Universal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger

Universal T-Carrier Kolonie PCR Identifizierung Kit

Universal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger

Katalognummer:42015

Zusammensetzung, Lagerung und Stabilität:

Speichern:-20 ℃ 保存。

Produktbeschreibung:

KolonienPCRIdentifizierung istTEine einfache und schnelle Methode zur Identifizierung eines positiven Klons (einschließlich der Einfügung von Fragmenten) zui nach der Verknüpfung des Trägers Klonen. Aber die Kolonien, die man auf dem Markt sehen kannPCRDie Identifizierungskits werden alleT3, T7oderSP6Warten Sie speziellTTrägerprodukte können nur für eine bestimmte Art verwendet werdenTIdentifizierung von positiven Klonen von Trägerverbindungen. Wenn Sie anders verwendenTTräger müssen gleichzeitig mehrere Identifizierungskits kaufen, was die Nutzungskosten erheblich erhöht. Das Unternehmen verwendet allgemeineTAllgemeine Entwicklung von TrägerprogrammenTTrägerkolonienPCRIdentifizieren Sie ein Kit, das Sie mit dem Kauf eines Kits für alle gängigen auf dem MarktTTräger(einschließlichpGEM，pUC，pBluescriptSerie)Identifizierung eines positiven Klons. Außerdem wird die AnnahmeT3, T7oderSP6Die Kolonie der VorläuferPCRDie Entfernung des Einfügplatzes von der Identifizierungskiste ist sehr kurz, so dass bei der Identifizierung100bpBei der Einführung eines linken oder kleineren Fragments sind die Primärdimerstreifen des negativen Klons und die Größe des positiven Klons-Verstärkungsstreifens unmöglich zu unterscheiden. Oft werden die Streifen des Primärdimers als positiv verstärkte Streifen angesehen, was zu falschen Positiven führt. Im Gegenteil verursacht es falsche Negativitäten. Diese Kit ist allgemeinTDer Abstand des Trägerprogramms, wenn der Abschnitt nicht eingesetzt wurde, beträgt mindestens150 bpOben, zusammen mit der Länge des Einsetzfragments, kann klar unterschieden werden, ob das Band, das das Einsetzfragment vergrößert, oder das Band, das das Primärdimer vergrößert. Vermeiden Sie falsch positiv oder falsch negativ, um die Genauigkeit erheblich zu verbessern.Ein von uns entwickeltes tragbares RohrPCR MasterMixVormischsystem, ohne dass Sie verschiedene Zutaten hinzufügen müssen, müssen Sie eine Kolonie direkt hinzufügen, nach1Etwa eine Stunde.PCRReaktions- und Elektrophoresietests erlauben die Ergebnisse der Identifizierung von rekombinierten Kolonien.

Erwartete Erweiterungen:

Hinweis:

1. Bei der Identifizierung einer Kolonie neu zu organisieren, sollte vor der Auswahl einer einzelnen Kolonie zuerst markiert werden, um die Verwendung nach der Identifizierung zu erleichtern.

2. Wenn Sie Kolonien wählen, sollten Sie eine Kolonie wählen, wählen Sie nicht zu viele Bakterien, um Auswirkungen zu vermeidenPCRErgebnisse.

3. EinstellungPCREntscheiden Sie bei der Prozedur die Verlängerungszeit basierend auf der Größe des eingefügten Segments, wenn die Größe des eingefügten Segments1 kbIm Folgenden verlängert die Zeit30-45In Sekunden kann die Verlängerungszeit in diesem Verhältnis erhöht werden, wenn der Abschnitt länger ist.

Betriebsschritte (mit25mlBeispielsweise können Kunden auch20mlDas System):

{C}1. Entsprechend dem folgenden System, um die Vorläufer enthalten1 x Taq MasterMixReaktionsflüssigkeit.

2. Nach der Nummerierung der Kolonie auf der über Nacht kultivierten Tablette, wählen Sie einen Teil der einzelnen Kolonie mit einem sterilisierten Pistolenkopf, um die oben genannte Reaktionsflüssigkeit hinzuzufügen, und mischen Sie die Kolonie vollständig in die Reaktionsflüssigkeit zu streuen.

Eine weitere negative Kontrolle ohne Kolonie kann eingestellt werden, um die Analyse der Ergebnisse zu erleichtern.

3. gebenPCRDas Rohr wird auf dem Thermocyclometer unter den folgenden Bedingungen reagiert, die empfohlenen Bedingungen sind wie folgt:

94℃10 Minuten

94℃30 Sekunden

55℃30 sec 30-33 Zyklen

72℃0,5-1 Minuten

72℃5 Minuten

Hinweis: Ändern Sie die Verlängerungszeit entsprechend der Größe des eingefügten Segments. Die präventive Zeit verlängert sich auf10Minuten, vor allem, um die Kolonie zu spalten, freizugebenDie DNAVorlagen.

Nach Beendigung der Reaktion5-10mlDirekte elektrophoresische Prüfung.

Hinweis: Wenn Bakterien schwer zu spalten sind oder Verunreinigungen vielfältig falsch negativ sind, versuchen Sie die folgende Methode, um die Spaltung freizugebenDie DNAspäter durchgeführt.

1. Kolonie auswählen 50ml DDWasser (oder10ml DDim Wasser), schütteln.

2. 99Grad,10Minute, um das Enzym in der Flüssigkeit zu deaktivieren und freizugebenDie DNA。

3. 12000rpmZentrifugieren1Minuten Entfernen Sie die Zellstücke.

4. EntfernenPCR，25ml PCRSystem nehmen5mlAnfang (Beginn)50ml DDWasser oder1mlAnfang (Beginn)10ml DDWasser) Vorlagen zu machen.

Universal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger