Ratten Melatonin (MT) ELISA Kit

Ratten Melatonin (MT) ELISA Kit

lDiese Kit ist für quantitative Tests in vitroSerum-, Plasma-, Gewebehomoplasma- und zugehörige FlüssigkeitsprobenMitteRatten Melatonin（MT(Inhalt).

lGültigkeitsdauer: 6 Monate

lAufbewahrungsbedingungen:2-8℃

lDiese Kit ist ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke bestimmt und darf nicht zur klinischen Diagnose verwendet werden.

Experimentelle Prinzipien

Die Kits werden mit einem Dual-Antikörper-Schritt-Centrophase-kombinierten Immunabsorptionstest (ELISA) durchgeführt. Die Antikörper, die durch Melatonin (MT) von Ratten gefangen wurden, wurden in die Mikroporen eingepackt, nachfolgend mit Proben, Standardprodukten und HRP-gekennzeichneten Detektions-Antikörpern hinzugefügt, nachdem sie wärmt und gewaschen wurden. Mit dem Substrat TMB wird TMB durch Peroxidase-Katalyse in Blau und durch Säurewirkung in endgültiges Gelb umgewandelt. Die Farbe war positiv korreliert mit Melatonin (MT) in der Probe. Messung der Absorption (OD-Wert) mit einem Enzym-Scaler bei einer Wellenlänge von 450 nm zur Berechnung der Probenkonzentration.

Probenbehandlung und Anforderungen

1. Serum：Die Vollblutproben, die in einem Serumscheiderrohr gesammelt wurden, werden über Nacht bei Raumtemperatur für 2 Stunden oder 4 ° C gelagert und dann für 20 Minuten 1000 x g zentrifugiert, um die Reinigung abzunehmen oder die Reinigung bei -20 ° C oder -80 ° C aufbewahren, aber wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.
2. Blutplasma：Die Probe mit EDTA oder Hepatin als Antikoagulant zu sammeln und die Probe in 2-8 ° C 1000 x g Zentrifuge für 15 Minuten innerhalb von 30 Minuten nach der Erfassung, kann nachgewiesen werden, oder die Oberfläche auf -20 ° C oder -80 ° C aufbewahren, aber wiederholte Gefrierschmelzen zu vermeiden.
3. Organisationsanordnung:Spülen Sie das Gewebe mit vorgekühltem PBS (0,01 M, pH = 7,4), entfernen Sie das restliche Blut (die rotten Blutkörperchen, die in der Homoplasme aufgelöst sind, beeinflussen das Messergebnis) und schneiden Sie das Gewebe nach dem Wiegen. Zerkleinertes Gewebe mit dem entsprechenden Volumen von PBS (in der Regel im Gewichtsvolumenverhältnis von 1: 9, zum Beispiel 1 g Gewebeprobe entspricht 9 ml PBS, das spezifische Volumen kann entsprechend den Anforderungen des Experiments angepasst und aufgezeichnet werden. Es wird empfohlen, einen Protease-Inhibitor in PBS hinzuzufügen) in einen Glas-Homogenator hinzuzufügen und vollständig auf Eis zu schleifen. Um die Gewebezellen weiter zu spalten, können homogene Slurms mit Ultraschall gebrochen oder wiederholt gefriert werden. Anschließend wird die Lösung in 5000 x g zentrifugiert für 5 bis 10 Minuten, um die klare Detektion zu entnehmen.

Zellkultur oder andere biologische Proben:Bitte 1000 × g Zentrifugieren für 20 Minuten, entfernen Sie die Reinigung erkennbar, oder die Oberfläche auf -20 ° C oder -80 ° C aufbewahren, aber wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

Hinweis: Die Blutholyse der Probe beeinflusst das Ergebnis des nachfolgenden Tests, daher ist die Blutholyse der Probe nicht geeignet, diesen Test durchzuführen.

