrumente, Software und Kits integriert, ermöglicht es Forschern, suspendierte Zellen mit der Geschwindigkeit und Effizienz des Screens zu analysieren.
iQue^TMScreenerWie funktioniert es
iQue^TMDas Screensystem ist eine leistungsstarke, auf einem Flow-Zytometer basierende Screenplattform, die einen kontinuierlichen Probenstrom an einen Detektor sendet, der mehrere Messungen aus einer einzelnen Zelle sammelt. Diese einzigartige Probenmethode transportiert Zellen oder andere Inhalte in kontinuierlichen, luftgetrennten Methoden von Mikroporenplatten in ein Flow-Zytometer, um eine genaue Verfolgung zu gewährleisten und Kreuzkontamination zu minimieren. Zui-Endergebnisse dauern nur wenige Minuten, nicht Stunden, und ermöglichen die Bildung von experimentellen Ergebnissen auf der Grundlage von Mikroporenplatten in Form einer leicht zu interpretierenden Wärmekarte.


iQue^TMScreenerEigenschaften
Höhere Experimentaleffizienz

• Filtern Sie Ihre Bibliothek in Tagen, nicht Monaten
• Ein Probenvolumen von bis zu 1 µL reduziert die Reagenzkosten
• Eine 96-Loch-Platte in 3 Minuten und eine 384-Loch-Platte in 12 Minuten laufen
• Integrierbar in Roboterarme und andere automatische Arbeitseinheiten
• Kompatible Zellen, Mikroperlen und deren Mischungen

Mehr physiologische Zusammenhänge

• Analyse von Mischungen verschiedener Zellen und Lesen einzelner Zelldaten
• Kann suspendierte Zellen und natürliche Objekte screenen
• Erfassung mehrerer Messungen mit vier Fluoreszenzkanälen
• Größe und Korngröße nicht markierter Objekte erkennbar

Stabilere Experimentergebnisse

• 6 Messbereiche für empfindliche und zuverlässige Testergebnisse
• 10.000 unabhängige Zellen für bessere Statistiken in jedem Loch

Einfacher zu bedienen

• Vollständige Workflow-Unterstützung
• Echtzeit-Dynamik analysieren
• Erstellen von sofortigen Berichten
• Einsatzspezifische Ready-to-Use-Kits

Ultra hoher Durchfluss, Ihr starker Helfer
Anwendung
Antikörperentwicklung (Antikörper Entdeckung）

• Hybridom Screening (Hybridom Screening)
• Bestimmung der Kreuzreaktivität der Spezies (Determining Species Cross-Reactivity)
• Bewertung der Produktivität von Antikörper-Sekretierenden Zelllinien
• Screening einer Human Germline IgG Library

In vitro Toxizitätstests (In Vitro Toxikologie）

• Quantifizierung der Mikrokerninduktion
• Erkennung von Apoptotischen Ereignissen (Detection of Apoptotic Events)

Phänotypisches Screening (Phenotypic Screening)）

• Screening für Verbindungen, die Myeloid Progenitor Cell Differentiation induzieren
• GFP-Expression-Screening in mehreren Zelllinien
  

Antikörperentwicklung
Das InliCyt-Screening-System in Kombination mit dem MultiCyt-Kit ermöglicht die gleichzeitige Detektion mehrerer Endpunkte und hilft bei der Identifizierung und Beschreibung von Antikörpern mit hohem Durchfluss in der Klonkollerie. Darüber hinaus ermöglicht die Fähigkeit, suspendierte Zellen zur Analyse anzuwenden, dass Zielstoffe unter ihrer natürlichen Konfiguration gescreen werden können, um bessere Informationen über Hybridome zu erhalten.
Hybridom-Screening
Die Kombination des InliCyt Screening Systems mit dem MultiCyt Hybridoma Screening Kit ermöglicht die Optimierung des gesamten Experimentsprozesses. Diese experimentelle Methode, die dann gemischt und nachgewiesen wird, eliminiert viele der vorhandenen Schritte im ersten Sieb, um die Bindungs- und Kreuzreaktionseigenschaften des Antigens gleichzeitig zu bewerten.

Zielzellen (nicht gekennzeichnet) und Kontrollzellen (Yellowgreen-markiert) werden gemischt und in Mikroporenplatten verteilt. Anschließend werden die getesteten Antikörper in der Hybridtumorbank hinzugefügt und inkubiert mit den detektierten Antikörpern mit roter Fluoreszenz. Die Mikroporenplatte wird dann mit iQue analysiert und gleichzeitig die Bindung von Antikörpern und Zielzellen in der Hybridomsuspension und der Kontrollzellpopulation nachgewiesen. Die Bindung an die Kontrollzelle zeigte kreuzreaktive und nicht-spezifische Bindung, die interne Kontrolle für jedes Loch des Experiments lieferte.

Experimente mit unbehandelten Zellen ermöglichen das Screening von Antikörpern an konfigurierten Epitopen, was bei ELISA und anderen Reinigungsproteinexperimenten nicht möglich ist, da Antigene während der Reinigung häufig verloren Falten und deaktiviert werden.
Bestimmung der Querreaktivität zwischen Arten
Die vielfältige Funktionalität des InliCyt-Screening-Systems ermöglicht die Integration der Speziesreaktivität von Antikörpern in den entwickelten Screening-Prozess. Das MultiCyt Cell Encoder Kit ermöglicht die gleichzeitige Detektion von fünf Zelllinien pro Loch. Dieses Experiment identifiziert leicht hoch geeignete Klone, die mit einer Vielzahl von Zielantigenen kreuzreagieren können, die stärkere Kandidaten für präklinische Studien sind.

Die parentalen Zelllinien und die genetisch modifizierten Zelllinien, die Mäuse, Ratten, Apen und menschliche Rezeptoren ausdrücken können, wurden getrennt markiert und in einer Probe gemischt. Unter ihnen dienten nicht transfizierte parentale Zelllinien als negative Bindungskontrollen für jede Probe. Die Probe wurde in eine 96-Loch-Mikroporenplatte für Antikörper-Bindungsexperimente hinzugefügt und anschließend zum ersten Sieb-Detektion von Antikörpern und zum zweiten Sieb-Detektion von Antikörpern hinzugefügt. Nach dem Ende des Experiments wurden die Zelllinien jeder Probe bestätigt und individuell bewertet, um eine bindende Affinitätskurve zu erzeugen. Das Experiment wurde in vier 96-Loch-Mikroporenplatten durchgeführt und erhielt 12 Antikörper unter vier verschiedenen Versuchsbedingungen, 8 Dosierungskurven, alle Experimente wurden innerhalb einer Stunde abgeschlossen.
Bewertung der Produktivität von Antikörper-Sekretion-Zelllinien
Die Multifunktionalität des InliCyt-Screensystems in Kombination mit dem Multi-Cyt IgG Count and Capture Kit erhöht die Chancen auf erfolgreiche Identifizierung von produktiven Zelllinien. In einem einzelnen Experiment wurden die Antikörperspiegel einzelner Zellen durch gleichzeitige Detektion der Menge an sekretierten Antikörpern, der Anzahl der Zellen und der Zellaktivität ermittelt.

Die in der Probe sekretierten Antikörper binden sich an die Erfassungsmikroperlen und werden durch fluoreszierend gekennzeichnete Testreagenzien untersucht. Fügen Sie einen spezifischen Farbstoff hinzu, der inaktive Zellen kennzeichnet, um das Verhältnis zwischen aktiven und inaktiven Zellen zu bestimmen. Analysieren Sie die Mikroporenplatte und jede Probe notiert gleichzeitig drei Lesungen: den Spiegel der sekretierten Antikörper, die Gesamtzahl der Zellen und den Prozentsatz der inaktiven Zellen. Auf diese Weise können die Antikörperspiegel, die jede Zelle ausscheidet, leicht berechnet werden.
Screening menschlicher FortpflanzungszellenIgGBibliothek
Das InliCyt-Screening-System ermöglicht die Entwicklung von Screening-Methoden, die für die Zelloberflächenexpression von Antigenen geeignet sind und mehrere Endpunkte erkennen können. Fabrus Inc. (San Diego, Kalifornien) entwickelte eine Fab-Bibliothek für menschliche Fortpflanzungszellen und führte ein direktes Screening von etwa 10.000 IgGs auf die Zielantigene auf der Oberfläche der Säugetierzellen durch. Es wird mit einem HTFC-Screensystem durchgeführt, so dass das Ziel-IgG in einer natürlichen Umgebung auf der Oberfläche der Lipidzellenmembran gescreent werden kann.

