U-Blot® NC-Druckfolie (0,2 μm)

U-Blot ® NC-Druckfolie (0,2 μm)

U-Blot ® Die NC-Druckfolie ist eine reine, unbestützte Zellulosenitratmikropore, die zum Transfer von Proteinen und Nukleinsäuren aus verschiedenen Gelmatrizen verwendet wird.

Diese Transferdruckfolie verfügt über zwei Durchmesser: 0,2 μm und 0,45 μm und kann Substanzen mit verschiedenen Molekulargewichten binden:

• 0,45 μm: geeignet für die meisten Proteinproben und bietet eine höhere Detektionsempfindlichkeit.

• 0,2 μm Poren: Geeignet für Proteine mit einem Molekulargewicht unter 20.000, um kleine Proteine besser zu absorbieren und zu halten.

U-Blot ® Die Zugfestigkeit der NC-Druckfolie macht es weniger wahrscheinlich, dass sie reißt und reißt als andere Marken von NC-Membranen, die eine hohe Bindungskapazität an Proteine und Nukleinsäuren haben, so dass sie besser für die Immun- und Nukleinsäure-Detektion angewendet werden kann.

1. Isolieren Sie die Proteinprobe und den Proteinmarker mit SDS PAGE Gel.

2. Vorsichtig schneiden und das Gel platzieren und das Gel für 5 bis 20 Minuten in einem kalten Transferpuffer ausbalancieren.

3. Schneiden Sie die Folie und das Filterpapier in die geeignete Größe für das Gel. Die PVDF-Membran für 20 Sekunden in Methanol vorfeucht, bis ihr undurchsichtiges Weiß in ein gleichmäßiges halbdurchsichtiges Grau verwandelt wird und dann 1-2 Minuten in ultrareinem Wasser eingeweicht wird, um die Reagenzreste zu entfernen; Anschließend 2-3 Minuten in einem kalten Transferpuffer ausgeglichen, bis es verwendet werden kann.

Benutzen Sie Erinnerungen:

Nachdem die Membran befeucht ist, lassen Sie sie nicht trocknen. Wenn die Membran teilweise trocken wird (in undurchsichtiges Weiß), muss auch wieder befeuchtet werden.

4. Montage der Überdruckeinrichtung, Überdruckklemme Schwammmatte Filterpapier Vorfeuchte Membran schneiden gut und Vorfeuchte Gel-Filterpapier Schwammmatte Überdruckklemme, jede Schicht platziert, achten Sie darauf, Falten, Falten oder das Vorhandensein von Blasen zu vermeiden (Sie können die Blasen sanft drücken, damit jede Schicht eng passt)

5. Einrichten Sie die Betriebsbedingungen usw. nach den Anweisungen des verwendeten Überdruckgerätes und beginnen Sie mit dem Überdrucken.

6. Nach dem Überdruck entfernen Sie die Druckfolie und spülen Sie sie kurzzeitig in ultrareinem Wasser ab, um das Gel zu entfernen. Die Druckfolie kann in der Luft trocken gelagert werden oder sofort für die Immundetektionsschritte verwendet werden.

Einige der Schlüsselfaktoren für die erfolgreiche Durchführung von Protein-Druck-Experimente, wie z. B. Proteinkonzentrationen, geschlossene Flüssigkeiten und Antikörper-Konzentrationen, können in den folgenden Szenarien optimiert werden müssen.

Standardimmuntests

1. Wenn die Druckfolie getrocknet ist, beneuchten Sie sie erneut und einweichen Sie sie für 15 Sekunden in Methanol oder bis ihre Farbe von undurchsichtigem Weiß zu durchsichtigem Grau wechselt.

2. Spülen Sie die Druckfolie 1 Minute mit ultrareinem Wasser.

3. Legen Sie die Druckfolie in einen geschlossenen Puffer und rühren Sie vorsichtig, um 1 Stunde zu inkubieren.

4. Verdünnen Sie die Dosis in einer kommerziellen Antikörperverdünnung, einem Waschpuffer oder einem geschlossenen Puffer.

5. Legen Sie die Druckfolie in eine verdünnte Antilösung und inkubieren Sie sie bei Raumtemperatur für 1 Stunde (oder 4 ° C über Nacht) und rühren Sie vorsichtig.

Verwenden Sie einen Waschpuffer (einschließlich Tween) ®- 20 Puffer mit dem Oberflächenaktiven (TBST oder PBST)) waschen Sie die Druckfolie 3-5 Mal je 5 Minuten.

7. Verdünnen Sie die Dosis in einer kommerziellen Antikörperverdünnung, einem Waschpuffer oder einem geschlossenen Puffer.

8. Legen Sie die Druckfolie in eine verdünnte Enzym-Marker-II-Lösung und inkubieren Sie sie bei Raumtemperatur für 1 Stunde.

9. Waschen Sie die Druckfolie 3-5 mal mit einem Waschpuffer, je 5 Minuten.

10. Legen Sie die Druckfolie in einen sauberen Behälter und fügen Sie das entsprechende Prüfmittel hinzu.

11. Befolgen Sie die Anleitung zum Testen und inkubieren Sie 1-5 Minuten.

(1) Bei HRP- oder AP-chemischen Leuchtmitteln wird die Druckfolie einer Röntgenfilme ausgesetzt oder ein digitales Bild mit einem Bildsystem erhalten.

(2) Für die Farbdetektion fügen Sie das Reagenz hinzu und warten Sie, bis das Signal erscheint.