Reagenzien und Ausrüstung, die nicht zur Verfügung gestellt werden

• Enzymmetrie (450 nm)

• Präzisionsproben und Pistolenkopfe: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

• 37 ° C Thermostat

• Destillationswasser oder deionisiertes Wasser

Zusammensetzung des Kits

Ratten Melatonin (MT) ELISA KitBereitAnmerkungen：

Die Standardkonzentration lautet: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 pg/mL

2. Nach einer großen Anzahl normaler Probenprüfungen liegen die normalen Konzentrationswerte der Probe im Testbereich, der im Rahmen des Experiments zur Verfügung gestellt wird, und 50 μL Proben können direkt auf der Probe genommen werden. Wenn ein Teil der Probenwerte die Zui-Standardkonzentration übersteigt, wird die Probe mit einer verfügbaren Probenverdünnung entsprechend verdünnt und dann experimentiert.

Hinweise

• Die Temperaturzucht erfolgt streng nach der festgelegten Zeit und Temperatur, um genaue Ergebnisse zu gewährleisten. Alle Reagenzien müssen vor der Verwendung auf Raumtemperatur von 20-25 ° C gelangen. Unmittelbar nach dem Gebrauch kühlen und aufbewahren.

• Fehlerhaftes Waschen kann zu ungenauen Ergebnissen führen. Stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit im Loch so gut wie möglich getrocknet wird, bevor Sie den Substrat hinzufügen. Lassen Sie die Mikroporen während der Wärme nicht trocknen.

• Entfernen Sie Flüssigkeiten und Fingerabdrücke, die auf dem Boden der Platte verbleiben, sonst beeinflussen Sie den OD-Wert.

• Die Substrat-Display-Flüssigkeit sollte farblos oder sehr hell sein, die bereits blaue Substratflüssigkeit kann nicht verwendet werden.

• Vermeiden Sie Kreuzkontamination von Reagenzien und Proben, um falsche Ergebnisse zu vermeiden.

• Vermeiden Sie die direkte Beleuchtung durch starkes Licht während der Lagerung und der Wärme.

• Nach dem Ausgleich auf Raumtemperatur öffnen Sie die Dichtungsbeutel, damit sich Wassertropfen auf der kalten Platte kondensieren.

• Kein Reaktionsmittel kann mit Bleichlösungsmitteln oder starken Gasen in Berührung kommen, die von Bleichlösungsmitteln ausgestrahlt werden. Jeder Bleichbestandteil beeinträchtigt die biologische Aktivität des Reagents in der Kit.

• Veraltete Produkte können nicht verwendet werden.

• Wenn eine Übertragung der Krankheit möglich ist, sollten alle Proben gut verwaltet werden und die Proben und die Testgeräte gemäß den vorgeschriebenen Verfahren behandelt werden.

Reagenzbereitung

Das Entfernen der Kits aus der Kühlumgebung sollte nach Raumtemperatur ausgeglichen werden.

20-fache Verdünnung des Waschpuffers: Destillationswasser wird 1: 20 verdünnt, d. h. 1 Anteil 20-fache Waschpuffer plus 19 Anteile destilliertes Wasser.

Betriebsschritte

1. Entfernen Sie die gewünschten Platten aus dem Aluminiumfoliebeutel nach 20 Minuten Raumtemperatur-Gleichgewicht und legen Sie die restlichen Platten mit einem selbstdichtenden Beutel bei 4 ° C zurück.

2. Setzen Sie Standardbohrungen und Probenlöcher, Standardbohrungen mit jeweils unterschiedlichen Konzentrationen von 50 μL Standardprodukt;

3. 50 μL Probe in das Probenloch hinzufügen; Keine leeren Löcher.

4. Zusätzlich zu den leeren Löchern, Standard-Probe-Löcher und Probe-Löcher mit jedem Löcher 100 μL von Moringa-Wurzelperoxidase (HRP) gekennzeichneten Detektions-Antikörper hinzugefügt, das Reaktionsloch mit einer Dichtungsmembran versiegelt, 37 ° C Wasserbad oder Thermostat 60 min.