Die Zellen werden kurzzeitig mit GFP und dem Zielantigen transfektiert und jede Gruppe, die eines der drei verschiedenen Zielantigene ausdrückt, wird dann mit einer bestimmten Menge an Kalzium-Yellowgrosin als zellcodierender Farbstoff gekennzeichnet. Transfektierte Markerzellen werden physikalisch in einzelne Proben gemischt und auf Mikroporenplatten aufgeteilt, um die IgG-Bibliothek für diese Proben zu screenen. GFP-Signale werden verwendet, um zu bestätigen, ob Zellen Antigene ausdrücken, und die Zell-codierenden Farbstoffe ermöglichen es drei Zellen gleichzeitig Experimente durchzuführen, um jedes Ziel zu identifizieren und zu analysieren. GFP-negative Zellen dienen als interne negative Kontrollen, die das Zielantigen nicht ausdrücken. Die Bindung an IgG auf den Zellen wurde sekundär mit Fluoreszenz getestet und jede gefärbte Gruppe bewertet.
In vitro Toxizitätstests
Das Screensystem von IntlliCyt analysiert die gesundheitliche Leistung von Tausenden von Zellen in einer Lösung in einer Sekunde und bietet einen frühen Weg zur Genentoxizitätsscreening mit dem vollautomatischen vereinfachten Arbeitsablauf des MultiCyt-Kits.
Quantifizierung durch Mikrokerninduktion
In vitro Mikrokernexperimente mit einem InliCyt-Screening-System werden mit dem in vitro MicroFlow Kit von Litron (Rochester, NY) zuverlässig durch gentoxische Verbindungen verursachte Veränderungen in den Mikrokernen von suspendierten Zellen und adjacenten Zellen nachgewiesen. Bei der Kombination der 384-Mikroporenplatte mit der automatisierten Analyse können Experimente, die ursprünglich 16 Stunden dauerten, jetzt in nur 30 Minuten abgeschlossen werden, so dass Mikrokerninduzierte Experimente einen hohen Durchfluss auf Screeningen erreichen können.
Apoptose-Ereignisse erkennen
InliCyt-Systeme, Software und Anwendungs-Kits wurden optimiert und bestätigt, um multiple Apoptose-Endpunkte zu identifizieren und zu charakterisieren. Indikatoren wie Caspase 3, Annexin V, Mitochondriale Depolarisierung, Zellaktivität und Zellzahl werden gleichzeitig oder in verschiedenen Kombinationen überwacht, um eine bessere Korrelation zwischen den Endpunkten und eine vollständigere Apoptose-Diagramm zu erhalten. Komplexe Zellmische können auch überwacht werden, um unterschiedliche Effizienzdifferenzen zu erzielen.

Filtern von Phänotypen
Screening von Verbindungen, die die Differenzierung von Knochenmarkszellen induzieren
Das InliCyt-Screening-System kann biologisch relevante Verbindungen untersuchen, die die Differenzierungsstagnation von Protoknochenmarkzellen überwinden, und es ist leicht, Verbindungen zu identifizieren, die die Differenzierung von Stammzellen stimulieren können, während Verbindungen, die zytotoxizität zeigen, beseitigt werden.

Die Zelllinie stammt von genetisch modifizierten Mäusen, die GFP unter der Kontrolle eines Promotors ausdrücken: differenzierte Zellen äußern GFP (GFP +), undifferenzierte Zellen äußern nicht GFP (GFP-). Gleichzeitig wurden 350.000 Verbindungen auf die Zellaktivität, die Zellzahl und die grüne Fluoreszenz untersucht. Durch die Messung der Vorwärts-Streuung, der Seitenstreuung und der Zellzahl jedes Lochs können toxische Verbindungen ohne aktive Farbstoffe und gleichzeitig GFP + bestimmt werden. Plate Heatmaps untersuchen gleichzeitig Verbindungen, die Differenzierung induzieren (in GFP-positiven Zellen dargestellt), Zytotoxizität (in Zellverlusten dargestellt) und Verhältnisse mit mehreren Parametern (erstellt für die Festlegung von Screening-Kriterien).
Mehrfache Zelllinien.GFPAusdrucksfilterung
Kompatibel mit vielen bekannten GFP-Modellen ermöglicht das InliCyt-Screening-System eine phänotypische Analyse von hohen Durchflussgruppen auf suspendierten und klebenden Zellen. Zellen, die GFP ausdrücken, können in einer vorübergehend transfizierten Zellgruppe identifiziert und quantifiziert werden.

Die Vereinfachung des Phänotyp-Screening-Prozesses für Gruppen ermöglicht es, mehrere Endpunkte kontinuierlich zu analysieren, um mehr Daten zu erhalten (z. B. GFP-Signale von lebenden Zellen) oder parallel als einzelne Endpunkte zu analysieren (Prozentsatz des Zellallebens und Prozentsatz der Zelleixpression).

Für jede Probe der Mikroporenplatte können mehrere Daten biologischer Informationen zur Datenbewertung generieren. Lipofectamine (LF2K) Transfektionsreagens auf HepG2-Zellen dreimal (triplicate) Experiment.