5. Entfernen Sie die Flüssigkeit, saugen Sie das Wasser auf dem Papier trocknen, füllen Sie jedes Loch mit Waschflüssigkeit (350 μL), lassen Sie 1min, entfernen Sie die Waschflüssigkeit, saugen Sie das Wasser auf dem Papier trocknen, so wiederholen Sie die Platte 5 mal (auch mit einer Plattenwaschmaschine).

6. Zu jedem Loch werden 50 µL von Substraten A und B hinzugefügt und 15 min bei 37 ° C mit Lichtschutz inkubiert.

7. 50 μL Endflüssigkeit pro Loch hinzugefügt und die OD-Werte der einzelnen Löcher bei einer Wellenlänge von 450 nm innerhalb von 15 min gemessen werden.

Berechnung der Experimentergebnisse

Mit dem OD-Wert des gemessenen Standards als horizontale Koordinate, der Konzentrationswert des Standards als longitudinale Koordinate, zeichnen Sie die Standardkurve auf dem Koordinatenpapier oder mit der entsprechenden Software und erhalten Sie die Gleichung der linearen Regression, ersetzen Sie den OD-Wert der Probe durch die Gleichung und berechnen Sie die Konzentration der Probe.

Leistung der Kit

• Testbereich: 2,5 pg/mL – 80 pg/mL.

• Empfindlichkeit: Niedrige Messkonzentrationen unter 0,1 pg/ml.

• Spezifische Eigenschaften: Keine Kreuzreaktion mit anderen löslichen Strukturanalogen.

• Wiederholbarkeit: Der Variationskoeffizient innerhalb der Platte ist kleiner als 10%, der Variationskoeffizient zwischen den Platten ist kleiner als 15%.

Erklärung

Da die bestehenden Bedingungen und das wissenschaftliche und technische Niveau nicht die vollständige Identifizierung und Analyse aller von allen Lieferanten gelieferten Rohstoffe ermöglichen, kann dieses Produkt ein gewisses Qualitätsrisiko darstellen.

• Das Endergebnis des Experiments ist eng mit der Wirksamkeit des Reagents, dem entsprechenden Betrieb des Experimentierers und der aktuellen experimentellen Umgebung verbunden. Bitte stellen Sie sicher, dass eine ausreichende Sicherung der Proben vorhanden ist.

• Es können kleine Unterschiede zwischen den gleichen Produkten in verschiedenen Chargen auftreten, wie z. B. die Detektionsgrenzen, die Empfindlichkeit und die Anzeigezeit der Farbe usw. Bitte befolgen Sie die Anleitung im Test-Kit für den experimentellen Betrieb, die elektronische Anleitung der Website dient nur als Referenz.

• Nur die vollständige Verwendung des mit diesem Kit verbundenen Reagents kann die Wirkung der Prüfung garantieren und Produkte anderer Hersteller können nicht gemischt werden. Testergebnisse* werden nur erhalten, wenn die experimentellen Anweisungen dieses Kits strikt eingehalten werden.

• Das Unternehmen ist nur für das Kit selbst verantwortlich, nicht für den Probenverbrauch, der durch die Verwendung des Kits verursacht wird, bitte berücksichtigen Sie vor der Verwendung die mögliche Menge der Probe und behalten Sie ausreichende Proben vor.

• Gewebehomologation oder Zellextrakte, die mit einem chemischen Lyst hergestellt werden, können durch die Einführung bestimmter Chemikalien zu einer Abweichung der ELISA-Ergebnisse führen.

• Wenn die Probe für die Zellkultur klar ist, kann es eine nicht erkennbare Situation geben, da diese Probe mehr Störungen hat, wie z. B. Zellstand, Zellzahl, Probenahme usw.

• Bestimmte natürliche oder rekombinante Proteine, einschließlich Protokern- und Eukaryorecombinanten, können nicht nachgewiesen werden, weil sie nicht mit den in diesem Produkt verwendeten Detektions- und Erfassungsantikörpern übereinstimmen.